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vitro:
PCR (Polymerase Chain
Reaction)
PCR
Polymerase Chain
Es la amplificacin
de DNA in vitro por medio de la
Reaction
polimerizacin en cadena de DNA utilizando un
termociclador.
El
Se
Termociclador
La
PCR se realiza en
un Thermo Cycler
Termociclador.
Es
2. Apareamiento o anneling:
3. Polimerizacin o Extensin.
Una Polimerasa de DNA extiende los primers, en el
espacio comprendido entre ambos primers, y coloca
dinucletidos trifosfatados (dNTPs) de 5a 3 leyendo el
DNA de 3a 5. De estas forma sintetiza la secuencia
complementaria de las hebras de DNA molde
Se efecta a 72C por 1 minutos (puede variar segn sea
necesario)
ADYUVANTES DE LA PCR
Polimerasa
Se
Anlisis de la Muestra
Anlisis de la Muestra
La posterior visualizacin se puede realizar con
bromuro de etidio (lmpara de luz UV), tincin de
plata, fluorescencia, radioactividad
Ladder: pesos conocidos
1: Fragmento a 1857 pb
2 y 4: Fragmento a 800 pb
3: No hay producto
5: Multiples bandas (primers
inespecficos se pegan a
varios sitios)
Anlisis de la Muestra
ADN genmico
cDNA (RT-PCR)
Aplicaciones
Deteccin de agentes infecciosos como: hepatitis B y C,
papiloma virus, HIV, entre otros
Anlisis de DNA de cualquier organismo vivo o muerto,
anlisis de fsiles
Investigacin forense
Pruebas de paternidad
Aplicaciones
Criminalstica
Ejemplo de un caso de
criminalstica
resuelto
utilizando electroforesis en
gel vertical de acrilamida.
medicina
forense,
Micropipetas de 2, 20 y 200 ul
Puntas estriles
BSA
Polimerasa Taq
Mix 1
17.3
Mix 2
2.7
Componente
10.3
3.0
MgCl2 25mM
0.5
BSA 100X
1.5
2.5 Mm de dNTPs
1.0
1.0
2.5
Buffer 10X
0.2
Taq pol
5.0
DNA en estudio
Total: 25 ul