CROMATOGRAFA

Profesora: Delia whu

CROMATOGRAFIA
La cromatografa es un grupo de mtodos
que permiten separar, aislar, e identificar
mezclas moleculares que dependen de las
afinidades diferenciales de los solutos
entre dos fases inmiscibles.
Estan constituidos por dos fases:
- Fase estacionaria
- Fase mvil

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CLASIFICACIN:
1.- De acuerdo a la fase estacionaria
- Cromatografa en columna: Fase estacionaria compuesto
por un slido finamente dividido sostenido en un
estrecho tubo de vidrio metal.
Fase mvil lquido gas que pasa por percolacin baja
presin.
- Cromatografa plana: Fase estacionaria puede ser un
papel poroso un slido finamente dividido que se
aplica sobre una placa de vidrio.
Fase mvil es un lquido mezcla que se desplaza a
travs del slido por capilaridad.

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2. De acuerdo a la naturaleza de las fases
estacionaria y mvil.
- Si la fase estacionaria es un slido se le
denomina cromatografa de adsorcin.
- Si la fase estacionaria es un lquido se le
denomina cromatografa de particin.

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Cromatografa de adsorcin:La retencin de
los componentes y su separacin
dependen de la capacidad de los tomos
que estn en la superficie para extraer los
solutos de la fase mvil y adsorberlos
temporalmente a travs de las fuerzas de
London y de Van Der Walls, interacciones
dipolo y dipolo inducido con grupos
polares de la superficie activa.

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Entre los adsorbentes ms usados son el
gel de slice y la almina, poseen
superficies que tienen grupos OH y
tomos de oxgeno e interaccionan
fuertemente con los solutos polares.

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Adsorbentes usados en cromatografa
Sacarosa
El ms dbil
Almidn
Inulina
Talco
Carbonato de calcio
Fosfato de calcio
Magnesia
Gel de slice
Silicato de magnesio
Almina
Carbn
El ms fuerte

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Los solventes usados en la separacin
deben ser elegidos de acuerdo a las
propiedades de los solutos y a las
propiedades de la fase estacionaria.

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SOLVENTES

VALOR ELUTROPICO CONSTANTE

PARAMETRO DE
E
DIELECTRICA SOLUBILIDAD
____________________________________________________________________________
Heptano
0.00
1.92
7.4
Hexano
0.01
1.88
7.3
Isoctano
0.01
1.94
7.0
Ciclohexano
0.04
2.02
8.2
Tetracloruro carbono
0.18
2.24
8.6
Tolueno
0.29
2.38
8.9
Benceno
0.32
2.27
9.2
Eter etlico
0.38
4.33
7.4
Cloroformo
0.40
4.81
9.1
Cloruro de metino
0.42
8.93
9.6
Tetrahidrofurano
0.45
7.58
9.1
Acetona
0.56
20.70
9.4
Dioxano
0.56
2.25
9.8
Acetato de etilo
0.58
6.02
8.6
Acetonitrilo
0.65
37.50
11.8
Piridina
0.71
12.30
10.4
1-propanolol
0.82
20.33
10.2
Etanol
0.88
24.30
11.2
Metanol
0.95
32.70
12.9
Ac.actico
largo
6.15
12.4
Agua
largo
78.54
21.0
______________________________________________________________________________
CARACTERSTICA DE LOS SOLVENTES USADOS EN CROMATOGRAFA

CROMATOGRAFA
Cromatografa de particin: Se produce la
retencin y separacin debido a la solubilidad
relativa de los componentes en los dos lquidos
determinados por su coeficientes de particin
que es una constante y depende de la
temperatura.
En sta cromatografa la fase estacionaria ha
sido reemplazada por fases enlazadas unidas
como el octadecilsililo (ODS) para formar una
fase estable y no polar.

CROMATOGRAFA
La ventaja de stas fases enlazadas
pueden ser hechas de modo reproducible
y la superficie no vara durante la
cromatografa. Algunas fases enlazadas
contienen grupos aminos, cianos
hidroxilos que son de naturaleza polar.
La cromatografa de particin puede ser:
-Fase normal
-Fase inversa reversa

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Fase normal:
La fase estacionaria es polar(polietilenglicol)
y la fase mvil es no polar (hexano). Los
compuestos polares se retardan y los no
polares eluyen ms rapidamente.

