FRAGILIDAD OSMTICA

RESISTENCIA GLOBULAR

ANEMIAS HEMOLTICAS
CARACTERSTICAS
1)

ACORTAM. DE LA SUPERVIVENCIA NORMAL

DESTRUCCIN PREMATURA DE LOS GRs.

2)

ACUM. DE LOS PRODUCTOS DEL CATABOLISMO DE LA Hb

3)

AUM. DE LA ERITROPOYESIS EN LA MO.

LA HEMLISIS INTRAVASCULAR SE MANIFIESTA x:
1) HEMOGLOBINEMIA

2)

HEMOGLOBINURIA
3) METAHEMALBUMINEMIA

4) ICTERICIA

5) HEMOSIDERINURIA
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3
3

ANEMIAS HEMOLTICAS
Pruebas de laboratorio:
de reticulocitos.
Frotis de sangre perif.: anormales.
del catabolismo del hemo y
de bilirrubina no conjugada: ictericia
de la haptoglobina srica.
de la hemopexina srica.
Hemosiderina en orina.

Propiedades

Membrana Eritroctica

Membrana Eritroctica

Na+K+ -ATPasa

Na+ : 6 mmoles/L

Na+ : 140 mmoles/L

Plasma

K + : 100 mmoles/L

K + : 4 mmoles/L

FRAGILIDAD OSMTICA
RESISTENCIA OSMTICA
Resistencia de los GRs a la hemlisis se mide en
condiciones de tensin osmtica, q dependen del volumen
de la clula, el rea de la superficie y la funcin de la
membrana.

FRAGILIDAD OSMTICA de GRs expuestos a sols

hipots decrs provoc. la entrada de agua en GR (se
lisan). Mide la habil. de los GR de increm. su vol. al ser
sometidos a sols. hipot-nicas decrecs de NaCl.
Procedimiento: Suspender GRs en 1 serie de
tubos con sols. hipots de NaCl de 0.85 % a 0.0 %.
Incub. a temp. amb. x 30 y centrifugar.
Se mide el % de hemlisis en las sols. sobrenads.
y se grafica cada conc. de NaCl vs % de
hemlisis.
10

Solucin de Dacie:

Osmticamente Equiv. a 10
g/L
Cloruro de sodio
Fosfato disdico anh.
Fosfato monosdico 2 H2O
Agua destilada c.s.p.

180,00 g
27,31 g
4,86 g
2000 mL

Conserv. en refrigeracin
Se utiliza una Sol. osmticamente equiv a 1 g/L

11

Solucin Dacie
Osmticamente equiv. a: 1 g/100
mL
Cloruro de sodio
9g
Fosfato disdico anhidro
1,365
5g
Fosfato monosdico 2 H2O 0,243
g
Agua destilada c.s.p.
1,000 mL

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ClNa
1 g/100
mL

Agua
bides
t

ClNa
1 g/100
mL

Agua
bides
t

Osm
t.
Eq a:

Abs. a
540
m

8,5

1,5

4,25

0,75

0,85

7,5

2,5

3,75

1,25

0,75

6,5

3,5

3,25

1,75

0,65

6,0

3,0

3,0

2,0

0,6

5,5

2,75

2,75

2,25

0,55

5,0

2,5

2,5

2,5

0,5

4,5

2,25

2,25

2,75

0,45

4,0

2,0

2,0

3,0

0,4

3,5

1,75

1,75

3,25

0,35

3,0

1,5

1,5

3,5

0,3

2,0

1,0

1,0

4,0

0,2

13

Sangr
Leer
Agu
e
%
Absorb
a Hepari
Hemlisi
540
Dest
s
nm
nizada

Tubo
N

% de
NaCl

Sol
ClNa
1%

0.85

6.8

1.2

0.02

0.75

0.02

0.65

5.2

2.8

0.02

0.60

4.8

3.2

0.02

0.55

4.4

3.6

0.02

0.50

0.02

0.45

3.6

4.4

0.02

0.40

3.2

4.8

0.02

0.35

2.8

5.2

0.02

10

0.30

2.4

5.6

0.02

11

0.20

1.6

6.4

0.02

12

0.10

0.8

7.2

0.02

14

Resistencia globular es la q ptan los GRs frente a sols.

salinas hipotnicas de conc. decrecientes.
Resist. globular mnima: Cuando se inicia la hemlisis
Resist. globular mxima: Cuando la hemlisis es
completa.
La ME est constituida por lpidos y protenas con poros x
los q puede salir la Hb, cuando la ME se altera en
contacto con sols hipotnicas. En estas condiciones el
agua penetra en la clula, se prod 1 desplazam. de
electrolitos y la Hb escapa x los poros.

Frag. Osm. aum (Resist Osm dism)

15

Procedimiento
1) 20 L de sangre total en tubos con
5 mL de solucin de Dacie
2) Homogenizar y dejar en reposo 30
Centrif. a 2500 rpm x 5 min

0,85%

0,75% 0,65% 0,60% 0,55%

0,50%

0,45%

0,40%

0,35%

0,30%

0,20%

0,10%

16

Los sobrenadantes se leen en el espectrofotmetro a 540

m (o en el fotocolormetro con filtro verde) usando como
blanco el sobrenadante correspondiente a 0,85 %. Si en
esta concentracin aparece hemlisis se prepara una
solucin de mayor concentracin: 1,00% de cloruro de
sodio para ser utilizada como blanco.

17

18

19

CALCULO:

% de hemlisis = Abs. del sobrenadante de c/ tubo x 100

Abs. del sobrenadante 100 % hemoliz.

Los GRs normales empiezan a hemolizar a

concs. de 0.5 % de NaCl.
La hemlisis es completa a 0.3 % de NaCl.

20

TUBO

% de NaCl

% de
Hemlisis

0,85

0,75

0,65

0,60

0,55

0,50

0 5

0,45

5 45

0,40

50 90

0,35

90 99

10

0,30

97 100

11

0,20

100

12

0,10

100
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22
22

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Interpretacin
GRs normales: Hemlisis inicial a 0,5%
Hemlisis completa a 0,3
%.
Esferocitos tienen membrana +
permeable:
F.O y la lisis: se inicia a conc. + altas y
termina entre 0,5 a 0,4 %
Talasemia: F.O.
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