Qu es una Enzima

Las enzimas son catalizadores de

origen biolgico (proteico), producidas
por organismos vivos, que parecen
cumplir muchos de los requisitos
necesarios para impulsar esta nueva
industria qumica.

Ventajas
Los procesos catalizados por enzimas en la industria son
cada da ms numerosos, ya que presentan una serie de
ventajas frente a los catalizadores convencionales no
biolgicos.

Presentan una gran actividad

cataltica;
Muestran una gran
especificidad de sustrato
Son muy activos a temperatura
ambiente y presin atmosfrica

Inconvenientes
La mayora de las enzimas no son
estables en las condiciones de
trabajo.
Al
ser
solubles
en
agua,
su
separacin
de
los
sustratos
y
productos es difcil.
No se pueden reutilizar.

SOLUCIN

INMOVILIZACIN
DE
ENZIMAS

Qu es la
inmovilizacin?
Es un confinamiento de un biocatalizador
(enzima o clula) en una determinada regin
del espacio, de manera que su actividad
cataltica se retenga y pueda ser reutilizada

Mtodos
Retencin

Fsica

Retencin fsica

Atrapamiento

Consiste en la retencin fsica de la

enzima en las cavidades interiores
de una matriz slida porosa.
El atrapamiento, de gran sencillez
desde el punto de vista
experimental, requiere poca
cantidad de enzima para obtener
derivados activos.
La enzima no sufre ninguna
alteracin en su estructura.
Requiere control riguroso de
condiciones de polimerizacin y
comprobacin de que la naturaleza
qumica del proceso no altere los
grupos reactivos de la protena

Inclusin en
membranas

Microencapsulacin

Las enzimas estn rodeadas de membranas

semipermeables que permiten el paso de
molculas de sustrato y producto, pero no de
enzima
Reactores

de membrana

Emplean membranas permeables al producto

final, permeables o no al sustrato inicial y
obviamente impermeables a la enzima.
Mediante una bomba se establece un flujo
lquido de sustrato que atraviesa el reactor

Unin Qumica

Unin a soporte

Orgnicos

Tipos de soportes
Inorgnicos

Reticulado

Reticulado propiamente dicho

El mtodo del reticulado consiste en uso de
reactivos bifuncionales que originan uniones
intermoleculares entre las molculas de
enzima.
(dialdehdos,
diiminosteres,
diisocianatos, sales de bisdiazonio)

Coreticulado
Permite eliminar las prdidas de actividad
enzimtica debidas a efectos difusionales,
mediante el entrecruzamiento de las enzimas
con una protena sin actividad enzimtica y rica
en residuos de lisina.

Eleccin del mtodo de

Inmovilizacin
No hay un mtodo universal

Eleccin:
Condiciones de la reaccin
biocatalizada
Tipo de reactor
Tipo de sustrato procesado

MTODO

Inclusin
en
membranas

Atrapamient
o

Reticulad
o

Adsorcin
qumica

Unin
covalente

Preparacin

Intermedia

Difcil

Intermedia

Sencilla

Difcil

Fuerza de unin

Dbil

Media

Dbilmedia

Media

Fuerte

Actividad
enzimtica

Media-Alta

Baja

Baja

Media

Alta

Regeneracin
soporte

Posible

Imposible

Imposible

Posible

Difcil

Costo proceso

Medio-Alto

Medio

Medio

Bajo

Alto

Estabilidad

Media

Alta

Alta

Baja

Alta

Validez

General

General

Limitada

General

Limitada

Resistencia
microbiana

No

No

 mtodos de preparacin
difcil y costosos
biocatalizadores ms estables y
duraderos
mtodos ms sencillos
derivados inmovilizados con
prdidas de actividad y deben
ser repuestos continuamente

Efectos de la
inmovilizacin

Incremento en la estabilidad

Actividad enzimtica afectada por

efectos:
Estricos
Difusionales
Del microentorno

Incremento de la
estabilidad

Estabilizacin conformacional (uniones multipuntuales

enzima-soporte)

Proteccin frente a las proteasas en el medio.

Se evita la agregacin intermolecular
Alteracin del microentorno de la enzima

Efectos en la
actividad enzimtica
Si se pierde la actividad puede ser debido a :
Unin del soporte. Paso del sustrato
impedido.
Reaccin del soporte con parte del centro
activo.
Cambio conformacional
Condiciones experimentales.
Desnaturalizacin o desactivacin de la
enzima.

Aplicaciones de las
enzimas inmovilizadas

Analticas
Mdicas
En la Industria

Aplicaciones analticas
Biosensores: sensores de glucosa.
ctodo de
Pt

aislante

buffer KCl
nodo de
Ag
solucin a
analizar

Glucosa + O2

membrana

glucosa oxidasa

cido glucnico + H2O2

Aplicaciones
mdicas
Antitumoral
Cicatrizante

Aplicaciones en la
Industria
Farmacutica: sntesis de antibiticos

Alimenticia: hidrlisis de protenas e

hidratos de carbono
Qumica: produccin industrial de
acrilamida
Tratamientos de aguas residuales:
degradacin del benceno

Produccin de Etanol

Sntesis qumica: Mediante la

modificacin del etileno por
hidratacin.

