VARIANTES DE PCR

- PCR Standard
- PCR Anidada (Nested)
- PCR Mltiple (Multiplex)
- PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR)
- PCR en tiempo real (PCR cuantitativa) Q-RT-PCR
- PCR in situ
- PCR especifica de alelo
- PCR asimtrica
- PCR inversa
- PCR hot-start
- PCR tail
- PCR touchdown
- PCR de rango largo
- PCR de fidelidad alta
- PCR de metilacin especifica

PCR Estndar
Tres Fases:
Desnaturalizacin
Alineamiento
Extensin
Componentes:
Hembra Templado
Cebadores
Nucletidos
ADN polimerasa
Iones de Magnesio
Tampn de la reaccin

PCR Anidada (Nested)

Dos rondas de reaccin:
1ra amplifica un segmento mas largo
2da amplifica un segmento mas corto (mas especifico)
Trabaja con dos pares de cebadores

PCR Mltiple (Multiplex)

Simultneamente amplifica 2 o mas secuencias diferentes
Usa al menos dos pares de cebadores distintos

PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR)

A partir de muestra de ARN, con proceso de transcripcin
inversa (Transcriptasa Reversa)
Se crea una cADN y esta es que se amplifica con PCR

PCR en tiempo real (PCR cuantitativa) Q-RT-PCR

Se conoce cantidad de producto despus de cada ciclo
Por lo tanto se puede determinar cuanto contena muestra inicial
Usan pruebas como TacMan, SYBR Green, Beacons o
sondas de hibridizacin

PCR in situ
- Puede darse dentro de clula o en soporte mecnico
- Combina PCR con la hibridizacin en sitio
- Muy til para evaluar progreso de enfermedades
- Preparacin de muestra de clula o tejido (fijacin) es paso
muy critico dentro del proceso

PCR especifica de alelo

- Como tcnica de diagnostico o clonacin
- Enfocada en variaciones en un solo alelo (de dos o mas muestras)

PCR asimtrica
- Diseada para amplificar preferiblemente una cadena de ADN
en lugar de otra

PCR inversa
- Cebadores en lugar de convergir divergen desde sus inicios
- Uso cuando se conoce solo parte de secuencia

PCR hot-start
- Accin de ADN polimerasa esta inhibida en temperaturas
de ambiente por anticuerpos o qumicamente para disminuir
reacciones no especificas

PCR tail
- Se denomina cuando se intenta aislar una secuencia desconocida
cual continua despus de una secuencia conocida
- Variante de asimtrica pero basada en temperatura

PCR touchdown
- Variante usada cuando se desconoces secuencias exactas
de extremos por amplificar, alguna base dudosa en el cebador
- Gradualmente se baja temperatura durante hibridacin

PCR de rango largo

- Se denomina mtodo cuando se trabaja con mas de 4kb
- Son kit especiales optimizados para fragmentos grandes

PCR de fidelidad alta

- Basada en enzimas diferentes del ADN polimerasa, las
cuales proveen actividad de remocin de bases incorporadas
incorrectamente

PCR de metilacin especifica

- Para identificar patrones de metilacin en islas CG
- Muestra tratada y no tratada, dos pares de cebadores

OTROS TIPOS DE PCR

- PCR Digital
- Secuenciacin (PCR modificada)
- RAPD (Random Amplification of Polimorfic DNA)
Uso de varios cebadores para amplificar varios segmentos
de ADN (se obtiene patrn nico caracterstico)
- RACE (Rapid amplification of cDNA ends)
- PCR especifica de intersecuencia (ISSR)
Uso en huellas genticas
- PCR de extensin solapada (Mutagenesis)
- PCR de ensamblaje
- LAMP PCR (Loop mediated isotermal amplificacin)
- PCR con otras enzimas (ej. helicasa)
-

APLICACIONES DE PCR
- Diagnstico
- Gentica Forense
- Epidemiologa
- Gentica de Clonacin
- Paternidad
- Biotecnologa