Biotecnologa

ADN RECOMBINANTE

ADN recombinante
1.Preparacin de la
secuencia del ADN para su
clonacin
Es la parte esencial del proceso,
ya que el ADN debe separarse y
concentrarse

2. Preparacin de un vector de clonacin

El vector es el portador de la secuencia de ADN que
se desea clonar. Un vector debe presentar las
siguientes caractersticas:
Una pequea secuencia de ADN fcil de aislar, como,
por ejemplo, un plsmido.
Contener distintos puntos deataque a enzimas de
restricciny que sean conocidos.
Poder ser incluido en laclula anfitrionacon
facilidad.
Replicarse de forma independiente al ADN de la
clula anfitriona.

3.Formacin del ADN

recombinante
En esta etapa se produce la unin
covalente del vector y el ADN inserto
mediante una ligasa. As se realiza el
sellado de la llamada Mella, Muesca o
Nick.

4. Introduccin del ADN

recombinante en la clula
anfitriona
Para la clonacin (replicacin del ADN
recombinante) se necesita la
maquinaria celular. Por ello, hay que
introducir el ADN recombinante en
unaclula anfitriona.

5.Propagacin del cultivo

Se induce la divisin de clulas
anfitrionas, de forma que se producen
tambin copias de ADN recombinante
y, por ello, la clonacin. Primero se
efecta una siembra en placas Petri
con agar como medio de cultivo. Se
dejan crecer las colonias. Cada una
de ellas ser seleccionada y
transferida a distintos medios
lquidos, donde seguir aumentando
el nmero de individuos de la colonia.

6.Deteccin y seleccin de los clones

recombinantes
En los procesos de clonacin se utiliza un
gran nmero de clulas. Al final del
proceso se hace necesario separar las
clulas que contienen ADN recombinante
de las que no lo contienen.
La deteccin y la seleccin de colonias se
realiza en los medios de cultivo. En los
procesos de clonacin se obtienen clulas
anfitrionas que no han incluido el vector,
clulas recombinantes, es decir, que han
incluido el vector con el ADN para
recombinar, y clulas anfitrionas con
vector que no lleva el ADN inserto.

HALLAR GENES

En 1987 douglas prasher deseaba encontrar un

gen especifico en una medusa (el gen era el GFP)

Esta proteina absorbe energia de la luz y hace

que partes de la medusa brillen, Prasher pensaba
que la GFP se podia usarse para reportar cuando
se han hecho una proteina en una celula.

Prasher estudio la secunacia de aminocidos .Al

comparar la secuancia con una tabla de codigo
pudo predecir una secuancia de base de ARNm.

Uso una secuencia de adn complementario para

atraer un ARNm que concordara con su
prediccion.

Prasher encontro una secuencia de ARNm que se

unia a la perfeccion y ah encontro el ARN, que
producida el GFP.

Mtodo southern blot: Es un metodo que permite

detectar la presencia de una secuencia de adn en un
mezcla completa de acido nucleico. Para ello emplea
la tecnica de electroforesis en gel de agarosa, con el
fin de separar los fragmentos de adn y despus una
transferencia a una membrana en la cual se efectua
la hibridacin de la sonda.
El metodo consta de 7 pasos:

Extracion del ADN

Digestion del ADN:

Electriforesis:

Preparacion de un ensayo de southern:

Hibridacion con una sonda radioactiva:

Deteccion de RFLPs:

Reensayar el resultado:

Plsmidos y Marcadores Genticos

Los plsmidos son fragmentos

extracromosmicos de cidos
nuclicos (ADN o ARN) que
aparecen en el citoplasma de
algunos procariotas.

Un marcador gentico es un gen que hace

posible distinguir las bacterias que llevan el
plasmido de aquellas que no lo portan.

Un tipo de marcador gentico la deteccin de los

signos clnicos de enfermedades, tales como la
fibrosis qustica, acondroplasia, anemia
falciforme, fenilquetonuria

Bibliografia

http://medmol.es/glosario/87/

https://genetica2012.wikispaces.com/Marcadores+Gen%C3%A9ticos

http://
www.mediterraneo.cl/documentos/catalogo/extracto_978-956-220-313-5.pdf