Bioetanol: Procesamiento de materia

biolgica (biomasa). A partir de un gran
nmero de plantas; como caa de
azcar, remolacha, melazas, etc.

PROCESO BIOETANOL
Fermentacin anaerbica de
azcares llevada a cabo por
bacterias o levaduras en solucin
acuosa y una posterior destilacin.

Investigacin produccin de
ETANOL con clulas
inmovilizadas
Cepas de Zymomonas mobilis:
var. mobilis (Zmm1 y Zmm2)
pomaceae (Zmp1 y Zmp2)

Aisladas de muestras de melazas de caa

con el propsito de realizar un estudio
comparativo con resultados reportados
anteriormente a partir de:

clulas libres,Zymomonas mobilis mobilis

Resultados de la
investigacin

Los resultados revelaron a una

concentracin de inmovilizacin del
2% p/v, un rendimiento de 92.1%,
por parte de las cepas nativas Zmm1
y Zmm2 y de 97.85%, con Zmm 560,
comparado con los rendimientos de
etanol obtenidos a partir de clulas
libres, de 72.9% por parte de Zmm1
y 76.74% con Zmm 560.

Ventajas del uso de clulas

inmovilizadas

Teniendo en cuenta que la utilizacin de clulas

inmovilizadas ha sido considerado un mtodo eficaz en el
aumento de produccin de metabolitos por parte de las
clulas ya que permite:

la utilizacin de clulas por largos

periodos de tiempo,
aumenta la estabilidad de las clulas
permite ventajas en la configuracin de
reactores entre las que se incluyen:

un rpido control de pH y temperatura,

mantener altas concentraciones de clulas
no requiere sistemas de agitacin.

Inmovilizacin de clulas

Se utiliza un polmero en este caso alginato de calcio.

Se deja gotear una solucin de alginato de Na+ en
una solucin de CaCl2 obtenindose en tiempos
cortos, bolillas esfricas de tamao controlado y
homogneo. Es un mtodo que presenta gran
flexibilidad, pues alginatos de distinto peso molecular
y distinta composicin qumica rinden geles de muy
buenas caractersticas qumicas y fsicas.
El rango de temperaturas de operacin va desde 0
hasta 80 C.
Las bolillas que se obtienen presentan dimetros
entre 0,1 y 5 mm. y pueden presentar una alta carga
celular por entrampamiento directo (hasta 30 g de
clulas hmedas por ml de catalizador).
Este sistema puede someterse a un secado parcial,
con lo que el tamao disminuye y aumenta la
estabilidad mecnica sin variacin en la porosidad.

Puntos destacables del

mtodo

Reversibilidad de la gelificacin: obliga

a tomar precauciones en cuanto a la
composicin
del
medio
a
utilizar,
principalmente pH y presencia de agentes
que puedan secuestrar a los contraiones
por precipitacin o por formacin de
complejos.
Buena estabilidad mecnica respecto al
empaquetado en columna y a la agitacin.
Formacin de bolillas regulares, y con
tamao controlado.
Formacin de redes macroporosas, que
se conservan an despus del secado
parcial.

Alta capacidad de carga sin

prdida de estabilidad mecnica,
pero con prdida de eficiencia
debido a resistencias difusionales.
Rendimientos
de
actividad
cataltica de entre 80 y 100% en
condiciones de reaccin controladas.
Mtodo suave, que permite que las
clulas mantengan viabilidad y
estabilidad.
Flexibilidad y simplicidad

FERMENTACIN

Bioreactores para clulas

inmovilizadas

Consideraciones para elegir el

bioreactor
estudio de la variacin de la
velocidad inicial de reaccin frente a
la variacin de las concentraciones
de enzima y de sustrato.
efecto del tipo de buffer y del ph.
limitaciones
difusionales
en
el
sistema (efecto del tamao de
partcula y la carga enzimtica)

grado de conversin frente a tiempo

de residencia.
estabilidad del biocatalizador en el
almacenamiento (velocidad inicial
residual tras el almacenamiento a
diferentes tiempos en diferentes
condiciones).
estabilidad
operacional (velocidad
inicial residual despus de diferentes
ciclos catalticos).

Agradecimientos:

DR. Miguel Arroyo

Dpto.

de Bioqumica y Biologa Molecular_Facultad de

Cs. Biolgicas
Universidad Complutense de Madrid.

Adriana Matiz, Claudia Torres y Ral

Pontou

Laboratorio

de Biotecnologa Aplicada Dpto. de Microbiologa_

Facultad de Ciencias_ Pontificia Universidad Javeriana de Bogot
Colombia

Dr.

Civit
Dr. Da Silva
Ing. Puglisi
Ing. Fuentes Berazategui