GRAM POSITIVAS

GRAM POSITIVA

Se conoce como bacterias gram positivas al grupo de

bacterias que no posee una membrana externa capaz de
proteger el citoplasma bacteriano, que tienen una
gruesa capa de peptidoglicano y que presentan cidos
teicoicos en su superficie. Entre otras cosas, se
distinguen especialmente por teirse de azul oscuro o
violeta por la tincin de gram aplicada en bacteriologa
para analizar muestras de laboratorio y es justamente
esto ltimo lo que explica su nombre de gram
positivas, aunque cabe mencionar que la acepcin
grampositivas tambin es correcta.

PRUEBAS BIOQUMICAS
Las pruebas bioqumicas son una serie de anlisis
clnicos que sirven a la Medicina como apoyo a la
hora de diagnosticar infecciones por bacterias.
Consisten en distintos test qumicos aplicados a
medios biolgicos, los cuales, conocida su
reaccin, nos permite identificar distintos
microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento consiste en
determinar la actividad de una va metablica a
partir de un sustrato que se incorpora en un
medio de cultivo.

AGAR SANGRE DE CARNERO

Es un medio de cultivo enriquecido preparado para la
recuperacin y aislamiento de toda clase de
microorganismos grampositivos y gramnegativos
incluyendo aquellos decrecimiento exigente como
Haemophilus spp y Listeria, El medio ha sido
adicionado con sangre de cordero con el fin de
establecer en los microorganismos caractersticas de
hemolisis(alfa, beta gamma) que puedan ayudar a su
identificacin.

AGAR SANGRE
El agar sangre es una combinacin de un agar base
(agar nutritivo) con el agregado de 5 %
de sangre ovina, tambin puede usarse sangre
humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar
sangre aporta muchos factores de enriquecimiento.
Se usa tambin para ver la capacidad hemoltica de
los microorganismos patgenos (que es un factor de
virulencia).

AGAR TRIPTICASA DE SOYA

Es un medio de cultivo recomendado para
larecuperacin y aislamiento de toda clase
debacterias, grampositivas y gramnegativasaerobia

AGAR CHOCOLATE
Es un medio de cultivo enriquecido y no
selectivo. Es una variante del agar sangre.
Contiene glbulos rojos, que han sido lisados
por el suave calentamiento a 56 C. Este agar
se usa para el delicado y exigente crecimiento
de bacterias respiratorias.Estas bacterias
necesitan factores de crecimiento, como
el NAD y hematina, componentes que podemos
encontrar dentro de los glbulos rojos; por lo
tanto, un prerrequisito lgico para el crecimiento
es la lisis de los glbulos rojos. El agar se llama
as debido a su parecido con el chocolate, pero
no contiene nada de este.Debido a que este
medio soporta muchos tipos de bacterias, no es
muy til para coprocultivos.

MANITOL
Principio
Al utilizar el microorganismo al manitol como sustrato e
incorporarlo al sistema Embden-Meyerhoff-Parnas, que
tiene como productos finales cidos que provocan la
disminucin del pH en el medio de cultivo, que se detecta
mediante el viraje del indicador rojo de fenol a amarillo.
Resultados
- Positivo: cuando el indicador del medio vira a amarillo
- Negativo: cuando conserva su color rojo

CATALASA
Prueba catalasa se usa con frecuencia, para diferenciar
miembros de la familia Micrococcaceae de miembros
de la familia Streptococcaceae.
Resultados
- Positiva: Una prueba positiva esta dada por la
aparicin rpida y sostenida de burbujas o
efervescencia.
- Negativa: Unas pocas burbujas pequeas despus de
20 a 30 segundos se considera un resultado negativo.

Catalasa Positiva(+)
Staphylococcus
Catalasa Negativa (-)
Streptococcus

PRUEBA DE COAGULASA
Detecta la produccin de
una enzima que coagula
las protenas de la sangre
Se hace en medio que
tiene plasma
Tpica de las Gram positivo
S. aureus

COAGULASA
Principio
La coagulasa es una protena de composicin qumica
desconocida, que tiene actividad similar a la protombina,
capaz de convertir el fibringeno en fibrina, lo que da
como resultado la formacin de un cogulo visible en los
sistemas apropiados. Se utiliza para identificar
Staphylococcus aureus de otras especies. La
coagulasa se presenta en dos formas, ligada y libre y
para determinarlas se utiliza dos procedimientos: en
lmina y en tubo; si la prueba en lmina da positiva, no
hay necesidad de hacer la prueba en tubo.

