HEMATOCRITO

HEMOGLOBINA.

TIPOS DE HEMOGLOBINA
Hb Gower I: ( 4 cadenas psilon ) o Hb primitiva
embrionaria, la podemos encontrar durante la
hematopoyesis en el saco vitelino en la 5ta y 6ta
semana de gestacin
Hb Gower II: La encontramos en la 4ta y 13
semana de gestacin en el saco vitelino, tiene
dos cadenas Z y dos cadenas psilon (Gower I)
Hb Portland: se encuentra en la 4 13 semana en
el saco vitelino esta formada por dos cadenas Z y
dos alfa

Hb Fetal (HbF): (gamma) se forma durante la

eritropoyesis del hgado y la medula sea en el
feto constituye 90-95% de la produccin total de
Hb. A las 34 semanas de gestacin; constituye
menos del 2% de HbA.
Constituye de 80-95% de la produccin de Hb de
34-36 semanas de gestacin

Hb. Adulto (HbA): formada por dos cadenas alfa y

dos Beta. Es la mas importante aparece a la 9
semana
de gestacin; pero la sntesis de
cadenas Beta no excede las cadenas gamma
(fetal) hasta despus del nacimiento.
La HbA aumenta con la edad y alcanza los valores
normales del adulto al final del 1er ao.

DETRMINACION DE
HEMOGLOBINA

Fundamento del mtodo

Este mtodo consiste en efectuar una dilucin
exacta de sangre en una solucin que contiene
ferrocianuro
de
potasio.
Que
convierte
la
hemoglobina en Cianametehemoglobina y se
compara colorimtricamente con una solucin
patrn de Cianametehemoglobina exacta y estable.

DETERMINACION DE HEMOGLOBINA
METODO:

1- Se mide exactamente 5 mL. de solucin de color

cianametahemoglobina en un tubo 13x100mm. Limpio y
seco.

2- con una pipeta tipo Sahli aspirar 0.02 ml. De sangre

procedentes de una puncin dactilar, o venosa recogida
con anticoagulante

3- Verter esta sangre dentro del tubo conteniendo la solucin

diluyente de color, mezclar sangre y solucin soplando la pipeta
desde el fondo del tubo, lavar varias veces la pipeta en la
mezcla

4- mezclar bien la muestra y esperar 5 minutos

para hacer la lectura.

5-Transferir a la cubeta de lectura y leer en el

espectrofotmetro a 540nm. ( primero calibrar con
agua destilada y blanco de reactivo llevar a cero.)

6- Leer en la curva estndar la concentracin de la

muestra desconocida o multiplicar por el factor de
calibracin.

CALCULO DE FACTOR DE CALIBRACION

UTILIZANDO UN PATRON DE CONCENTRACIN
CONOCIDA

Mezclar, y
esperar 5
minutos y
leer las
absorbancias
1- 5 ml. de
2- 0.02 ml. de
de los
EN UN TUBO
reactivo de
solucin
patrones a
DE ENSAYO
trabajo
patrn Hacer
540 nm. Filtro
COLOCAR:
(Cianametahe
en triplicado
verde
moglobina)
llevando el
aparato a
cero con
Siempre esperar a que el reactivo este a
agua
temperatura ambiente antes de iniciar a trabajar destilada.

FACTOR DE
CALIBRACION (FC)

FC = CONCENTRACION DE DEL ESTNDAR

PROMEDIO DE LECTURAS DEL PATRON

Hb gms./dL. = ABS. DE LA Mx DESC. X EL FC

Curva de calibracin para

Hb
Se toma un Kit. de calibracin con estndar de CC.
Normal, de una CC. Alta y otro de una CC baja, y se
miden las absorbancia de cada una de ellas o se
toma un Standard de CC. conocida y se hacen
diluciones mayores y menores que el normal y se
miden
las absorbancia y se determina un factor que es el
promedio de las tres diluciones.

Teniendo que A= . b. C y como b=1 cm

=> A/ = C para facilitar el calculo A . (1/ ) = C
donde (1/ )= F y es la inversa de la pendiente de la
curva tendremos que
C= F . A. Dicho en otras palabras la recta se ajusta
a
una ecuacin del tipo y=ax+b.

