COMPLEJO HOSPITAL, DR. LUIS RAZETTI.

UNIDAD INGENIERO KLEBER RAMIREZ ROJAS

Modelos de Sistemas Tumorales. Sistema de

tumores slidos trasplantables en animales
de experimentacin. Medidas de Crecimiento
Tumoral. Ensayos TD50. Otros modelos de
sistema tumoral

Modelos del Sistema Tumoral:

Una amplia gama de tumores de diferentes tipos histolgicos se puede cultivar en animales de
laboratorio y se propaga por el trasplante. Sistemas tumorales trasplantadas pueden ser
altamente cuantitativo, pero en general mientras ms cuantitativo sea el sistema, ms artificial es,
porque los tumores son altamente indiferenciado y encapsulado.

1. Sistemas de tumores slidos trasplantables en animales de

experimentacin:
Una amplia gama de tumores experimentales de diversos tipos histolgicos han sido desarrollados
para estudios radiobiolgico, para producir un gran nmero de tumores prcticamente idnticos, la
propagacin por el trasplante de una generacin de los animales a la siguiente se utiliza, lo que
hace obligatorio que los animales sean islogos .

MEDIDAS DE CRECIEMIENTO TUMORAL:

a)
b)
c)
d)
e)

Mediciones de crecimiento del tumor.

Curacin del tumor ( TCD50 ) de ensayo .
La supervivencia de clulas tumorales in vitro determin por la tcnica de ensayo de dilucin.
La supervivencia de clulas tumorales por los ensayos de colonias de pulmn.
La supervivencia celular tumoral usando en el tratamiento vivo seguido de ensayo in vitro.

( TCD50 ) ENSAYO
En los experimentos de este tipo, un gran nmero de animales con tumores de tamao uniforme se
dividen en grupos separados , y los tumores se irradian a nivel local con dosis graduadas . Los
tumores posteriormente se observan regularmente para la recurrencia o el control local.
La proporcin de tumores que son controlados localmente se puede trazar como una funcin de la
dosis , y datos de este tipo son susceptibles de un anlisis estadstico sofisticado para determinar
TCD50 , la dosis a la que 50 % de los tumores son controlados localmente. Esta cantidad es
altamente repetible de un experimento a otro en una cepa endogmica de los animales.

La tcnica de ensayo de dilucin:

Fue ideado por Hewitt y Wilson , que lo utiliz para producir la primera in vivo,
la curva de supervivencia en 1959.

PULMN COLONIA DEL ENSAYO

Hill y Bush han ideado una
tcnica

para

ensayar

la

clonogenicidad de las clulas de

un tumor slido irradiado in situ
mediante

la

inyeccin

en

animales receptores y contando

el

nmero

pulmonares

de

colonias

producidas.

Los

principios generales del mtodo

se ilustran en la Figura 20.6 . El
tumor usado en estos estudios
fue el sarcoma KHT , que es un
tumor trasplantable que surgi
originalmente en un ratn C3H ,
y que se ha propagado en serie
a

travs

generaciones.

de

muchas

Las curvas de dosis -respuesta

El sistema de ensayo de colonias de pulmn

Un nmero limitado de lneas

EN VIVO / ensayo in vitro

celulares han sido adaptados para

que crezcan ya sea como un tumor
trasplantable en un animal o como
clones en una placa de Petri . Estas
clulas se pueden transferir
fcilmente a partir de in vivo a in vitro
y la espalda. En una generacin que
pueden crecer como un tumor slido
en un animal, y en la siguiente como
una monocapa en una placa de Petri
. Los tres sistemas ms comnmente
utilizados son un rabdomiosarcoma
en la rata ( Hermens y Barendsen ) ,
un fibrosarcoma en el ratn ( McNally
), y el tumor mamario EMT6 ,
tambin en el ratn ( Rockwell y
Kallman ) .

Xenoinjertos de tumores humanos:

Es un trasplante de una especie a otra. En el campo del cncer, esto por lo
general se refiere a un crecimiento de tumores humanos trasplantados en un
animal de laboratorio. Si el animal receptor cuenta con un sistema inmune
normal, un xenoinjerto no debe crecer, pero hay dos formas principales en
que se ha logrado el crecimiento:
1. Las cepas de origen animal han sido desarrollados que son congnitamente
inmunolgico deficiente.
2. Es posible severamente ratones inmune-suprimir por el uso de radiacin o
drogas o una combinacin de ambos, para el punto en el que se aceptan los
injertos tumorales humanas.

Los cinco ensayos de uso comn:

Son
tumorales
medidas del
retardo de
crecimiento.

La
produccin
de colonias
pulmonares

curacin
tumor
(TCD50)
de
ensayo.

La
supervivencia
celular tumoral
determinadas
por la tcnica
de ensayo de
dilucin.

Y en el
tratamiento
vivo seguido
de ensayo in
vitro.

Caractersticas

Ventajas

Conservan cariotipos humanos a travs de pasos en serie

1.

Hay una tendencia a que el tumor a ser rechazado,

por lo que la observacin de control del tumor como
un punto final puede ser engaosa. Retraso en el
crecimiento y la supervivencia celular estudios, por
otro lado, son probablemente menos afectada.

Mantienen algunas de las caractersticas de respuesta de los

tumores humanos de origen individual

2.

Las clulas tumorales humanas hacen sufrir cambios

cinticos y seleccin de clulas si se trasplantan en
ratones.

Tienen grandes ventajas sobre tumores de ratn

3.

Aunque las caractersticas histolgicas de los

tumores de origen humano son generalmente bien
mantenidos por xenoinjertos, el tejido estromal es de
origen ratn.

Las clulas tumorales humanas hacen sufrir cambios cinticos

y seleccin de clulas si se trasplantan en ratones
Hay una tendencia a que el tumor pueda ser rechazado
Retraso en el crecimiento y la supervivencia celular estudios
Son probablemente menos afectada

Fraccin de clulas hipxicas en xenoinjertos es mucho el mismo

que en tumores de ratn

El sistema de esferoide
Los esferoides se irradian intacto y
entonces

se

individuales

separan
mediante

en
el

clulas
uso

de

tripsina y agitacin suave antes de ser

sembradas en placas de Petri a
ensayar para la integridad reproductiva
de las clulas individuales; Esferoides
maduros consisten en tres poblaciones
de

clulas

con

diferentes

radiosensibilidad. Comenzando desde

el exterior y trabajando hacia el centro

Esferoides de clulas tumorales Humanos

Muchos tipos de clulas tumorales humanas pueden ser cultivadas como esferoides, con un
amplio espectro de las apariencias morfolgicas y tasas de crecimiento. En general, las clulas
de especmenes quirrgicos desglosados forman esferoides si se cultivan en suspensin lquida
por encima de una superficie no adherente, que puede ser una capa delgada de agar o gel de
agarosa o de la parte inferior de una placa de cultivo no preparado para el cultivo celular.

corte transversal esferoide

COMPARACIN DE LOS DIFERENTES SISTEMAS DE TUMOR MODELO

La curacin del tumor ( TCD50 ) y los sistemas de retardo de crecimiento cuota la ventaja adicional
de que se dejan in situ inalteradas despus del tratamiento.
En las otras tcnicas, el tumor debe ser removido, picada, y se prepar en una suspensin de una
sola clula por el uso de una enzima, tal como tripsina, antes de que se evalu la supervivencia.
El procedimiento de romper el tumor y disolviendo parcialmente la membrana celular con una
enzima digestiva pueden influir en los resultados.
La determinacin de TCD50 es quizs ideal para producir los datos pertinentes a la radioterapia
clnica.
La tcnica de ensayo de dilucin permite la supervivencia celular clonognico a ser evaluada sobre
una gran gama de dosis y para los tumores que no pueden ser cultivadas en cultivo.
Sin lugar a dudas, la tcnica ms rpida y eficiente es el vivo / tcnica in vitro, que combina el
realismo de la irradiacin in vivo con la velocidad y la eficiencia de la siembra in vitro para evaluar la
supervivencia clonognica.
Xenoinjertos de tumores humanos hasta ahora se han utilizado en una escala mucho ms limitada.
Esferoides representan un modelo intermedio ms importante entre monocapas de clulas en
cultivo
y tumores in vivo.
Esferoides celulares humanas slo se han utilizado en una escala limitada, pero est claro que las
clulas conservan muchas de las caractersticas del tumor a partir de los cuales se tomaron.

La apoptosis en Tumores
La muerte celular programada o apoptosis, tambin se produce en ambos tejidos normales y
tumores, de forma espontnea y como resultado de la irradiacin.
Generalmente se piensa que las clulas irradiadas mueren en el intento siguiente o una mitosis
posterior, esta no es la nica forma de muerte celular.
La susceptibilidad a la induccin de la apoptosis tambin puede ser un factor importante que
determina la radiosensibilidad, porque la muerte celular programada que parece ser un efecto
temprano prominente en tumores radiosensibles de ratn y esencialmente ausente en los tumores
radiorresistentes.
La apoptosis tambin est involucrado en la muerte celular por una amplia gama de frmacos
citotxicos usados en la terapia del cncer.