Coagulasa Negativa (-)

S. epidermidis
S. saprophyticus

Resultados
- Positivo: La presencia de
aglutinacin o formacin de Coagulasa Positiva (+)
S. aureus
grumos
- Negativo: No se observa
aglutinacin,
permanece
emulsionada la colonia
Prueba en tubo (Coagulasa
libre) Resultados
- Positivo: La formacin de
un cogulo
- Negativo: No se observa
formacin
de
coagulo,
permanece lquido el plasma

PRUEBA DNASA

Principio
Se basa en la presencia de la enzima
termoestable DNAsa que es capaz de
clivar los enlaces fosfodiester internos de la
molcula de DNA. Para evidenciar la
presencia de la enzima, se inunda el medio
con cido clorhdrico normal, el cual
precipita la molcula del cido pero no sus
polmeros.
Resultados
- Positivo: La formacin de un halo
transparente alrededor de la siembra indica
presencia de DNAsa.
- Negativo: La formacin de un precipitado
alrededor de la siembra indica ausencia de
la enzima

 Detecta presencia de deoxiribonucleasa

Prueba tpica para cocos Gram positivo
Tpico de bacterias patgenas que rompen DNA en
clulas del hospedero
El tinte se pega a las cargas negativas del DNA;
ausencia del tinte, ausencia DNA

VOGES PROSKAUER
Produccin de alcohol y 2,3 butanodiol en lugar de
cidos a partir de un azcar
Especies de Enterobacter y Serratia y algunas
Gram positivo como Bacillus
Se mide acetona que es un precursor de 2,3
butanodiol
Luego de perodo de incubacin se aade el
reactivo de Barrit: alfanaftol 5% y KOH 40% en
alcohol absoluto
Prueba positiva es la formacin de un complejo
rojo rosado

BACILOS
La mayora de bacilos gram positivos se
encuentran ampliamente distribuidos en la
naturaleza y pueden formar parte de la microbiota
normal tanto en el hombre como en animales.
Frecuentemente no son patgenos primarios para
el hombre, aunque hay algunas especies virulentas
e importantes en patologa humana

Bacillus
Bacilos Gram positivos esporulados, largos, gruesos y
delgados con bordes recortados y pueden agruparse en
cadena; aerobios estrictos, con excepcin de algunas
especies facultativas. Se encuentran distribuidos en
suelo, aguas y vegetales y que porsus esporas logran
mantenerse muchos aos, an en condiciones
adversas.

Listeria
Cocobacilos, Gram positivos, que se presentan aislados o agrupados
en cadenas cortas; mviles a 22C mostrando un aspecto de
sombrilla, pero inmviles a 37C.
Crecen bien sobre placas de agar sangre, produciendo colonias
pequeas, translcidas, beta hemolticas, similares a Streptococcus
sp, pero el halo de hemlisis es pequeo en comparacin con el
tamao de su colonia y a veces es necesario remover la colonia para
visualizar la hemlisis. Se desarrollan a 30-37C pero crece a bajas
temperaturas (4C), caracterstica que le permite desarrollarse en
alimentos refrigerados y producir infeccin por su consumo,
convirtindose en el agente ms importante por contaminacin
alimentaria.
Son catalasa positiva y utilizan hidratos de carbono, como la glucosa,
manosa y ramnosa, pero no el manitol. Hidrolizan la esculina. Son
aerobios facultativos y crecen mejor con una atmsfera de CO2.

Erysipelothrix rusiopathiae
Bacilos gram positivos, microareflicos y exigentes. Carecen
de la enzima catalasa negativos y producen H2S. Son
inmviles y no sintetizan cpsula ni esporos. Esta especie
se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza; En
humanos produce una celulitis erisipeloide caracterizada
por una lesin eritematosa prpura, dolorosa, no supurada
y bastante pruriginosa. En general el proceso es
autolimitado y rara vez causa enfermedad sistmica la
enfermedad humana es poco frecuente y se limita a
trabajadores de la pesca, de mataderos, carniceros, etc.,
configurando
una
enfermedad
laboral.
Presenta
hialuronidasa y neuraminidasa como mecanismos de
patogenicidad.

