GUASSIA LUCIFERASA COMO

MARCADOR BIOLGICO PARA

MONITOREO DE LA
PROGRESIN DEL TUMOR Y
RESPUESTAS AL TRATAMIENTO
DE LA METSTASIS A
DISTANCIA
INTEGRANTES:
Chipana,
Stefani
Chavez ,
Regina
Gallegos,
Gisella

aupas, Sonia
Portal, Jhimmy
Riques, Erlinda

1 ERLINDA
RIQUES

BIOLUMINISCENCIA
Es la luz producida por una reaccin qumica
dentro de un organismo.
Al menos 2 elementos se requieren. El que
produce la luz "luciferina" y otro que cataliza la
reaccin "luciferasa.

luciferas
e

LU
=
Z

FLUORESCEN
CIA
La energa de una
fuente de luz es
absorbida
y
remitida como otro
fotn.

FOSFORESCENCIA
Es una radiacin de
vida
media
ms
prolongada y est
asociada
con
la
intensidad de la luz
absorbida.

ALGUNAS ESPECIES CON

ACTIVIDAD BIOLUMINISCENTE
Bacterias, Hongos, dinoflagelados,radiolarios,
Cnidarios,
Hydrozoa,
Anthozoa,
Ctenforos,
Nemertinos,
udibranquios,pulpos,
anlidos,
picnognidos,
Quetognatos,
crustceos
(Coppodos, Ostrcodos, Anfpodos, Eufsidos),
Equinodermos, Tunicados, Larvceos, Peces
2. Gaussia, mide unos
Ciempis, Milpis, Insectos.
1. Hidromedusa
27mm. Producen la luz
Aequorea
cuando hacen un giro
victoria
al escaparse.

3. Dinoflagelado
Pyrocystis fusiformis.

5.Poliqueto
Tomopteris
sp.
Luminiscencia
amarilla. Cuando es
perturbado
muestra
la ioluminiscencia en
sus parapodios.

4.Japetella
sp.
la
hembra usa su
bioluminiscencia
alrededor de su boca,
solo
cuando
busca
pareja.

7.Ctenforo
batipelgico
Bathyctena sp. (2000
m).
La
bioluminiscencia
amarilla
aparece
cuando el animal es
perturbado.

COELENTERACINA
Es una luciferina, molcula responsable de la
emisin de luz en algunas bacterias , algas,
hongos y animales.
Es el sustrato de muchas luciferasas y
fotoproteinas incluyendo luciferasa de Renilla
reniformis (Rluc), Gaussia luciferase (Gluc),
aequorina y obelina.

GAUSSIA LUCIFERASE
Es
una
protena
luminiscente
con
rendimientos
cunticos ms altas
que
las
luciferasas
deRenilla
sp.y
lucirnaga.Es
independiente de ATP,
lo que requiere slo
coelenteracina
y
O2como sustratos.

LUCIFERASA DE LUCIRNAGA

CNCER METASTSICO
Cncer
que
se
ha
diseminado de su lugar de
origen a otro lugar en el
cuerpo.
Los lugares ms comunes
de metstasis del cncer
son los pulmones, los
huesos y el hgado.
El tratamiento del cncer
metasttico
depende,
usualmente, del tipo de
cncer
y
del
tamao,
ubicacin y nmero de

GLOSARIO

Ortotpico: Que est situado en su lugar

normal.Se usa con frecuencia para describir un tejido
u rgano que se trasplanta a su lugar normal en el
cuerpo
MDA-MB-231: una sublnea de la lnea celular de
adenocarcinoma de mama humano; es decir, clulas
se cultivaron con el fin de estudiar el papel de la
acetilacin y extra-celular ubicacin de 90alpha
protena de choque trmico en la invasin de clulas
tumorales.
Marcador biolgico: molcula biolgica que se
encuentra en la sangre, otros lquidos o tejidos
corporales, es un signo de un proceso normal o
anormal, o de una afeccin o enfermedad

GLOSARIO
Inoculacin: introduccin de una sustancia en el
cuerpo para producir o aumentar su inmunidad ante
una enfermedad o proceso asociado a dicha sustancia.
Luminmetro: excelente para monitoreo de
limpieza en planta, equipo porttil, su avanzado
sistemapermite leer la cantidad de ATP, cuenta con
un software para realizar anlisis estadsticos y llevar
un control
RLU( unidad relativa de luz) : la luz emitida desde
los hbridos ARN:ADN marcados se mide como
seales de fotones en un luminmetro y se incluye en
el informe como unidades deluz relativa.
Valor umbral: separa los objetos de una imagen
que nos interesan del resto

HER
del2 factor

Receptor
de
Crecimiento epidrmico
Es el nombre de una
protena producida por un gen
especfico.
Las protenas HER2 son
receptores en las clulas
mamarias
Ayudan
a
controlar
la
manera en que una clula
mamaria sana crece, se
divide y se repara as misma

EGF
R
del factor

Receptor
de
Crecimiento epidrmico
Es el receptor celularde
la
Superficie
de
la
clulade los Miembros de
la Familia del factor de
crecimiento
epidrmico(familia
EGF)
de los ligandos de las
Protenas extracelulares.

LAPATINIB
Es
un
agente
quimioteraputico,
un
inhibidor dual de la
tirosina quinasa de EGFR
Acta
y HER2sobre una enzima
especfica
que
se
encuentra en las clulas
cancerosas y detiene el
crecimiento
de
las
Se
usa en forma de
clulas.
ditosilato de lapatinib.

RESULTADO
RESULTADO
N1
Comparacin de la actividad Gluc en
sangre, plasma y orina

RESULTADO N 2

Seguimiento
de
la
actividad
Gluc
en
la
sangre,
la
orina
e
imgenes
de
bioluminiscencia (BLI) del
modelo
ortotpico
de
cncer de mama.

TIEMPO
REAL
DE
SEGUIMIENTO
DE
LA
PROGRESION DEL TUMOR
METASTASICO CON SANGRE
DE GLUC Y LOCALIZACION
DE
METASTASIS
CON
IMAGEN
DE
BIOLUMISCENCIA
GLUC
Resultado 3: La sangreDE
de ensayo
Gluc refleja la carga tumoral viable.

3C MARLENI

MATERIALES Y MTODO
Ratones de laboratorio
Los ratones fueron anestesiados con
ketamina/xilazina(100/10mg/kg),
Inyeccin intraperitonial

LNEA CELULAR Y CULTIVO

CELULAR
Lnea celular humana 231
Br
y
HER2
con
sobreexpresin
de
contraparte, donde ambos
expresan la protena verde
fluorescente

Las clulas 231 BR y

231BR
HER2
se
mantuvieron en el medio
modificado de Dulbecos
complementado con suero
bovino fetal al 10%.
1%
de
estreptomicina

penicilina
solucin

TRANSFECCION DE GLUC
Es el vector lentiviral lleva un casett de
expresin que codifica la proteina Gluc y
Ceruleo fluorescente.

Esta separado por un sitio interno de

entrada ribosomal que se ha generado
previamente
Las clulas 231BR y 231BR Her2 fueron
transducidas con LV-Gluc-PPC 231BR-G y
231BR-HER2-G a una multiplicidad de
infeccin.

MODELO DE ALMOHADILLA DE
GRASA MAMARIA
Se ha diseado clulas MDA-MB231BR
(231BR),
la
cual
se
administra en un volumen de 200 a
300 mm3 en la almohadilla de la
grasa mamaria (MFP).
Ratones femeninos
semanas de edad.

de

El tamao del tumor se midi

mediante una pinza calibrador.
Los tumores se resecaron y se
utilizo la tincin H & E.

MODELO DE METSTASIS
EXPERIMENTAL (MODELO DE
INYECCIN INTRACARDIACA)

Ratones femeninos de 6 -7
semanas de edad desnudos
fueron inyectados con: 0.25 x
106 231 BR- HER2-G clulas en
0,1 ml de PBS a travs del
ventrculo izquierdo.
Fueron sacrificados los ratones
que
mostraron
sntomas
clnicos de dolor prolongado.
El cerebro, los huesos y los
dems rganos se recogieron
y se evalan de inmediato
para
GFP
mediante
microscopa de fluorescencia.

ANALISIS DE GLUCOSA EN
SANGRE/ ORINA

1)Se extrajo sangre de

hacer una ligera incisin
en al vena de la cola
2)La
orina
se
recoge
directamente
de
las
aberturas de la uretra
3)10 L de sangre se
recogi y se mezcl con
2L de 50 mM de EDTA.
4)Las muestras de sangre
u orina se transfiri luego
a una placa de 96 pocillos.
5)La actividad de la Glu se
midi
utilizando
un
luminmetro placa.

CUANTIFICACIN DE TUMOR
VIABLE
Se utilizo la tincin
hematoxilina-eosina
(H & E)

La cual nos permite

contrastar el ncleo
del
citoplasma,
tiendo el ncleo de
color
azul
y
el
citoplasma
de
un
color rosado.

BIOLUMISCENCIA DE
IMGENES (BLI)
Tecnologa la cual representa una poderosa
herramienta
para
su
uso
con
bacterias
modificadas
Para
expresar genes reporteros como lux
(unidad del nivel de iluminacin).
Se utiliza tradicionalmente como una modalidad
2D.
Que resulta en imgenes que estn limitados en
su capacidad para localizar anatmicamente las
poblaciones de clulas

Adler, K., J. Gifford, y R. Sumner.