Enzimas: mecanismo de

accin, sitio activo,

cofactores

Qu es una enzima?
en y zyme = en la levadura

Es un tipo de protena que acta como catalizador de

reacciones qumicas.
Incrementa la velocidad de reaccin sin cambiar el punto
de equilibrio.
Como catalizador:
Es especfico para cada reaccin. No necesariamente
para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son.
Tiene gran poder cataltico, transformando hasta 103 a
104 molculas por segundo.
Est sujeto a diversos mecanismos de regulacin de
modo tal que no genere ms producto que el necesario.

Actividad enzimtica
Es la forma de medida de una enzima.
La ecuacin general de las reacciones enzimticas es:

E S Cof1 ES E P Cof 2
Donde la enzima se une al sustrato para generar un producto. Algunas
veces con el auxilio de un cofactor que se modifica durante la reaccin.
La actividad enzimtica se mide por la reaccin cataltica bajo la forma de
desaparicin del sustrato por unidad de tiempo.
Tambin por formacin de producto o modificacin del cofactor.
Unidades: katal = moles de sustrato/segundo.
Unid. Internacionales: umol/minuto.
1 U= 16,7 nkat.

Clasificacin de enzimas
Clase de enzima Tipo de reaccin catalizada
Oxidoreductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas
Ligasas

Reacciones que transfieren electrones de un sustrato

a otro.xido reduccin
Transfieren un grupo funcional de una molcula a otra.
Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc
Rompen enlaces entre carbonos u otras molculas
con la adicin de una molcula de agua.
Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una
molcula de agua.
Transforman un ismero en otro transfiriendo un grupo
funcional de una posicin a otra.
Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos
molculas con gasto de energa.

Ej. Hexocinasa = ATP:D-hexosa 6-fosfotransferasa

E.C.2.7.1.1.
Clase 2 (transferasas), subclase 7 (transf. de un grupo fosforilo), subsubclase 1(el alcohol es el aceptor del fosforilo), 1 (compuesto aceptor).

Especificidad y sitio activo

Las reacciones se inician
cuando el sustrato se une al
sitio activo de la enzima.
El sitio activo es una porcin
espacial de la enzima creada
por la coincidencia de varias
cadenas laterales de aminocidos especficos. Estos
pueden
no
estar
en
secuencia, pero los dobleces
de la protena enzimtica los
aproximan.
Existen: residuos de captura
y residuos de catlisis.

Sitio activo de la enzima fructosa

2,6 difosfatasa

Tipos de
especificidad enzimtica
Modelo de molde rgido
En este modelo el sitio activo tiene una estructura rgida,
se le llama de llave y cerradura.
Es complementaria del sustrato.
Explica la especificidad de sustrato an a nivel de
ismeros (estructuras casi idnticas).

Tipos de
especificidad enzimtica

Modelo de molde inducido

Aqu el sitio activo es ms flexible, se le llama de ma-no y

guante.
Cuando el sustrato se acerca a la enzima se producen cambios
conformacionales que llevan a una exacta u-nin entre ambos.
Modelo que explica mejor la especificidad de sustrato.

Trminos relacionados con la

accin enzimtica
Apoenzima:
Referido solo a la parte proteica de la
enzima
Holoenzima:
Es la protena unido a una coenzima
y/o in metlico
Grupo prosttico
Cofactor
Iones inorgnicos:
Fe2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+ etc.
Complejos orgnicos (Coenzimas)

Grupos prostticos
Estn estrechamente integrados en la estructura de una
enzima.
Incorporacin estrecha y estable mediante fuerzas
covalentes o no covalentes.
Ej. Fosfato de piridoxal, FMN, FAD, pirofosfato de tiamina,
biotina y los iones metlicos de Co, Cu, Mg, Mn y Zn.
Los metales son los grupos prostticos ms comunes
metaloenzimas.

Cofactores
Se asocian de manera reversible con enzimas o sustratos.
Desempean funciones similares a las de grupos prostticos,
pero se unen de una manera transitoria y disociable a la
enzima o a un sustrato.
Los cofactores ms comunes tambin son iones metlicos.
Las enzimas que requieren un cofactor in metlico se
llaman enzimas activadas por metal para distinguirlas de las
metaloenzimas.