Corynebacterium
Bacilos Gram positivos pleomrficos, la mayora de las
veces en forma de mazo y agrupados en empalizada o
formando letras en V, Y, L o caracteres chinos; por su
morfologa tpica se conocen como difteroides. Son
facultativos pero hay algunas especies aerobias estrictas.
Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza
(suelo, agua, superficie de plantas) y forman parte de la
microbiota normal de humanos y algunos animales

COCOS

Los cocos gram positivos excluyendo las enterobacterias,

son los microorganismos ms frecuentemente aislados de
muestras de pacientes y se han involucrado como
agentes importantes en procesos de enfermedades
infecciosas desde el ao 1836. Se encuentran
ampliamente distribuidos en la naturaleza y forman parte
de la flora microbiana normal de la piel y las mucosas del
hombre y de animales. Las infecciones en el hombre se
producen por contacto directo con individuos infectados o
portadores sanos, o por penetracin a travs de piel y
mucosas mediante objetos corto punzantes por heridas,
trauma o procedimientos quirrgicos o por la accin de
toxinas producidas por cepas de algunas especies.

Staphylococcus
Los estafilococos son clulas esfricas gram positivas
dispuestas en grupos semejantes a racimos de uvas en
medios slidos o en pares, cadenas o ttradas, en
medios lquidos. Crecen bien en medios simples y de
acuerdo a la especie producen diferentes pigmentos:
blanco, amarillo y dorado y algunas de ellas producen
beta hemlisis. Son catalasa positiva, inmviles, no
esporulados, con raras excepciones, no encapsulados y
son aerobios o anaerobios facultativos.

Sthaphylococcus.
Los estafilococos son cocos gram positivos que se
agrupan en racimos. La especie S. aureus es la de
mayor patogenicidad reconocida por su capacidad de
producir enzimas extracelulares y toxinas. La enzima
coagulasa permite diferenciar esta especie del resto de
estafilococos de inters mdico, como S. epidermidis y
S. saprophyticus.

Especies: Existen 30 especies, las tres de ms importancia

clnica son S.
aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus.
Clasificacin:
Staphylococcus coagulasa positiva: Staphylococcus
aureusStaphylococcus coagulasa negativos (SCN):
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus
Staphylococcus haemolyticus
Staphylococcus lugdunensis
Staphylococcus schleiferi
Staphylococcus intermedius
Staphylococcus hycus
Staphylococcus capitis

Caractersticas generales.
Son clulas esfricas (cocos) grampositivas, que se
agrupan de forma irregular, formando racimos de uva.
Tambin pueden observarse aislados, en cadenas
cortas y en pares. No son mviles, ni forman esporas. Son
anaerobios
facultativos y catalasa positiva.
Cultivo: Crecen bien en los medios no selectivos como
agar sangre de carnero
agar soya-tripticasa con sangre de carnero 5% a
temperatura de 37 C, en 18 a 24 horas, formando
colonias redondas, lisas, elevadas, algunas son beta
hemolticas y otras son pigmentadas, con variaciones
desde color gris, blanco
hasta amarillo intenso

Identificacin
Se utilizan diferentes tcnicas y observacin de los
cultivos
como: morfologa de las colonias, pruebas fisiolgicas o
reacciones bioqumicas
que incluyen la prueba de catalasa, coagulasa en tubo,
prueba de novobiocina y otras.

Streptococcus
Los estreptococos son clulas esfricas u ovaladas gram
positivas dispuestas en pares o cadenas cortas o largas.
Son ms exigentes que los estafilococos, no crecen en
medios simples, por el contrario requieren de factores de
crecimiento como la sangre y sus derivados. Producen
diferentes tipos de hemlisis, caracterstica que permite
clasificarlos en beta hemolticos, alfa hemolticos o no
hemolticos. No forman pigmentos, son catalasa negativa,
inmviles, no esporulados, con formacin de cpsula
variable. Son aerobios y anaerobios facultativos.

