Universidad Autnoma de Guerrero

Unidad Acadmica de Ciencias Qumico Biolgicas

Bacteriologa Medica
Enterobacterias: E. coli, Shigella,
Salmonella y Klebsiella
Arizandy Marcelo Marcelo
Isaas Reyes Zavaleta

Mara Lucia Monje Basurto

Regina Rosala Prez Galindo

Vctor Magallon Tapia

Chilpancingo de Los Bravo a 20 de Enero del 2012

ENTEROBACTERIAS

Los bacilos gram pertenecientes a Enterobactericiae

son las bacterias que se recuperan con mayor
frecuencia

en

las

muestras

clnicas,

para

la

identificacin de estas se requiere una seria de

pruebas bioqumicas.

Con pocas excepciones, todos los miembros de las

enterobacterias
caractersticas:

demuestran

las

siguientes

El nitrato es reducido a nitrito

negativa

La citrocromo oxidasa es

Fermentan la glucosa

TAXONOMA DE
ENTEROBACTERIACEAE
Tribu

Los

ESCHERICHIAE

dos gneros dentro de esta tribu son Escherichia

y Shigella.

los miembros de esta tribu se distinguen por lo siguiente:

VP

Citrato Indol +

RM +

Sulfuro de
Hidrogeno
Urea -

PAD
-

Gnero
Escherichia

E. coli es la especie de bacteria mas

recuperada en muestras que llegan al
laboratorio.
Es
un
bacilo
que
reacciona
negativamente a la tincin de Gram
(gramnegativo), es anaerobio facultativo,
mvil por flagelos peritricos (que rodean
su cuerpo), no forma esporas, es capaz de
fermentar la glucosa y la lactosa.
Es uno de los m. o mas frecuentemente
involucrados en la sepsis por Gram y
en el shock inducido por endotoxinas.
Infecciones habituales: vias urinarias,
heridas, neumonia, meningitis.

Pruebas bioqumicas:

VP
KIA: A/A + G

Citrato RM +

Urea -

Movilidad +

Indol +

Lis +

PAD
ARG & ORN+/(variable)

H2S ONPG
+

 E.

coli se serotipifica sobre la base de sus

antgenos de superficie: O, H y K.
En la actualidad se conocen mas de 170
serogrupos de antgenos O. La combinacin de
antgenos O y H define un serotipo de un aislado
(E. coli O157:H7).

E. Coli que producen gastroenteritis

Ciertas cepas de E. coli pueden producir gastroenteritis o
enteritis por seis mecanismos distintos, que conducen a
seis sndromes clnicos diferentes:

Escherichia
coli:
enteropatogna
(EPEC),
enterotoxignica
(ETEC),
enteroinvasiva
(EIEC),
enterohemorrgica (EHEC), enteroagregante (EAEC) y
difusamente adherente (DAEC).

Si bien existen ensayos para identificar todas las

categoras de E. coli que producen gastroenteritis en la
mayora de los casos no es necesario.

Con excepcin de los ensayos para la deteccin de EHEC

no se realizan en forma habitual ensayos fenotpicos ni
serotipificacion de E. coli para el diagnostico de cepas
diarreicognicas.

Escherichia coli enteropatognica (ECEP):

Esta cepa causa diarrea en humanos, conejos, perros y caballos.
Carece de fimbrias pero utilizan la protena intimina, una adhesina,
para adherirse a las clulas intestinales. Este serotipo posee una
serie de factores de virulencia que son similares a los que se
encuentran en Shigella, como la toxina shiga. La adherencia a la
mucosa intestinal causa una reordenacin de la actina en la clula
hospedante, que induce una deformacin significativa. Estas
bacterias son moderadamente invasivas: penetran en las clulas
hospedadoras provocando una respuesta inflamatoria. La causa
principal de diarrea en los afectados por esta cepa son seguramente
los cambios provocados en la ultraestructura de las clulas
intestinales.

Escherichia coli enterotoxignica (ECET):

Se parece mucho a Vibrio cholerae, se adhiere a la mucosa del
intestino delgado, no la invade, y elabora toxinas que producen
diarrea. No hay cambios histolgicos en las clulas de la mucosa y
muy poca inflamacin. Produce diarrea no sanguinolenta en nios y
adultos.

