CROMATOGRAFA DE GASES

F.M: GAS
F.E: LQUIDO
SLIDO
GAS-LQUIDO: Mecanismo de reparticin
GAS-SLIDO: Mecanismo de separacin
PARTES DE UN CROMATOGRAFO
SISTEMA DE GASES
INYECTOR
HORNO: Propsito albergar la columna y precisin de la
temperatura regulada.

SEPARATION PROCESS
1

DISTRIBUTION CONSTANT
(Kc)
Mobile
Phase
Stationary
Phase

KC

conc. of solute in stationary phase

=

conc. of solute in mobile phase

Fused Silica
Tubing

Kc Is Dynamic
Stationary Phase

Gas
Flow
Stationary Phase

Kc => Large

Kc => Small

Which Pair of Solutes have

better Separation?
11.24

12.72

(tm = 95.5)

10

11
11.14

12

13

14

15

13

14

15

11.61

(tm = 95.5)

10

11

12

COLUMNA
CONTROLADORES DE FLUJO
DETECTOR:
Mide caracterstica fisicoqumica,
electroqumica. Registra los componentes que salen de la
columna. Da una respuesta que se traduce en un pico
cromatogrfico,
la
respuesta
es
directamente
proporcional a la cantidad de muestra.
SISTEMA DE DATOS
El puerto de inyeccin se encarga de volatilizar la
muestra, la T debe ser lo suficientemente alta para
pasarla al estado gaseoso. La T se controla
independientemente del equipo.

SEPARACIN DE LA MUESTRA EN LA
COLUMNA: La temperatura inicial debe
ser baja en la columna, la muestra se
condensa en la F.E, se hace luego la
programacin de la temperatura, se cambia
la constante de distribucin, de acuerdo a su
volatilidad y afinidad por la F.E salen los
diferentes compuestos.
SISTEMA DE DATOS: Su funcin es
controlar todos los parmetros del sistema
cromatogrfico, adquiere la informacin, la
interpretacin y tratamiento de datos.

CLASIFICACIN
Tipo de columna y fase estacionaria (F.E).
Columna empacada columna vidrio o acero, d.i 2-4
mm, 10000 NPT.
Capilar d.i <1 mm, pared interior recubierta de F.E.
Megabore 500 m, microbore 100 m. 200000 NPT.
Cromatografa Gas-slido (GS): Adsorcin-desorcin.
f.e slidos porosos.
Cromatografa Gas-Lquido (GL): Recubrir partculas de
f.e con lquido alto punto de ebul. Absorcin.
Los compuestos ms solubles se retienen por ms
tiempo.

COLUMNAS CAPILARES
Segn se inmovilice la f.e en la columna:
WCOT (Wall coated open tubular) Pelcula de material
recubriendo la superficie interior de la columna.
SCOT (support coated open tubular) Partculas de
soporte en su pared recubiertas de fase lquida.
PLOT (porous layer open tubular) fina capa de
polmero poroso (tamiz molecular, superficie activa)
recubriendo superficie interna.

WCOT vs PLOT
Type

WCOT
PLOT

Stationary Chromatographic
Phase Process
Liquid or Gas / Liquid
partition
Gum
Solid

Gas solid
Adsorption

Stationary
Phases
Polysiloxanes
PEG
Porous Polymers
Al2O3
Zeolites

PLOT Columns
"Solid"
Porous
Layer
Fused Silica
Tubing
Ideal for the analysis of gases due to
their increased retention (k) and unique
selectivity ( ) compared to WCOT

ETHYLENE
Column:

DB-Petro 100
100 m x 0.25 mm I.D. , 0.5 m
Carrier:
Helium at 28.5 cm/s
Oven:
- 40C for 20 min
- 40C - 120C at 5/min
Injector: Split 1:16, 100 L, 200C
Detector: FID, 250C

Molecular Sieve PLOT Columns

5 zeolite molecular sieve for the
analysis of fixed and permanent
gases
O2, N2, Ar, Kr, Xe, CO, CH4, SF6

Caracterstica

Empaquetada

WCOT y
SCOT

PLOT

d.i de la columna

3-6 mm

0.10-0.53 mm

0.32-0.53 mm

Longitud de la
columna

1-3 mm

30-50 m

30-50 m

120-185 m

0.1-0.5 m

12-25 m

1000-5000

25000-200000

25000-200000

Capacidad total
(g/compuesto)

100

0.05-5

0.05-5

Caudal mL/min

20-100

0.5-5

5-10

Flujo lineal cm/s

10-50

20-50

50-100

Dimetro de
partcula
Espesor de
recubrimiento
Nmero total de
platos tericos (N)

COLUMNAS TUBULARES ABIERTAS

Las columnas tubulares abiertas se pueden clasificar
tambin por el dimetro en:
Wide Bore columns
Medium bore columns
Narrow bore columns

0.53 mm
0.32 mm
0.22 mm (cromatografa
moderna) alta resolucin
Microbore columns
(fast chromatography)
resolucin altsima, tR cortos, no se aplica a anlisis de trazas

ABSORBENTES SLIDOS
-Almina
-Gel de slice
-Carbono, grafito
-Tamiz molecular (zeolitas)
-Polmeros
orgnicos
porosos.

