componentes a separar en la columna, al eluir la mezcla de un extremo a otro, se observa que las bandas del soluto se van ensanchando al mismo tiempo que se separan ya que tienden a distribuirse uniformemente en todo el volumen disponible.
En el proceso de difusin, la concentracin
final de las molculas adoptar un perfil de distribucin normal, y el registro de las concentraciones de la banda en funcin del volumen eludo o del tiempo, dar lugar a una forma gaussiana de anchura definida por la desviacin estndar de la dispersin.
Ensanchamiento de la banda
Factores del ensanchamiento a lo largo de
la columna: Difusin molecular Irregularidades en el relleno Resistencia a la transferencia de materia en la fase mvil Resistencia a la transferencia de materia en la fase estacionaria
Asimetra de pico
En la prctica, los picos raramente son
gaussianos, y la realizacin de clculos sobre el cromatograma en base a esta suposicin, puede llevar a errores significativos.
El modelo de Gauss slo es apropiado
cuando se trabaja con picos cuya asimetra es ligera.
Factor de asimetra
Donde:
Para los picos gaussianos, el factor de
asimetra es igual a 1
Si los picos presentan cola, se asigna a As
valor positivo (coleada)
Si los picos presentan distorsin frontal, se
asigna a As valor negativo (cabeceada)
Aunque todos los picos son ligeramente
asimtricos, deben ser evitados: Errores en la cuantificacin Prdida de resolucin que se origina
Un pico con As= 1,1 ocasiona una prdida de
eficacia de un 10%
Causas
Tanto instrumentales como cromatogrficos:
Resolucin incompleta de 2 bandas Presencia de puntos de gran actividad en las fases estacionarias Reacciones qumicas del compuesto en la columna Volmenes muertos en el sistema cromatrogrfico Tcnicas de inyeccin incorrectas Entre otros
Inyeccin
Deformacin de la banda por 2 motivos:
Inyeccin de una masa excesiva de muestra, sobrecarga la columna; prdida de capacidad de separacin. Inyeccin de un volumen excesivo; prdida de eficacia del sistema
Calidad del sistema de
inyeccin
Se expresa en funcin de un parmetro K:
Donde Vo es el volumen inyectado y
la desviacin tpica de la banda ocasionada por la inyeccin
Podemos deducir que la inyeccin ser
tanto mejor cuanto mayor sea el parmetro instrumental K y cuanto menor sea el volumen inyectado