Escherichia coli enteroagregativa (ECEA):

Slo
encontrada
en
humanos.
Son
llamadas
enteroagregativas porque tienen fimbrias con las que
aglutinan clulas en los cultivos de tejidos. Se unen a la
mucosa intestinal causando diarrea acuosa sin fiebre.
No son invasivas. Producen hemolisina y una
enterotoxina similar a la de las enterotoxignicas.

Escherichia coli de adherencia difusa (ECAD)

Se adhiere a la totalidad de la superficie de las clulas

epiteliales y habitualmente causa enfermedad en nios
inmunolgicamente no desarrollados o malnutridos. No
se ha demostrado que pueda causar diarrea en nios
mayores de un ao de edad, ni en adultos y ancianos.

Escherichia coli enteroinvasiva (ECEI):

Invade el epitelio intestinal causando diarrea

sanguinolenta en nios y adultos. Libera el calcio
en
grandes
cantidades
impidiendo
la
solidificacin sea, produciendo artritis y en
algunos casos arterioesclerosis. Es una de las E.
coli que causa ms dao debido a la invasin que
produce en el epitelio intestinal.

ESCHERICHIA COLI ENTEROHEMORRGICA

(EHEC)

No se conoci su importancia clnica

hasta 1982 cuando se le asocio con la
colitis hemorrgica y el sndrome
urmico hemoltico.
E. coli O157:H7 produce toxinas
shiga (verocitotoxinas), algunas cepas
solo producen Stx 1, otras Stx 2, y
otras ambas.
Los genes para estas toxinas son
codificados por bacteriofagos.
Otros
factores
de
virulencia
identificados en E. coli O157:H7
incluyen el plsmido de virulencia de
60 MDa (pO157) y el locus de
borramiento del enterocito (LEE).

Producen verocitotoxinas que actan en el colon. Sus

sntomas son: primero colitis hemorrgica, luego
sndrome urmico hemoltico (lo anterior ms afeccin
del rin, posible entrada en coma y muerte), y por
ltimo, prpura trombocitopnica trombtica (lo de
antes ms afeccin del sistema nervioso central).
Esta cepa no fermenta el sorbitol.
No posee una fimbria formadora de mechones, en vez de
esto posee una fimbria polar larga que usa para
adherencia.
No
se recomienda el uso de antibiticos como
fluoroquinolonas, trimetrotoprima-sulfametoxazol
y
furazolidona, porque producen la induccin de
bacterifagos y pueden aumentar la expresin de toxinas
shiga.

 Infeccin

Manifestaciones clnicas

por E. coli O157:H7 van desde la

portacin asintomtica hasta diarrea no
sanguiolenta, colitis hemorrgica, sndrome
urmico hemoltico y muerte.

El

periodo de incubacin varia de 1 a 8 das con

un intervalo promedio de 3 das antes de la
exposicin y la enfermedad.

El

Deteccin de EHEC

aislamiento de E. coli O157:H7 solo es posible

durante la fase agua de la enfermedad y los m.o
pueden no detectarse 5-7 das despus del inicio.

Los mtodos para la identificacin se basan en:

La deteccin de cepas productoras de toxinas shiga.
Deteccin del serotipo O157:H7.
1.

2.

3.

Siembra en agar MacConkey y sorbitol (SMAC), cefixima-SMAC, SMAC

complementado con cefixima y telurito (CT-SMAC) o medios que
contienen5-bromo-5-cloro-3-indoxil--D-glucoronida o 4-metilumbeliferil-D-glucoronida. El Agar SMAC contiene D-sorbitol al 1% en lugar de lactosa
para diferenciar las cepas de E.coli sorbitol negativas. Luego los
aislamientos sospechosos son confirmados con antisueros con antisueros
O157:H7 especficos. Otros medios de deteccin son medios cromognicos y
mtodos de ELISA.

Separacin inmunomagnetica utilizando esferas

especficos de O157 seguido de cultivo bacteriolgico.

revestidas

con

Ac

Ensayos para la deteccin del serotipo O157:H7 o toxinas shiga

directamente de las heces.