Clasificacin:
Streptococcus pyogenes (Estreptococo hemoltico del grupo A).
Son
hemolticos y susceptibles a la Bacitracina y producen hidrlisis
del1Lpirrolidonil- -naftilamida (PYR positivos).
Streptococcus agalactiae (Estreptococo hemoltico del grupo B).
Son hemolticos y susceptibles a la optoquina, hidrolizan el hipurato
de sodio,factor CAMP positivos y la mayora Bacitracina negativos.
Streptococcus equisimilis (Estreptococo hemoltico del grupo C).
Estreptococo hemoltico del grupo C y G. Son hemolticos,
sensibles al
disco de trimethoprim-sulfametoxazol (SXT), resistentes a Bacitracina,
CAMP negativos.
Streptococcus pneumoniae (Neumococo). Son hemolticos,
sensibles a
la optoquina, solubles en bilis y en sales biliares.
Streptococcus viridans.son hemolticos.

Cultivo
Crecen bien en los medios no selectivos como agar sangre
de carnero, agar soya-tripticasa con sangre de carnero 5% a
temperatura de 37 C, en 18 a 24 horas, formando colonias
discoidales, grises, opalescentes, de bordes lisos o
arrugados, pueden ser, , o hemolticas lo que permite su
identificacin. En los estreptococos del grupo A las colonias
suelen ser mucoides, mates o brillantes. Algunas especies
requieren de un 5 a un 10% de CO2.
Los estreptococos pueden producir enfermedades por su
capacidad de multiplicarse en los tejidos e invadirlos o por la
produccin de sustancias extracelulares, como enzimas o
toxinas. En los del grupo A se encuentran las enzimas como
hialuronidasa, estreptocinasa, estreptodornasa y otras. Entre
las
toxinas est la toxina eritrognica, estreptolisina O y S.

Identificacin
se realiza por pruebas presuntivas o fisiolgicas y por
pruebas serolgicas. Para ello se utilizan diferentes
tcnicas y observacin de los cultivos como: morfologa
de las colonias, las pruebas fisiolgicas o reacciones
bioqumicas incluyen la prueba de catalasa, Bacitracina,
Optoquina, SXT,solubilidad en Bilis, test de CAMP,
Hidrlisis del Hipurato de Sodio, prueba de
PYR y otras.
La identificacin definitiva se realiza mediante la
serologa (para determinar
grupos de Lancefield , B, C, F, G )

Enterococcus
Los enterococos clasificados anteriormente como una
especie de estreptococos, son clulas esfricas gram
positivas dispuestas en pares o cadenas cortas. Al
igual que los estreptococos, requieren de factores de
crecimiento como la sangre y sus derivados. Son
capaces de desarrollarse en medios que contienen
altas concentraciones de NaCl (6.5%) y de bilis (40%).
Pueden producir hemlisis de tipo alfa, beta o ser no
hemolticos. No forman pigmentos, son catalasa
negativa,
inmviles, no esporulados, con formacin de cpsula
variable. Son aerobios y anaerobios facultativos.

CLASIFICACIN
Enterococcus faecalis. Es la especie tipo.
Enterococcus faecium.
E. Avium
E. Gallinarum y otros

Caractersticas generales.
Son cocos grampositivos que se disponen de forma
irregular, sueltos, en
cadenas o parejas, en medios lquidos. No poseen
cpsulas ni forman esporas.
Son inmviles, anaerobios facultativos y catalasa
negativa.

Cultivo
Crecen bien en medios como agar sangre de carnero
5%, agar soyatripticasa con sangre de carnero 5% a
temperatura de 37 C en 18 a 24 horas, forman colonias
ms grandes que las de estreptococos del grupo A,
menos opacas y a veces blanca brillantes como las de
estafilococos, pueden ser, o hemolticos con
excepcin de algunas especies que pueden ser
hemolticos. Pueden crecer a temperaturas entre 10 y 45
C y tolerar hasta 60 C, y a un pH 9,6. Adems crecen
en presencia de 6,5% de cloruro de sodio e hidrolizan
la Bilis-Esculina y producen hidrlisis del L-pirrolidonil-
-naftilamida (PYR positivos). (ver flujograma para
clasificar en gnero y especie).

INTEGRANTES :

IRVING JAFETH ALOR HERNANDEZ

ANDY WILIAM ALVAREZ ANTONIO
MOISES UZIEL ANTONIO HERNANDEZ
AROLD ANTONIO MOGUEL
ALDAIR GOLPE QUEVEDO
JOSE EDUARDO MORALES CRUZ
ALEXIS DANIEL PAVON CORDERO
GERMIAN RUFINO BLAS