CROMATOGRAFIA
FASE NORMAL

CROMATOGRAFA
-Fase reversa:
La fase estacionaria es no polar (ODS) y la fase
mvil es polar (agua, metanol, acetonitrilo).
Los compuestos no polares se retienen ms
fuertemente que los polares, stos eluyen
primero.
Las fases enlazadas son las ms usadas en la
cromatografa de fase invertida.

CROMATOGRAFIA
EN FASE RESERVA

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3.-Cromatografa de intercambio inico:
Es un mtodo muy selectivo, los
compuestos inicos se suelen separar y
analizar por ste mtodo, en la que
utilizan resinas cambiadoras de iones
como fase estacionaria.
Son tiles para cationes inorgnicos,
aminocidos.

CROMATOGRAFA
Fase estacionaria:
-Intercambiadores aninicos
-Intercambiadores catinicos
Los rellenos usados estn constituidos por
polmeros de alto peso molecular que
contienen grupos inicos covalentemente
enlazados.

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Los intercambiadores catinicos contienen
grupos de c. Sulfnicos (cambiadores de
cationes fuertes) ac. Carboxlicos
(cambiadores catinicos dbiles).
Los intercambiadores aninicos contienen
grupos amonio cuaternario unidos al
tomo de silicio a travs de grupos
intermedios.

CROMATOGRAFA
Fase mvil:
Tres variables afectan en la retencin de un
soluto inico en una columna de
intercambio inico que son:
-La fuerza inica
-El pH
-Presencia de modificadores orgnicos

CROMATOGRAFA
Mecanismo de interaccin en CII: Ejm.
Purificacin del agua
- Res SO3H + Na
Res SO3Na + H
- Res N(CH3)3OH + Cl Res-N(CH3)3Cl
+ OH
La cromatografa de II pueden desarrollarse
mediante el desplazamiento por
mtodos de elucin.

CROMATOGRAFIA
DE
INTERCAMBIO
IONICO

CROMATOGRAFA
4.-Cromatografa por exclusin de tamao:
Los componentes de la muestra se separan
de acuerdo al tamao de sus molculas.
La fase estacionaria usada son polmeros
que han sido entrecruzados para dar una
red abierta con numerosos poros de
tamao uniforme.

CROMATOGRAFA
Tipos:
-Geles blandos: Son de hidrato de carbono
entrecruzados como el dextrano
(sephadex), agarosa poliacrilamida.
-Geles rgidos: Son poliestirenos
entrecruzados, dextrano alquilado.
Usos: Separacin de polmeros orgnicos.

CROMATOGRAFA
DE FILTRACION
EN GEL

CROMATOGRAFA
5.-Cromatografa plana
-Cromatografa en capa fina: La fase
estacionaria es gel de slice (ccf) gel de
slice modificada (ODS), alumina,
poliamida, celulosa.
Fase mvil: Depende de la naturaleza de
los solutos y de la fase estacionaria.

CROMATOGRAFA
-Cromatografa en papel:
Fase estacionaria es un papel de filtro de
celulosa altamente hidroxilado.
Fase mvil se usan mezclas de alcoholes
(butilico,isopropilico) y agua con amoniaco
ac. actico para controlar la carga de los
solutos y reducir la aparicin de colas.

CROMATOGRAFA
Definiciones:
Tiempo de retencin : tr
Tiempo muerto : tm
Tiempo de retencin ajustado:
tr = tr tm
Anchura de la base de las seales = Wb
Nmero de platos tericos = N
N = 16 (tr / Wb)2

CROMATOGRAFA
Altura equivalente a un plato terico: AEPT
AEPT = L / N
Coeficiente de distribucin reparto: K
K = cant.muestra x ml fase / cant.muestra
x ml de fase mvil.
Relacin de capacidad: k
k = tr / tm

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Resolucin = R
R = 2(tr2 tr1) / Wa + Wb
Selectividad = alfa
alfa = tr2 / tr1