E. albertii
Es una especie recin descrita de enterobacterias indol negativas, Dsorbitol negativas y lactosa negativas aisladas en heces diarreicas de
nios.
E. Albertii se asemeja principalmente a E. coli inactiva, aunque no se
asemeja al grupo Alkalescens-Dispar debido a su capacidad para producir
gas a partir de D- glucosa.

Pruebas bioqumicas
Indol (-)

Citrato (-)

Rojo de metilo
(+)

Voges proskauer (-)

Lisina descarboxilasa (+)

Ornitina descarboxilasas (+)

Arginina dehidrolasa (-)

ONPG (+)

Lactosa (-)

Adonitol (-)

Manitol (+)

Pigmento amarillo (-)

Celobiosa(-)

Sorbitol (-)

E. fergusonii
Se encuentra en sangre, vescula biliar, orina y heces; sin embargo no se
ha establecido aun su importancia clnica.
Se diferencia de E. coli por las pruebas de sorbitol negativa y lactosa
negativa , pero andonitol positiva y celobiosa positiva.

Pruebas bioqumicas
Indol
(+)

Citrato (V)

Rojo de metilo
(+)

Voges proskauer (-)

Lisina descarboxilasa (+)

Ornitina descarboxilasas (+)

Arginina dehidrolasa (-)

ONPG (v)

Lactosa (-)

Manitol (+)
Adonitol (+)

Pigmento amarillo (-)

Celobiosa(+)

Sorbitol (-)

E. hermanii
Se encontr principalmente en heridas, esputo y heces de humanos.
Esta bacteria puede producir una infeccin denominada cefalohematoma.
Las cepas de E. hermanii tienen pigmento amarillo y son indol positivas y
sorbitol negativas. Como E. hermanii son sorbitol negativas, parecen
bioqumicamente similares a E. coli.

Pruebas bioqumicas
Indol
(+)

Rojo de metilo
(+)

Voges proskauer (-)

Manitol (+)

Citrato (-)

Ornitina descarboxilasas (+)

Arginina dehidrolasa (-)

ONPG (+)

Lactosa (V)

Adonitol (-)

Lisina descarboxilasa (-)

Pigmento amarillo (+)

Celobiosa(+)

Sorbitol (-)

E. vulneris
Tiene alta propensin a producir infecciones en las heridas humanas,
sobre todo en los brazos y las piernas que pueden conducir a
osteomielitis.
Mas del 50 % de las cepas tienen pigmento amarillo y son tanto indol
negativas como sorbitol negativas.

Pruebas bioqumicas
Indol (-)

Rojo de metilo
(+)

Voges proskauer (-)

Manitol (+)
Citrato (-)

Ornitina descarboxilasas (-)

Arginina dehidrolasa (V)

ONPG (+)

Lactosa (V)

Adonitol (-)
Lisina descarboxilasa (V)

Pigmento amarillo (V)

Celobiosa(+)

Sorbitol (-)

Gnero: Salmonella

El genero salmonella recibe su

nombre el honor al microbilogo
americano
Salmon
descubri

Daniel

Elmer

(1850-1914),
los

quien

grmenes

designados como salmonellas,

en 1885, aislndolos de cerdos
con clera.

Clasificacin Cientfica
Reino:
Filo:
Clase:
Orden:
Familia:
Genero:

Bacteria
Proteobacteria
Gammaproteobacteria
Enterobacteriales
Enterobacteriaceae
Salmonella

Especies
Salmonella enterica
Subesopecie I. S. enterica subsp. enterica
Subespecie II. S enterica subsp. salamae
Subespecie III. S. enterica subsp. arizonae.
Subespecie IV. S enterica subsp. diarizonae
Subesopecie V. S. enterica subsp. houtenae
Subesopecie VI. S. enterica subsp. Indica

Salmonella

Potencialmente
patgenas

Va Linftica y
Sangunea.