FASES LQUIDAS
-No polares:
A. Escualeno 150 C
B. 100% polimetilsiloxano 300 C
5% fenil-95% metilpolixilosano 300C
Moderadamente polares:
C.14%cianopropilfenil-86%metilpolisiloxano 300 C.
50% fenil-50%metilpolisiloxano 225 C
D. Fenilsiloxano carborano 370 C
Polares
E. 50% cianopropilfenil-50%metilpolisiloxano 275 C.
F. 50%-trifluoropropil-50%metilpolisiloxano. 250C.
G. Glicol de polietileno 225 C
Altamente polares:
H. 70%cianopropilpolisilfenilenosiloxano
250 C
I. Poli(dietilenglicolsuccinato) 200 C

TIPO DE MUESTRAS
Compuestos orgnicos con punto de ebullicin<250 C
Gases.
Limitacin: Descomposicin en puerto de inyeccin.
GC piroltica: Productos de descomposicin, huella
digital.
Pinturas, plsticos, fracciones pesadas de
petrleo

Limitacin. Compuestos termicamente inestables:

Azcares
cidos grasos

DERIVATIZACIN

Aminocidos
Transformando qumicamente grupos funcionales
C5H11COOH (187 C) a C5H11COOCH3 (123C)

INTRODUCCIN DE MUESTRAS Y
DIVISORES
INYECTOR: T superior a la T mx. alcanzada por la
columna.
Inyeccin On Column: Jeringa situada directamente
a la entrada de la columna.
INYECTOR SPLIT/SPLITLESS: Reduce la cantidad de
muestra que llega a la cabeza de la columna capilar.
Baja concentracin splitless.
Loop e interfases (purga y trampa)

NOMENCLATURA F.E
50%fenil -50%metilpolisiloxano se vende como OV-17,
OV-11, OV-22, SP-2250 Y DC-710 en columnas
empacadas.
HP-17, RSL-400,
capilares.

PE-17,

SP-2250

en

columnas

5%fenil-metilpolisiloxano HP-5, OV-5, etc.

Polietilnglicol (polar) Wax, HP-Wax, Innowax, DBWAX

COLUMNAS EMPAQUETADAS: d.p f tamao de malla.

Nmero de malla, ms densa la malla y menor d.p
(150-175 m).
En GLC las fases de alta tienden a retener ms los
compuestos, tR aumenta.
Si aumenta T < tR, pero < selectividad.
Volumen de fase lquida (grosor de la f.e)
A> f.e > capacidad, > Vm, mejor cuantificacin, <
lmite de deteccin, > intervalo cuantitativo. Los
analitos pasan ms tiempo disueltos en la f.e.

Tridecano k=5.7

Tridecano k=20.5

Efecto del espesor de la pelcula dentro de una columna capilar, columna

WCOT DB: 30 m x 0.32 mm. -5-105C.
a. 0.25 m. B. 1.0 m.

RELACIN DE FASE,
Columnas capilares GLC: , establece la relacin entre
el dimetro del capilar y el espesor de la pelcula.
=d/4dp = r/2dp
Utilidad:
Determinar tipo de columna til para la separacin de
los analitos.
bajos compuestos de bajo peso
molecular y apolares.
Relacionar los resultados obtenidos con columnas de
diferente dimetro: Las columnas capilares de diferente
d.i pero igual generan los mismos cromatogramas.

Utilidad de los valores de cuando se traslada un anlisis entre

columnas capilares con diferente dimetro interno.
A. Columna Supelcowax 10: 30 mx 0.20 mm x dp 0.20 m.
B. Columna Supelcowax 10: 30 mx 0.20 mm x dp 0.53 m.

APLICACIONES DE DISTINTAS RELACIONES DE FASE,

Aplicacin

16-100

Gases, hidrocarburos de bajo peso

molecular, compuestos voltiles
halogenados (p.m 16-350)

100-320

Semivolatiles, aplicacin general

(p.m 100-700)

320-1325

Hidrocarburos de alto peso

molecular, ceras, productos del
petrleo (p.m 300-1500)

TEMPERATURA EN GC
El control de la Temperatura en GC es fundamental. El aumento de T en la
columna acelera tanto la elucin (> presin de vapor) y el ritmo de
aproximacin en le equilibrio entre la f.e y la f.m.

Separacin isotermica: a T constante.

