Desenhos

Experimentais Usando
Modelos Animais
Ana Clara Nogueira Brathwaite

Modelo Animal
Modelo animal de doena modelos em animais
de doenas na espcie humana
Doena animal: os mecanismos patolgicos so
similares queles de uma doena humana
Modelo: objeto de imitao
Modelo = Amostragem

Pressupostos:
que permita o estudo dos fenmenos biolgicos ou de
comportamento do animal;
que um processo patolgico espontneo ou induzido
possa ser investigado;
que o fenmeno, em um ou mais aspectos, seja
semelhante ao fenmeno em seres humanos.

Quando usar?
Limitaes com modelo humano:
tica
Resguardar a integridade fsica e psicoemocional dos

investigados
Aspectos da doena e modo de investigao

Amostra suficiente
Tratamento padro e placebo
Baixa incidncia e/ou baixa prevalncia
Agressividade da doena ou virulncia do agente
etiolgico
Coleta do material

Tipos de Modelo Animal

Modelo espontneo
Existe na natureza com similaridade com a condio
ou patologia humana

Modelo experimental
Precisa ser criado para atender as condies para
ser testado

Modelo geneticamente modificado

Criados atravs de insero de DNA estranho em
seu cdigo gentico

Modelo rfo
Descreve a condio que ocorre em modelos nohumanos naturalmente, e adotada para uma
condio humana

Modelo negativo
O qual a patologia ou condio no se estabelece

Animais mais Usados

Fonte: FAGUNDES; TAHA, 2004.

Camundongos
Humanizados
Camundongos com enxerto de clulas e tecidos
humanos
Estudo de infeces exclusivamente humanas
Possibilita a avaliao eficiente e custo - eficaz da
doena, as respostas teraputicas in vivo e o
desenvolvimento de novas vacinas , tudo sem
colocar indivduos em risco.
Ex.: estudo do HIV-1

Sistema Imunolgico Enxertado em Camundongos

Deficincia de linfcitos T
Imunizados
eB
3 principais modelos descritos:
1. Hu-SRC-SCID
2. Hu-SRC-SCID
3. BLT

1. Hu-PBL-SCID
Abordagem mais simples
Testar a atividade das clulas T efetoras
Injeo de linfcitos de sangue perifrico humano
(PBL) em camundongos imunodeficientes adultos
Injetados intraperitonealmente ou intravenosamente

Populao primria no enxerto clulas T

Adquirem atividade em uma semana
Algumas clulas B, clulas mielides e outras clulas
do SI so detectadas

2. Hu-SRC-SCID
Injeo de clulas CD34+ de clulas-tronco hematopoiticas
Repovoamento do sistema hematopoitico em camundongos
imunodeficientes

Usado no estudo do HIV e Vrus Epsten-Barr

3. BLT
Enxerto cirrgico de tecido heptico fetal e tecido
tmico
Acompanhado de injeo de CD34+ de clulastronco hematopoitica

Mais robusto sistema imunolgico enxertado

Modelo de escolha

Usado no estudo da infeco oral, vaginal ou retal

pelo HIV

Camundongo Imunodeficiente null

IL2rg
Mutaes especficas na cadeia gama do receptor
IL2
Bloqueia a alta afinidade com as interleucinas IL2,
IL4, IL7, IL9 e IL21 Inativa a imunidade
Permite um camundongo humanizado com sistema
imunolgico humano completo, pelo enxerto de
clulas-tronco hematopoiticas

Importante para:

Medicina regenerativa
Imunidade
Hematopoese
Cncer
Doenas infeciosas

Doenas Infecciosas
Uso de camundongos humanizados no estudo de
agentes infecciosos:

Salmonella typhi
HIV
Citomegalovirus
Epsten-barr
Hepatites
Dengue
Neisseria gonorrhoeae e meningitides
Sarampo
Plamodium falciparum