Patgenos del
Aparato
Digestivo

Parsitos
intercelulares
(Macrfagos)

- Fiebre entrica
- Septicemia
- Gastroenteritis

Es de suma importancia aclara que aunque existan solo dos especies de salmonellas
segn su hibridacin de DNA, tanto las especies como las subespecies mencionadas
se encuentran constituidas por mas de 2400 variedades serolgicas.
La estructura antignica de Salmonella sp. Es similar a la de otras enterobacterias,
contando con la presencia de dos clases de antgenos principales:

Antgeno O (somticos): de lipopolisacarido en la pared celular, termoestable y es

la base de la clasificacin en subgrupos.

Antgenos H (flagelares): de la protena flagelina termolbil, es la base de la

clasificacin de especies.

En algunas cepas se encuentra un tercer tipo de Antgeno se superficie, anlogo

funcional a los antgenos K (capsulares) de otros gneros. Al estar este antgeno
relacionado con la virulencia de las cepas se le denomina

Antgeno Vi: (Virulencia): termolbil, responsable de la

especies patognicas.

virulencia de varias

Factores que afectan su crecimiento,

muerte y/o sobrevivencia.

Esta tabla muestra las condiciones ptimas de

temperatura, pH y aw (actividad del agua) que
favorecen el desarrollo de Salmonella.

Caracterizacin Morfolgica y
Bioqumica
Son bacilos Gram- negativos
Con un tamao de 0.7 1.5 x 2.0 - 5m
No fermentadores de lactosa
Anaerobios facultativos
No esporulados
Generalmente mviles por flagelos peritricos con la
excepcin de Salmonella gallinarum y Salmonella
pollorum.
Poseen metabolismo fermentativo y oxidativo

Agares de Seleccin

La diferenciacin de Salmonella de otros microorganismos es usualmente

determinado por los cambios de color del indicador que se detecta por cambio de pH
y que corresponde a la fermentacin de lactosa o sacarosa; asimismo la produccin
de H2S o la descarboxilacin de lisina y de la ornitina.

Agar SS

Agar Mac Conkey

Pruebas Bioqumicas
Fermentacin de Glucosa con produccin de acido y gas (excepto S. typhi)
Oxidasa Negativo
Catalasa Positivo
Indol y Voges Proskauer (VP) Negativo
Rojo de Metilo y Citrato de Simmons Positivo
Producen H2S
Urea Negativo
Lisina, Ornitina y Descarboxilasa positivo
Reduccin de Nitratos a Nitritos
No desaminan la fenilalanina

Fermentacin de Glucosa con produccin de acido y

gas

Citrato de Simmons y Rojo de Metilo Positivo

Oxidasa Negativo

Catalasa

Positivo

Indol y Voges Proskauer Negativo

No desaminan la fenilalanina

Reduccin de Nitratos a Nitritos

Lisina, Ornitina y
Descarboxilasa positivo

Caldo Urea

GENERO: Shigella
Existen 4 subgrupos mayores y 43 serotipos.

Shigella

S.
Dysenteriae
(gurpo a)

S. Flexneri
(grupo b)

Similitudes
bioquimicas

S. Boydii
(grupo c)

S.sonnei

GENERO: Shigella
Las

especies de shigella pueden sospecharse en cultivos (no

fermentadores de lactosa y bioqumicamente inertes).
No

producen gas a partir de hidratos de carbono (excepcin de

S. flexneri que son aerogenos).

MORFOLOGIA EN MEDIOS.
MEDIO

INTERACCIONES

Salmonella-Shigella (SS)

Muestra inhibicion variable y

colonias incoloras sin
ennegrecimiento.

Agar enterico de Hektoen (HE)

Aparece mas verde que Salmonella y

el color se borra hacia la periferia de
la colonia

Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD) No utilizan ninguno de los hidratos

de carbono y producen colonias
traslucidas.
Agar de MacConkey

Producen colnias incoloras y

transparentes.

Agar eosina azul de metileno (EMB)

Producen colonias transparentes.

PERFIL BIOQUMICO
ALC/A (M.O fermenta glucosa y no
lactosa)
NO PRESENCIA DE GAS.
SULFURO DE HIDROGENO (H2S)
NEGATIVO.
(No reacciona con citrato de hierro ni
amonio)

AGAR
KLIGER

RM POSITIVO.
(fermenta glucosa, por
la va mixta. Con
produccin
de
metabolitos).