Separacin con gradiente de T: Aumento programado
de la T, cambio de la T con el tiempo, dT/dt.
La T ms alta en la columna est limitada por la
descomposicin de la muestra, sino por la estabilidad y
la presin de vapor del lquido de la f.e.
La f.e puede ser vaporizada y/o descompuesta y
entonces puede atravesar la columna y ser eluido
produciendo SANGRADO DE LA COLUMNA.

Las pendientes de T programadas

para un anlisis pueden ser
lineales o mesetas.
a. Temperatura isotermica= 168 C.
b. Gradiente: Ti 50 C @ 6C.min-1
hasta 235C.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Pentano
Hexano
Heptano
1-Octeno
Decano
1.Dodecano
Tetradecano

EFECTO DEL CAMBIO DE LA PENDIENTE DEL

GRADIENTE
1.5 C.min-1

16 C.min-1

Un incremento de la velocidad de cambio de gradiente de T afecta a la calidad

de los pesticidas.

Las columnas capilares normalmente se usan con flujos dentro del

intervalo 0.5-5 mL/min.
Columnas empacadas: 20-200 mL/min.

EFECTO TPICO DEL CAMBIO DE CAUDAL

A > flujo < tR y efecto pequeo en la eficacia

La separacin cromatogrfica de dos analitos slo se

da cuando KD1 es diferente a KD2.
Por eso,
modificando la KD de los componentes se logra su
mejor separacin.
Esto se puede obtener
optimizando las siguientes variables:
La programacin de la temperatura del horno;
El flujo del gas de arrastre;
Seleccin de la fase estacionaria (composicin
qumica, polaridad, espesor);
Tamao de la columna (longitud, dimetro interno).

Los tR de los analitos

fundamentalmente de:

dependen

La presin de vapor.
Las fuerzas intermoleculares entre el soluto
y la fase estacionaria.
Temperatura de la columna
Velocidad de calentamiento
Velocidad de gas arrastre
Tipo de columna
Polaridad de la fase estacionaria
Longitud de la columna
Dimetro interno
Cantidad de la muestra.

CARACTERSTICAS:
Volumen muerto
Gas auxiliar (Make up)
Temperatura
Sensibilidad
Selectividad
Rango dinmico lineal
Costo
Manejo
Durabilidad

UNIVERSALES:
Da respuesta a todos los
compuestos, entre ellos estn el TCD, MS (full scan),
IR_FT, FID.
SELECTIVO: Ignora muchos compuestos y da
respuesta solamente a uno de ellos o a grupo de
molculas de las mismas caractersticas. Mayor
selectividad y sensibilidad.
NPD, ECD, FPD, MS (SIM).
ESPECFICO:
Da respuesta ultra-selectiva y en
ocasiones a un solo compuesto. Detector de emisin
atmica AED.

NO DESTRUCTIVOS. No causa dao de la molcula,

se puede conectar a otro detector.
TCD
ECD
IR-FT
DESTRUCTIVOS. Descomposicin de la molcula.
FID
NPD
FPD
MS

LIMITE DE
DETECCIN-1)
APROX. (g.s

INTERVALO LINEAL
APROX.

COMENTARIOS

10-5-10-6

103-104

Detector
universal,
mide
cambios en la conduccin del
calor

en

10-12

106-107

Detector
universal,
mide
corriente inicas de pirlisis

Captura
de
electrones, ECD

10-14

102-103

Detector
selectivo
para
compuestos que contienen
tomos con elevada afinidad
electrnica

Fotomtrico
llama, FPD

10-13

102

Detector
selectivo
para
compuestos que contienen S o
P

Nitrgenofsforo, NPD

10-8-10-14

105-107

Detector
selectivo
para
compuestos que contienen N o
P

Fotoionizacin
(PID)

10-8-10-12

105

Detector universal (alguna

selectividad debida al gas de la
lmpara)

Detector Hall

10-11

105

Detector
selectivo
para
compuestos que contienen
halgeno, N o S

Espectrmetro
de masas, MS

10-12

depende

Detector universal

Infrarrojo
de
transformada de
Fourier, FTIR

10-10

102

Molculas polares

TIPO
Conductividad
trmica, TCD
Ionizacin
llama, FID

de

DETECTOR DE IONIZACIN EN LLAMA, FID

Detector
universal
es
relativamente
insensible
a
molculas pequea: N2, NOx,
H2S, CS2, CO, CO2.
Funciona mediante pirlisis del
efluente en una llama de H2/ aire
en exceso de oxigeno.
Los compuestos reaccionan en
la llama produciendo iones en la
corriente del efluente. Estos
son conducidos mediante un
campo elctrico (200-300V).
Cuanto ms carbonos ms
fragmentos y ms sensible ser
el detector.

DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
TRMICA, TCD
Gas circulando a travs de un
alambre caliente.