Lecturas
de
absorban
cia

Concentraci
n de Hb

De esta manera controlo:

La linealidad del equipo
El deterioro que sufre el reactivo

Procesando un estndar todos los das:

Controlo el deterioro que puede sufrir el reactivo
desde el dia
que se lo preparo y se realiz la curva.
Controlo el factor humano
Cambios en la tensin de la red o desgaste de la
lmpara del fotocolormetro

CAUSAS DE ERROR
1. Errores de extraccin
2. Empleo de anticoagulantes no
recomendados
3. Coagulacin parcial de la sangre

Errores de la dilucin:
1. Empleo de pipetas automticas descalibradas u
otras pipetas sucias o hmedas
2. No eliminacin del exceso de sangre adherida a
las paredes externas del capilar antes de
introducirlo en el reactivo
3. Dilucin incompleta de la sangre en el reactivo

Errores de la transformacin de la hemoglobina en

HiCN:
1. Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o
vencido
2. Lectura antes del tiempo necesario para la
completa transformacin de la Hb en HiCN

Errores de la determinacin:
1. Empleo de instrumentos no calibrados
2. Cubetas sucias o deterioradas
3. Soluciones turbias de HiCN

Errores en la conservacin del reactivo:

1. Congelacin del reactivo, lo que produce
transformacin de K3 Fe(CN) 6 en K4 Fe(CN) 6 y
una oxidacin parcial de la Hb.
Conservacin del reactivo en botellas de polietileno:
se pierden grupos CN con formacin exclusiva de
metahemoglobina,
en vez de HiCN, con lo que los valores de
concentracin de Hb
obtenidos son inferiores a los reales.

DETERMINACION DE HEMOGLOBINA POR

METODO DE SULFATO DE COBRE
Procedimiento:
1. Disponer la solucin de sulfato de cobre en un
vaso de precipitados de 50 ml.

2. Recoger una gota de la sangre problema.

3. Dejar caer una gota de sangre sobre el

sulfato.

TECNICA
B
M Std.
5
5
R. CMHb
5mL.
mL. mL.
Sangre
20uL -Estnda
20uL
--r
.
Incubar por 3 - 5
min. A T ambiente
Leer a 540 nm

DETERMINACION DE HEMOGLOBINA
Se
mide
por
espectrofotometra
de
absorbancia
Se lisa el glbulo rojo y se
aade solucin de Darrow para
obtener
cinometahemoglobina, la cual
es leda a 540 nm.
Factores que alteran su lectura
Hiperlipemia
Hemlisis
Hiperleucocitosis
Indica cuanta protena existe
por unidad de volumen. ndice
para diagnosticar anemia.

Importante

La reaccin bsica en la produccin estndar de

cianametahemoglobina es la conversin de la
Hb. En metahemoglobina por el ferrocianuro y la
metahemoglobina con cianuro
potsico para
formar pigmento cianametahemoglobina.
Muestras de sangre hemolizadas o con exceso de
oxalatos darn valores
falsos de Hb. Se
recomienda volver a tomar la muestra

 Todos los tipos de hemoglobina se transforman en

cianametahemoglobina. Por esta razn
se le
llama a este mtodo, Hemoglobina total
Las concentraciones de las ampollas de Std. de
hemoglobina, varan un poco de un lote a otro

VALORES NORMALES

Al nacer puede ser normal hasta 18 gr/dL.

Infancia 11 13 gr/dL.
adultos:
Mujeres: 13 15 gr/dL.
Hombres: 14 17 gr/dL.

DETERMINACION DE
HEMATOCRITO

HEMATOCRITO
Es el volumen de eritrocitos expresados en (%)
del volumen de sangre.
El hematocrito, se puede determinar por
centrifugacin de sangre heparinizada en un tubo
capilar (tambin conocido como un tubo de
microhematocrito)
a
3,000rpm
durante
cincominutos.

 El hematocrito es la proporcin de clulas

sanguneas en el volumen total de la sangre, es
decir, la proporcin entre componentes
sanguneos slidos y lquidos. El hematocrito
informa sobre la fluidez de la sangre.
HEMATOCRITO: es el porcentaje del volumen de
la sangre que ocupa la fraccin de los glbulos
rojos.

HTO. SE REALCIONA
CON
EDAD

SEXO

NUMERO DE
ERITROCITOS

FUNDAMENTO
Este examen mide el volumen (cantidad) de
glbulos rojos en la sangre, comparado con otros
componentes. Los resultados del examen se
informan como un porcentaje. Este examen puede
ser usado para evaluar o manejar enfermedades
como:
ENFERMEDAD RENAL
TERMINAL
INSUFISCIENCIA CARDIACA

VALORES NORMALES
HEMATOCRITO
AL NACER

%
HASTA 55%

INFANCIA

35 38 %

ADULTOS:
MUJERES
HOMBRES

38 44 %
42 51 %

ESTOS VALORES PUEDEN VARIAR SEGUN

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA O CASA

VALORES NORMALES DE
HEMATOCRITO

SE UTILIZA EL HEMATOCRITO PARA

ESTUDIAR:

Casos de
deshidrataci
n

Anemia

Materiales y equipo a utilizar

Procedimiento
1.Extraer una muestra de sangre total realizando
una puncin con la lanceta sangre con EDTA.