Coenzimas
Se unen lbilmente a la apoenzima y se disocian fcilmente.
Sirven como transbordadores de sustrato o agentes de
transferencia de grupo.
Son reciclables.
La asociacin con la coenzima tambin estabiliza sustrato
como tomos de hidrgeno.
Otras porciones qumicas transportadas por coenzimas son:
grupos metilo (folatos), grupos acilo (coenzima A) y
oligosacridos (dolicol).
Las vit. B hidrosolubles proporcionan componentes
importantes de muchas coenzimas. Ej. La nicotinamida (NAD,
NADP), riboflavina (FMN, FAD), cido pantotnico (coenzima A)

Mecanismos para la catlisis

Catlisis por proximidad: las molculas deben acercarse
hasta ubicarse dentro de la distancia formadora de enlace de
otra.
Cuando una enzima se une a molculas de sustrato en su sitio
activo, crea una regin de concentracin local alta de
sustrato. Este ambiente tambin orienta las molculas de
sustrato de manera espacial en una posicin ideal para que
interacten.
Catlisis cido bsica: los grupos funcionales ionizables de
cadenas laterales aminoacilo y de grupos prostticos (si
estn presentes) interactan como cidos o bases.
Ej. Pepsina, catepsinas lisosmicas, proteasa del VIH.

Mecanismos para la catlisis

Catlisis por tensin: en reacciones que comprenden la
rotura de un enlace covalente, las enzimas se unen a sus
sustratos en una conformacin muy desfavorable para el
enlace que sufrir la divisin estado de transicin. La
tensin resultante estira o deforma el enlace, esto lo debilita.
Catlisis covalente: comprende la formacin de un enlace
covalente entre la enzima y uno o ms sustratos.
La modificacin qumica de la enzima es transitoria.
Se observa particularmente en reacciones de transferencia de
grupo.
Por lo general participan los residuos de cistena o serina.
Ej. Quimotripsina, fructosa-2,6-Bifosfatasa

Regulacin de la actividad
enzimtica
Para que la vida se sostenga en condiciones de equilibrio es necesario
que el metabolismo se ajuste con precisin a las necesidades de los
tejidos.
El equilibrio metablico se obtiene regulando la actividad enzimtica
mediante el cambio de la :
Cantidad de enzima presente.
Cantidad de otros productos.
Eficacia de la actividad enzimtica.

Adems el flujo de metabolitos impide que se haga efectivo la

cualidad de reaccin qumica reversible, por cuanto no hay posibilidad
de acumulacin de un producto especfico.

La cantidad de
enzima depende de...
Equilibrio entre velocidad de sntesis y degradacin de la
enzima.
Presencia de inductores en el medio de cultivo de la clula.
Enzimas inducidas
Enzimas constitutivas (independientes del sustrato)

Presencia de catabolitos que reprimen la actividad de una

enzima en particular.
Sntesis de enzimas como proenzimas sin actividad cataltica.

Enzimas alostricas
Aquellas que son reguladas
mediante la presencia de efectores
en un sitio alostrico ( no ligado al
sitio cataltico de la enzima).
Las enzimas alostricas muestran
una
cintica
sigmoidea
de
saturacin con el sustrato.
Cintica sigmoidea que supone
existencia de un umbral de activacin por debajo del cul la enzima
es insensible a pequeas variaciones de sustrato, mientras que por
encima pequeos cambios de sustrato producen efectos drsticos.

95%

20%

10

[S]mM

20

Modificaciones covalentes
En algunas enzimas la
regulacin
depende
de
modificaciones estructurales
reversibles, como la unin
covalente con un grupo
fosfato.
El proceso obtiene el fosfato
del ATP y es dependiente del
aporte de energa del mismo.
Las formas fosforilada y no
fosforilada son diferentes
(una activa y otra inactiva) y
dependen de la presencia de
fosforilasas y fosfatasas.

OH
ATP

Prot.
Fosfatasa

Prot.
Quinasa

Pi

OO-P=O
O-

Localizacin enzimtica
Na/K ATPasa
membrana

Retculo endoplasma
Glucosa 6 fosfatasa

Alfa manosidasa
Complejo Golgi

Las enzimas ejercen su

funcin predominantemente
en el interior celular. Mas an
lo hacen en determinado
organelo de la clula.
Las enzimas que se encuentran en el plasma o lquidos diversos corresponden
a aquellas que se estn eliminando y muy pocas como
la LCAT (Lecitina colesterol
acil transferasa), LLP (Lipasa
lipoproteica), ejercen su
funcin a nivel plasmtico.