El gas portador pasa a travs de la

clula de referencia y el efluente
procedente de la columna pasa a
travs de la otra clula a un mismo
caudal. Se mide la diferencia de T
entre el filamento de referencia y el
del efluente. Cualquier condicin
que incremente esta diferencia
originar mayor respuesta.

He, H > conductividad trmica

DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES, ECD

Celda
que
contiene
dos
electrodos y una fuente de
radiacin.
Las
colisiones
entre
los
electrones (emisin ) emitidos
por la fuente de 63Ni o 3H y el
gas portador (CH4/Ar o CH4/N)
producen un plasma que
contiene electrones que son
atrados hacia el nodo.
Cuando pasa por este detector
un compuesto con tomos
electronegativos, algunos de
los
electrones
sern
capturados y la corriente
hacia el nodo disminuye.

DETECTOR DE NITRGENO-FSFORO, NPD

Esfera de sal
de rubidio

Denominado
tambin
termoinico (TID) o detector de
nitrgeno de ionizacin de
llama (N-FID).
Los iones se
producen en un capa gaseosa
rodeando una esfera cermica
caliente que contiene silicato de
Rb. Un nodo metlico cubierto
con un metal alcalino emite
iones positivos cuando se
calienta en una corriente de gas
que contiene N o P.

DETECTOR DE FOTOIONIZACIN, PID

Los
detectores
de
fotoionizacin utilizan luz U.V
emitida por una descarga de
gas (H o Ar), para producir los
iones de analitos.
La
respuesta del detector se basa
en el cambio de corriente
inicaen presencia de analitos
fotoionizables.

DETECTOR FOTOMTRICO DE
LLAMA, FPD
La llama de este es ms rica en
H2. La respuesta de los analitos
depende de la separacin de la
emisin de la luz de fondo de la
misma llama de la emisin
debida a la presencia de
analitos. Poseen filtros pticos
a
longitudes
de
ondas
especficas del S (394 nm) o P
(526 nm).

DETECTOR HALL DE
CONDUCTIVIDAD
ELECTROLTICA, ELCD
electrodos

Conductividad
de
los
iones
disueltos en un lquido. Se forman
haciendo pasar el efluente por un
catalizador de Ni calentado a (8001000 C) para convertir el azufre, el
nitrgeno o los compuestos
halogenados en especies que se
ionizan en disolucin.
La conversin ion analito puede
llevarse a cabo de 3 maneras
distintas: sensor de azufre, N o
halgeno.

B
FID

FID
FID

NPD
NPD
NPD
0

20

40

60

80

100 min

20

40

60

80

100 min

Cromatogramas en la columna DB-1 (detectores FID y NPD) del aceite esencial

de R. graveolens obtenido por (A) extraccin con fluido supercrtico (SFE) y (B)
destilacin - extraccin simultnea con solvente (DES) [E.E. Stashenko, H.S.
Villa and M. Y. Combariza, J. Microcolumn Separations, 1995, 7(2), 117.].

6 13

23

52

60

FID

73

37
70

78
76

67

24

65

32

57
80
56

16

71

18

69

72

74

15

50

75

77

79

100

min

60

NPD

NPD

N-isobutil-2Z,6E,8Z-decatrienamida (Espilantol)
O
(CH3)2CHCH2NHC
H

H
C

H
C

CH2

CH2

C
C

CH3
57

65

66

67
68

20

40

60

80

71

100 min

Cromatogramas del extracto de flores de Guaca (Spilanthes americana). Columna DB-1

(60 m). FID y NPD [E.E. Stashenko, M. Puertas and M.Y. Combariza, J. Chormatogr. A,
1996, 725, 223.].

81

100

80

A b u n d a n c ia

141
60

40

126

41

98
68

53

20

86

39

115

142

0
40

60

80

100

120

140

155

167 178 192

160

Espectro de masas del Espilantol.

180

206
200

221
220 m/z

SERIES HOMLOGAS
La separacin en cromatografa de gases se da como funcin de dos
propiedades de los analitos:
1.Interacciones qumicas con la f.e.
2.Puntos de ebullicin de los analitos
Interacciones qumicas del mismo tipo (alcoholes, aldehdos) se podr
observar cierta regularidad en los tiempos de retencin de una serie
homloga.
INDICE DE RETENCIN DE KOVTS: Se usa para cuantificar la retencin
de un compuesto comparndolo con una pareja de n-alcanos consecutivos
homlogos.
Ik= Cn * 100 + (tRx-tRn / tRN-tRn) * 100

Hidrodestilacin, HD

Destilacin con vapor-extraccin simultnea con solvente, SDE

Extraccin por fluido supercrtico, SFE

Extraccin en fase slida, SPE

Purga y Trampa P&T (headspace dinmico)

Microextraccin en fase slida en modo headsepace (HS-SPME)

Headspace esttico, S-HS

Cromatogrfo de gases acoplado a espectrometra de masas, HRGC/MS