Desenho Experimental
Passos importantes

Nmero adequado de animais

Estudo piloto
Randomizao
Duplo-cego
Grupo controle

Nmero Adequado de
Animais
Para calcular o nmero de animais:
Efeito do estudo
Diferena significativa (variveis quantitativas) ou de
propores (variveis qualitativas) que o experimento
capaz de detectar, entre dois grupos

Desvio padro
Raiz quadrada do quadrado mdio do erro de uma anlise de
varincia conduzida em uma experincia anterior.
Quando nenhum estudo anterior foi feito um estudo piloto
pode ser usado

Nvel de Significncia
Chance de se obter um falso-positivo.
Geralmente = 5% p< 0,05

Poder da prova
Chance do estudo detectar o tamanho do efeito especificado
para o nvel de significncia determinado e desvio padro, e
ser considerado estatisticamente significativo.
Varia de 80% a 95%

Estudos-piloto
Testar a logstica de um experimento
Assegura o bom funcionamento do experimento
Definir o nmero adequado de animais para o
experimento

Randomizao
Atribuio de animais para diferentes grupos ao acaso
Evita vieses
Garante que os grupos tem a mesma probabilidade de
receber tratamento
Controla as variveis

Duplo-cego
Mtodo de ensaio clnico onde nem o examinado
(objeto de estudo) nem o examinador sabem o que
est sendo utilizado como varivel em um dado
momento
Evitar vieses
Diminuir a subjetividade na coleta de dados

Grupo Controle
Positivo

Onde se espera os efeitos ou as alteraes

Negativo
Onde no se espera alteraes

Simulados
Imitar um procedimento ou tratamento

Comparao
Tipo de controle positivo
Comparar um tratamento conhecido com um novo a ser
investigado

Survey of the Quality of Experimental

Design,
Statistical Analysis and Reporting of
Research
Using Animals
271 publicaes revisadas:
Nmero adequado de animais
4% no relatou o numero de animais usados
Apenas 59% das publicaes relataram o objetivo
do estudo, 3 caractersticas do animais e o
nmero de animais usado
48 publicaes sem publicar como o tamanho da
amostra foi selecionado
Poder da prova determinar o nmero apropriado
de animais
Previne o uso de animais desnecessrios

Survey of the Quality of Experimental

Design,
Statistical Analysis and Reporting of
Research
Using
Animals
Randomizao
12% usaram randomizao para locao dos
animais
Uso da randomizao:
Diminui vieses
Aumenta da validade dos achados
Diminui o uso de grande quantidade de animais

Duplo-cego
14% usaram duplo-cego na anlise qualitativa
Diminui vieses
Aumenta o rigor do experimento
Aumenta a validade dos resultados

Concluso
Muitas publicaes com uso de animais falha ao
expor os passos importantes para um desenho
experimental adequado
H necessidade da incluso de todos os dados
relevantes ao estudo, para que outros
pesquisadores possam avaliar, analisar e repetir o
experimento publicado
O auxlio do NC3Rs para publicao adequada de
experimentos com uso de animais, atravs de um
conjunto de diretrizes

Referncias
Aguilar-nascimento, J.E. De, 2005. Fundamental steps in experimental
design for animal studies 1 Passos fundamentais em desenhos
experimentais de estudos envolvendo animais. Sciences-New York.
Brehm, M. a. et al., 2014. Generation of improved humanized mouse
models for human infectious diseases. Journal of Immunological Methods,
410, pp.317. Available at: http://dx.doi.org/10.1016/j.jim.2014.02.011.
Fagundes, D.J. & Taha, M.O., 2004. Modelo animal de doena: critrios de
escolha e espcies de animais de uso corrente. Acta Cirurgica Brasileira,
19(1), pp.5965.
Festing, M.F.W. & Altman, D.G., 2002. Guidelines for the design and
statistical analysis of experiments using laboratory animals. ILAR journal /
National Research Council, Institute of Laboratory Animal Resources, 43,
pp.244258.
Kilkenny, C. et al., 2009. Survey of the Quality of Experimental Design,
Statistical Analysis and Reporting of Research Using Animals. PLoS ONE,
4(11).