MEDIO RM.

VP NEGATIVO.
Es la busqueda de diacetil
= producto final del acetilmetil-carbinol

MEDIO VP.

INDOL POSITIVO
/NEGATIVO.
Presencia de triptofanasa
(+/-)

MEDIO
SIM.

CITRATO
NEGATIVO.
(no utiliza sales
amonio como
fuente de nitrgeno)

AGAR CITRATO DE
SIMONS.

FENIL ALANINA
NEGATIVO.
(capacidad de la bacteria
para desaminar
aminocido
fenilalamina)

CALDO FENIL ALANINAMALONATO .

UREASA NEGATIVA

(no poseen enzima

ureasa)

CALDO UREA

MOTILIDAD:
POSITIVA/
NEGATIVA

MEDIO SIM

LISINA
NEGATIVA
(lisina no se
descarboxila)

MEDIO LIA

Tribu: Klebsiella
comprende cuatro gneros (Klebsiella, Enterobacter, Hafnia y Serratia).

Genero : Klebsiella

Recibi ese nombre en honor a Edwin Klebs, microbilogo alemn de

fines del siglo XIX.

Klebsiella esta compuesta por especies que forman tres grupos

fileticos:

Las especies de Klebsiella y Raoultella estn ampliamente distribuidas

en la naturaleza y en el tubo digestivo.

Cuando se recuperan colonias

grandes con una consistencia
mucoide en las placas de
aislamiento se debe de
sospechar que es una especie
de Klebsiella.
En agar
MacConkey, las
colonias
se presentan
grandes, mucoides y rojas, y
el pigmento rojo suele
difundirse en el agar lo que
indica
fermentacin
de
lactosa.

Las especies de aislamiento clnico frecuente son

Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae y
K. oxytoca.

Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae

Gram negativo
Anaerobio facultativo
Encapsulado
Inmvil
Fermentacin de lactosa
Se encuentra en la flora
normal de la boca, la piel y los
intestinos.

Puede causar la
neumona
enfermedad que causa cambios
destructivos a la inflamacin y la
hemorragia pulmonar humano con
la muerte celular (necrosis) que a
veces produce, esputo con sangre,
mucosa (esputo jalea de grosella).
In
in fec
qu fecc cion
ir io es
r ne d
gi s
ca de e te
.
he jido
rid s
a bla
l
e
nd
sd o
e
os
n
io nari
c
,e
c
Infe to uri
c
tra

Al

igual

que

con

muchas

bacterias,

el

tratamiento

recomendado ha cambiado ya que el organismo ha

desarrollado resistencias. A menudo son resistentes a
mltiples antibiticos. La evidencia actual implica un plsmido
como la fuente de los genes de resistencia.

Resistente a ampicilina, carbenicilina y ticarcilina.

Debido ala produccin de enzimas beta-lactamasas

hacen

que sean resistentes a los agentes beta-lactamicos, incluidas

las cefalosporinas de tercera generacin.

Sensible a amoxicilina-clavulnico y fluorquinolona

PRUEBAS BIOQUIMICAS EN Klebsiella pneumoniae

Indol (-)

Lisina (+)

Voges-Proskauer (+)

Ureasa (+)

Arginina (-)

Ornitina (-)

fermenta: lactosa

sacarosa, sorbitol

adonitol y arabinosa.

Citrato (+)

Klebsiella Oxytoca
Klebsiella oxytoca es una especie
Gram-negativa,
estrechamente
relacionadas con K. pneumoniae de
la que se distingue por ser indol
positiva.
Casi el 50% de aislamiento ha sido
en heces y la siguiente fuente en
frecuencia es la sangre.

PRUEBAS BIOQUIMICAS
Indol: (+)
RM: (V)
VP : (+)
Ureasa: (+)
Lisina: (+)
Ornitina: (-)
Malonato: (+)
Motilidad: (-)

Diferenciacin de especies en los gneros Klebsiella y Raoultella