Universidad Nacional de Trujillo

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Departamento de Bioqumica
Asignatura Bioqumica General

TEMA N 35: Replicacin de DNA.

Caractersticas. Mecanismo y enzimas
involucradas. Inhibidores. Regulacin.
Diferencias entre procariontes y
eucariontes
Dra. Anabel Gonzlez Siccha

Docente Ctedra de Bioqumica

Trujillo, 25 de Julio de 2015

cidos Nucleicos
Formados

por
subunidades
llamadas
nucletidos; pueden ser un solo nucletido o
una cadena larga de nucletidos.

cidos Nucleicos
Nucletidos individuales:
Trifosfato de adenosina

(ATP): principal molcula

portadora de energa a
corto plazo en las clulas.
Monofosfato de adenosina
cclico (AMP cclico):
mensajero intracelular.

cidos Nucleicos
cidos nucleicos de
cadena larga:
cido desoxirribonucleico

(ADN): material gentico

de todas las clulas vivas.
cido ribonucleico (ARN):
material gentico de
algunos virus; transfiere la
informacin gentica del
ADN a las protenas.

Funcin del ADN

Por qu es tan

importante que los

cromosomas pasen de la
clula madre a las clulas
hijas?
Los cromosomas estn
formados por genes, los
segmentos de ADN que
son las unidades de la
herencia.
Los genes controlan
caractersticas como:
Color del pelo
Tipo de sangre
Color de la piel
Color de los ojos

Estructura del ADN

Una molcula de ADN se

compone de dos cadenas

de nucletidos unidas por
puentes de hidrgeno
entre las bases
nitrogenadas.
Las cadenas de nucletidos
forman una espiral
alrededor de un centro
comn.
La forma espiral de la
molcula es una doble
hlice.

Estructura del ADN

Los nucletidos estn unidos por enlaces entre

el grupo fosfato de un nucletido y el azcar

del siguiente nucletido.
Se forma una larga cadena de nucletidos
enlazados del fosfato al azcar.
Las bases nitrogenadas se extienden hacia
dentro desde la cadena azcar-fosfato. En el
ADN hay 4 bases:
adenina (A), citosina (C), guanina (G) y

timina (T).

La estructura se mantiene por

enlaces de hidrgeno entre las
bases nitrogenadas que se
encuentran orientadas hacia el
interior de las cadenas

La replicacin del
ADN
Es el proceso

mediante el cual la
molcula de ADN hace
copias de s misma (y,
por tanto del
cromosoma).
En el ncleo hay
muchos nucletidos
libres que son los
bloques de
construccin del
nuevo ADN .

Caractersticas de la
Replicacin
Es semiconservativa
Es ordenada, secuencial, uni y bidireccional,

las hebras van en direccin de 3 a 5 y la otra

en direccin de 5 a 3,
Son antiparalelas
Requiere de un molde y un cebador
Es discontinua, una hebra se sintetiza en
fragmentos de ARN y ADN (F.O.)
Utiliza sustratos activados dNTPs
Es el proceso enzimtico ms exacto que se
conoce.
11

Modelos de replicacin:
conservativo

semi-conservativo

Direccionalidad
de la replicacin:
unidireccional /
bidireccional ?

Formas de replicacin:
En general, es Bidireccional:
genomas bacterianos
cromosomas de clulas eucariotas
En algunos casos es Unidireccional,
ej:
en el ADN mitocondrial
en algunos virus

3
Las polimerasas
conocidas aaden
nucletidos
solamente en la
direccin 5 3

15

Tema 6: Estructura y replicacin del

material gentico

La Replicacin

Enzimas:
Topoisomerasas
Helicasas
SSB
Primasa
ADN pol I
ADN pol III
DNA ligasa

16

Etapas de la Replicacin
1. Iniciacin: Participan las enzimas Helicasa

que abre la cadena y ATP, requiere de

unas protenas de unin simple que
protegen a las cadenas de ADN
separadas, y se forma un promotor
replicativo mvil. Se adiciona un
segmento corto de RNA (10-200 nt de
largo) por accin de la RNA polimerasa.

17

Helicasas:

catalizan el desenrollamiento de la doble hlice,

rompen los puentes de hidrgeno

Modelo de accin de las helicasas

G. Waksman from S. Korolev et al., Cell (1997) 90:635-647.

Etapas de la Replicacin
2. Elongacin: participa la ADN polimerasa III
que replica el ADN, requiere de d-NTP.
Se forman enlaces entre los fosfatos y los
azcares de los nucletidos que se han
apareado con las cadenas de ADN. El
resultado es que se forman dos copias
idnticas de la molcula original de ADN.

19

El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

20

Tema 6: Estructura y replicacin del

material gentico

El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

21

Tema 6: Estructura y replicacin del

material gentico

Etapas de la Replicacin
3. Terminacin: participan las ADN
polimerasa I que saca los fragmentos de
Okasaki y coloca ADN (su funcin es
reparar y replicar), requiere de NAD y la
ADN ligasa que une los segmentos
contiguos de ADN.
Las dos nuevas molculas de ADN se
enroscan y de nuevo toman la forma de
una doble hlice.

DNA pol I: en la replicacin,

sustituye el ARN (cebador) por ADN
A
U

ARN

ADN

H20
UMP

dTTP
PPi

DNA ligasa: une los segmentos

contiguos de DNA en la reaccin

Etapas de la Replicacin

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Topoisomerasas de tipo I :

cortan 1 sola hebra

La enzima se une covalentemente al extremo 5

del corte formando un enlace fosfodiester con
el OH- de la Tyr en el sitio activo.

Replicacin del DNA

Replicacin: continua (cadena adelantada,
cebador slo inicio) y discontinua (cadena
retrasada)
Discontinua
Cebador (pequeo RNA 2-60 nucletidos
aadido por enzima primasa o RNA pol que
provee 3 OH.
Fragmento de Okazaki por DNA pol III
(1500 bp en procariotas y 150 en
eucariotas)
Pol I elimina cebador 3 -> 5 y llena
huecos (gap)
Ligacin (DNA ligasa, enlace fosfodister)
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Inhibidores de la Replicacin
Son eficaces drogas antibacterianas que
inhiben a las topoisomerasas
Ejemplos:
El cido nalidxico- antibitico utilizado en
infecciones de las vias urinarias. Se une a la
subunidad A de la girasa
Novobiocina : se une a la subunidad B

Replicacin : Procariontes
Enzimas que sintetizan (replican) el DNA

E. coli
DNA polimerasa I (rellena huecos y

repara)
DNA polimerasa II y III (funcin
principal en la sntesis)
Aade bases en ambas cadenas en
la direccin 5 3
Requiere un 3 OH final
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Replicacin : Eucariontes
Eucariotas
5 polimerasas

y principal en replicacin
, y exonucleasas
Correccin de pruebas: actividad 3
5 exonucleotdica. Sustituye bases
mal emparejadas (10-5) por correctas
(10-7); mecanismos de reparacin
adicionales la reducen hasta 10-10

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Comparacin de las polimerasas

de DNA procariotas y eucariotas
E.
Coli

Mamfero

Llenado de huecos y sntesis de la

cadena retardada

II

Correccin de lectura y reparacin

de DNA

Reparacin de DNA

Sntesis de DNA mitocondrial

Sntesis procesiva de la cadena lider

III

Funcin

Herencia del DNA

mitocondrial

Regin hipervariable. Genoma de 16571 pares de

bases: Hebra pesada (H), Hebra liviana (L).
Primer Directo H34, primer reverso L15829