Catalasa

Succinato deshidro-

Peroxisoma

genasa.Citocromo oxidasa
Mitocondria

Papel Clnico de las Enzimas

Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad en
el interior celular, es posible encontrarlas en los
lquidos biolgicos con cierta frecuencia.
Todas las enzimas plasmticas, las del LCR, del L.
Asctico o Pleural se encuentran en bajos niveles de
concentracin actividad- provenientes de los tejidos
ricos en ellas y generalmente de paso a un proceso de
destruccin heptica o eliminacin renal.
nicamente algunas enzimas como las del
metabolismo de lpidos (LCAT, LLP) o los factores
de coagulacin ejercen su actividad en el plasma o
suero.

Elevacin enzimtica en el
plasma...
La actividad enzimtica en el plasma y otros lquidos biolgicos
se produce por:
Necrosis: destruccin celular y vaciamiento de las enzimas
como en el infarto de miocardio, hepatitis viral.
Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana
igual a necrosis.
Sobre produccin: mayor metabolismo en un tejido
-neoplasia-.
Menor eliminacin: no se elimina normalmente
-obstruccin biliar-.
Incremento de clulas inflamatorias: en lquidos como
Pleural y Asctico los exudados se acompaan de aumento de
actividad enzimtica.

Origen de las enzimas

en el plasma
Enzimas
Especficas del plasma
Secretadas
Del metabolismo celular

Ejemplos
Protrombina, plasmingeno,ceruloplasmina,
Lipasa Lipoproteica,colinoesterasa
Amilasas, fosfatasa prosttica, pepsingeno
Lctico deshidrogenasa, aldolasa, aspartato y
alanina transferasa.

Enzimas de uso diagnstico

GOT
GPT
GLDH
SDH
CPK
LDH

Enzima
Fosfatasa cida
Fosfatasa alcalina
Amilasa
Aspartato amino transferasa
Alanina amino transferasa
Creatino fosfo quinasa
Dehidrogenasa lctica

Uso diagnstico
Cancer de prstata
Enf. heptica y osea
Enf. pancretica
Enf. heptica y cardiaca
Enf. heptica
Enf. muscular y cardiaca
Infarto de miocardio

Papel de las enzimas en la

medicina
Establecer un diagnstico,
como en el caso de las
enzimas del infarto de
miocardio (CPK y LDH).
Valorar la magnitud de la
lesin
Monitorizar la mejora del
paciente.
Mostrar la repeticin del
fenmeno (reinfarto)

CPK
TGO

LDH

10

Das despus del infarto de

Miocardio.

Isoenzimas
Enzimas que realizan la misma funcin pero difieren en su estructura
qumica y propiedades cinticas.
Las formas isoenzimticas distintas pueden pertenecer a distintos
tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen.
Generalmente son estructuras oligomricas con varios tipos de cadenas
proteicas -dmeros o tetrmeros- .

Isoenzimas LDH

Bazo

Pulmones

Eritrocitos

Msculo

Miocardio

Rin

LDH1
LDH2
LDH3
LDH4
LDH5

Hgado

100%
%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%

Dehidrogenasa lctica
Existen cinco isoenzimas
de la deshidrogenasa lctica
(LDH). Cada una es un oligmero con cuatro protmeros de los tipos H y M y
tiene un PM de 34 000.
Los protmeros se combinan de manera distinta y se
originan en distintos tejidos
con preferencia.
El suero tiene un contenido
representativo de todos los
tejidos.

Isoenzima SubunidadesTejido predominante

LDH1
HHHH
corazn
LDH2
HHHM
corazn
LDH3
HHMM
rin, pulmn
LDH4
HMMM
hgado
LDH5
MMMM
hgado

normal

infarto

Creatino fosfokinasa
Isoenzima
CK1
Ck2
CK3

Subunidades
BB
MB
MM

Existen tres isoenzimas de

la creatino fosfokinasa.
Cada una es un dmero
formado por la combinacin de protmeros M y B.
Cada dmero representa a
un tejido en particular.

Tejido predominante
Cerebro
Msculo cardiaco
Msculo esqueltico
(+)
CK1
CK2
CK3

(-)