2.

Con un tubo capilar tomar sangre inclinar el

tubo(con anticoagulante), hasta llenar por ms de
la mitad del tubo. Luego taparlo con plastilina.

3.Colocar el tubo capilar en la microcentrifuga

4. Centrifugar 5 minutos a 3,000 rpm.

5.Con un lector de hematocrito, determinar el

valor. ( tabla para hematocrito)

Interferencias

Muestras de sangre hemolizada darn un hematocrito mas bajo de lo

que realmente es, debido a la destruccin de eritrocitos

Cambios notables en la tonicidad del plasma alteran el valor del

hematocrito; grandes concentraciones de electrolitos en plasma, suben
el valor del Hto.

Proporciones inadecuadas de anticoagulante alteran el valor del Hto.

Cuando se utilizan oxalatos al 20% producen una retraccin de los GR
hasta del 3.5% y Hto da un valor bajo.

Es importante reportar el color del plasma

de la siguiente manera
Plasma

Caracterstica

a) Plasma
ictrico:

cuando el color del plasma es amarillo

o anaranjado

b) Plasma
hemolizado:

Cuando el color del plasma es rojizo

debido a hemolisis, propia del
paciente o muestra mal tomada

c) Plasma
lipmico

Cuando el color del plasma es blanco

lechoso debido a ingestin reciente de
comida rica en grasa o a exceso de
lipoprotenas

d) Plasma celeste Debido a la introduccin de sustancias

o azul
colorantes en el sistema circulatorio
e) Si la hemolisis
es muy intensa

Mejor tomar nueva muestra no

reportar el Hto.

INDICES HEMATIMETRICOS
La determinacin de
hematocrito y
hemoglobina permiten determinar los
ndices hematimtricos que son de gran
valor para :
Diagnstico
Clasificacin y tratamientos de las
anemias

INDICES HEMATIMETRICOS ABSOLUTOS SON :

HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA

(HbCM): Es la cantidad de
hemoglobina corpuscular media correspondiente a un eritrocito, expresada
en microgramos

VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO ( VCM): Es el volumen medio de un

eritrocito expresado en micras cbicas

CONCETRACION DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (CHbCM):

Es la relacin entre la cantidad de Hb. Y el Hto., es decir la proporcin de
Hb. P/V contenida por unidad de volumen y expresada en tanto por ciento.

Clculos:
Hemoglobina Corpuscular Media(HbCM):
HbCM= Hb
X 10 microgramos
las dos primeras cifras de eritrocitos
Para calcular este valor se divide el valor de la Hb.
en gramos por 100 ml. de sangre, entre el numero
de eritrocitos en millones por mmc.
VALOR NORMAL:
AL NACER: 40 picogramos, cifra que desciende
rpidamente al nivel propio de la infancia= 27 30
pg.
Adultos : 27-32 pg.

 Un ndice inferior o superior al valor de HbCM

corresponde respectivamente a hipocroma o
hipercroma en los glbulos rojos macrocticos la
cantidad de Hb. Puede ser mayor de lo normal. El
aumento de Hb. Es paralelo al aumento de
volumen globular y no refleja una sobresaturacin
de Hb.

CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR

MEDIA (CHbCM)
CHbCM=

Hb
X 100
Hto.
la cantidad de Hb. contenida, no en 100ml. de
sangre total, sino en el volumen de masa
corpuscular en la cual esta contenida, expresada en
g% multiplicando x 100 y dividindola por el Hto.
valores normales:
AL NACER: 45g%
NIOS 31- 34 g%
ADULTOS: 32 38 g%
PUEDE ESTAR AUMENTADA EN CASOS DE
ESFEROCITOSIS HEREDITARIA

VOLUMEN GLOBULAR MEDIO

(VCM)
VCM = Hto. X 10 mmC
2 primeras cifras de los GR
VALOR NORMAL:
AL NACER: 105 fl
INFANCIA: 73 - 81 fl
ADULTOS: 82 94 fl (fenolitros)
Cuando los glbulos rojos son mayor que lo normal
se dice que hay macrocitosis y si coexiste anemia
se llama anemia Macroctica

Cuando los glbulos rojos son mas pequeos se

dice que hay microctosis y en el caso de existencia
de anemia se dice que es anemia microctica .
En caso de que exista anemia pero los glbulos
rojos sean de tamao normal, la anemia se llama
anemia normoctica y los eritrocitos reciben el
nombre de normocitos.