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APLICADA
Diana C.Charaja
Rosmery Cardenas Urtado
Dalia Chacon Sanchez
INTRODUCCION
Actinomicetos
bacterias filamentosas parecidas superficialmente a los hongos.
El crecimiento es un micelio ramificado que tiende
bacterianos
Tiene un rol en la descomposicin de materia orgnica: la
a fragmentarse en elementos
celulosa y quitina.
Renuevan las reservas de nutrientes en la tierra y son fundamentales en la formacin de
humus.
La
La mayora
mayora son
son seres
seres aerobios
aerobios estrictos,
estrictos, que
que crecen
crecen bien
bien a
a
temperaturas
del
orden
de
los
25C,
son
microorganismos
temperaturas del orden de los 25C, son microorganismos mesfilos;
mesfilos; yy
a
a pH
pH alcalino
alcalino (pH
(pH
9).
9).
Producen
Producen vitaminas
vitaminas (principalmente
(principalmente del
del grupo
grupo B),
B), antibiticos
antibiticos yy
pigmentos
pigmentos de
de gran
gran inters
inters industrial.
industrial.
Estreptograminas:
Producidas por diversas especies de streptomyces
Constituyen un amplio conjunto de pptidos cclicos
Grupo de antibiticos formados por 2 componentes: estreptogramina A y
estreptogramina B
Ambas inhiben la sntesis proteica bacteriana,
Actuando sobre el dominio de la peptidil-transferasa de la subunidad
ribosomal
estreptograminas
estreptograminas:
Micamicina,
pristinamicina,.
vernamicina
virginamicina
La mayoria de
antibioticos son
sustancias
producidas por
Streptomycetos
VERNAMICINA
Este antibiotico
Vernamicina
probablemente
inhibe la union
inhibe la formacion
de fmet-tRNA a
enlaces
los ribosomas 70 de
peptidicos mediante
S en la sub
la inhibicion de union
unidad 50S
ARNt al ribosoma
Resumen
Se aislaron 75 cepas de
actinomycetos
denominadas AZ-SH-29
de diferentes muestras
de suelo de diferentes
localidades de Egipto
Estas bacterias
producen un agente
antimicrobiano amplio
espectro
Durante la formacin
agente antimicrobiano
Parmetros de control:
pH,Temp,periodo de
incubacion y diferentes
fuente de carbono y
nitrogeno
Este analisis
indica la
formula
empirica
C20H25N2O5
Se determino las
concentraciones
minimas de
inhibicion (CMI)
El agente
antimicrobiano
purificado
pertenece a
depsipeptidos
(MICAMICINA) del
grupo
Vernamicina
producido po S.
ramulosus.
Materiales y Metodos
Aislamiento
actinomiceto
AZ-SH-29
Se aislo apartir
de muestras de
suelo
Se purifico
utilizando
tecnica
Dilucion en placa
Deteccin actividad
antimicrobiana
Lecitinasa---medio yema de
huevo
Lipasa
Proteasa
Pectinasa
A amilasa
Pruebas
bioquimicas
Prueba catalasa
Reduccion nitrato
Produccion H2S
(utilizand diferentes
fuentes de carbono
y nitrogeno
Estudio de
caracterizacin del
actinomiceto aislado
Morfologicas: hifas
aereas, masa de
esporas, superficie de
esporas,color micelios
aereos
Y el sustrato
Fisiologicas y
bioqquimicas:
Se detecto
Parmetros de control en la
biosntesis del agente
antimicrobiano
Incluyen:
Tamao inoculo
Periodo
incubacion
Valores Ph
T incubacion
Fuentes carbono
y nitrogeno
(glucosa , nitrato
de sodio
Fermentacion
Extraccion
Precipitacion
Purificacion
Micrografia electronica de
barrido del actinomiceto
aislado
Crecio en un (medio de agar
+ almidon+nitrato)
20 ul de compuesto
purificado fue
cargado en tiras de
papel de
cromatografia
Se secaron al aire y
colocaron e placas de
agar sembradas
con-. Micrococcus,
S.aureus,B.Subtilis
E.Coli, Klebsiella y
candida albicans
Como cepas
bacterianas de
prueba
Analizaron las
propiedades fisicoquimicas del agente
antimicrobiano
Analisis
elemental
C,H,ON, S
Analisis
espectroscopico
(IR,UV,espectro
de masas y
espectro RMN)
Se evaluo
reaccion del
agente
antimicrobiano
con siguientes
pruebas:
Rx Molish
Rx Fehling
Nihidrina
Nitroprusiato
Cloruro ferrico
Rx Mayer
Se determino su
actividad biologica
Con la prueba de CMI
Resultados
1.La deteccin de
las actividades
antimicrobianas
Bacterias Gram
positivas
Bacterias Gram
negativas
Hongos unicelulares
2.Caracterizaciones
del actinomiceto
aislado, AZ-SH-29
2.1Caractersticas morfolgicas
Espiral
Gris rosa
Lisa
Micelio marrn amarillento
Pigmento difusible marrn
3.Caractersticas
fisiolgicas y
bioqumicas
El aislado AZ-SH-29 utiliza D-manosa, D-glucosa, Ramnosa, manitol, L-arabinosa, Rafinosa , maltosa, LCycteine, L-fenilalanina, L-Arginina, y citrato de sodio
D- galactosa, sacarosa, meso-inositol, lactosa, L-Valina, y L-histidina son negativos
Crecimiento en presencia de hasta (10%) de NaCl
El crecimiento no se inhibe en presencia de azida de sodio y fenol
Los filtrados
transparentes fueron
ajustados a pH 7,0
acetato de etilo al
nivel de 1: 1 (v / v)
La fase orgnica se
recogi, y se evapor
bajo presin reducida
usando un evaporador
rotatorio
La fase orgnica se
recogi, y se evapor
bajo presin reducida
usando un evaporador
rotatorio
El material residual se
disolvi en la menor
cantidad de DMSO y
filtrado
El agente
antimicrobiano se
precipit por el ter de
petrleo (pe 60-80? C)
y se centrifug a 4000
rpm durante 15 min
donde un precipitado
en polvo de color
marrn podra ser
obtenido
El proceso de
purificacin a travs de
cromatografa con gel
de slice
La RMN- espectro
4. Discusin
AZ-SH-29 se aisl de una muestra del suelo (medio almidn nitrato)
La biosntesis mximo se alcanz al final de un periodo de incubacin de cinco das para la produccin
de agente antimicrobiano.
rendimiento mximo del agente antimicrobiano se produjo al final de una temperatura de incubacin
de 30 C
efecto de diferentes fuentes de carbono y nitrgeno en la produccin del agente antimicrobiano
indicaron queStreptomyces ramulosus-AZ-SH-29 requieren glucosa y nitrato de sodio a
concentraciones 2.5.0 g / 100 ml;0,25 g / 100, respectivamente
Conclusiones: