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Ingeniera en
Biotecnologa
1.- Introduccin
1. Que es la Biologa Celular.
2. Aspectos Histricos de la Biologa
Celular.
3. Teora Celular.
. Concepto de clula
. Evolucin de la teora celular
4. principales herramientas
. Microscopia.
. Tcnicas histolgicas
1665
1675
1824
1831
1839
ACTIVIDAD 1
Realizar una lnea del tiempo con los
acontecimientos mas importantes en
la historia de la biologa celular.
1838
1839
Mathias
Schleiden,
botnico alemn y Theodor
Schwann zologo de la
misma
nacionalidad,
relacionaron
todos
los
descubrimientos anteriores
y los ampliaron con sus
propias observaciones en
tejidos
vegetales
y
animales, lo que los llev
elaborar la Teora Celular.
Tamao celular
Las clulas son las unidades bsicas de los seres
vivos. La mayora de ellas son de pequeo
tamao por lo que es indispensable el uso de
instrumentos como los microscopios para su
visualizacin. Por lo general el poder resolutivo
del ojo humano es de 0.2mm (200 m), o sea la
menor distancia vista o resuelta por el ojo
humano es de dos lneas separadas 1mm de
distancia; si hay dos lneas a 200 m de distancia,
veremos una sola lnea. Los microscopios se
utilizan para mejorar la resolucin.
4.-Principales
herramientas
1.4.1. Microscopa
Microscopa
(o
tambin
sin
tilde
microscopia) es el conjunto de tcnicas y
mtodos destinados a hacer visible los objetos de
estudio que por su pequeez estn fuera del
rango
de
resolucin
del
ojo
normal.
Si bien el microscopio es el elemento central de
la microscopa, el uso del mismo se requiere para
producir las imgenes adecuadas, de todo un
conjunto de mtodos y tcnicas afines pero
extrnsecas al aparato.
Microscopa ptica
Microscopa ptica (microscopa de luz
clsica), consiste en hacer pasar luz visible
de una fuente (difractada, reflejada o
refractada en el sujeto de estudio) a
travs de lentes pticos simples o
mltiples, para lograr una vista ampliada
de la muestra. La imagen resultante puede
ser detectada directamente por el ojo
humano, impresa en una placa fotogrfica
o registrada y mostrada digitalmente.
Microscopio
estereoscpico
SISTEMA
MECANICO
SISTEMA OPTICO
Ocular
Objetivos
Sistema de iluminacin
Condensador
Diafragma
Portafiltro
Espejo
Fuente de Luz
ACTIVIDAD 2
Realizar una investigacin de los
diferentes tipos de microscopios.
Sinopsis general
Paso
Obtencin
Fijacin
Inclusin
Corte
Coloracin
Montaje
Objetivos
-Proveer el material para su
estudio al microscopio
Medios usuales
- Biopsia
- Reseccin quirrgica
- Autopsia
- Preservar el material
- Formol al 10 %
- Evitar la autlisis
- Bouin
- Eliminar los m.o.
- Glutaraldehdo
- Embeber el material en un
- Parafina
medio fcil de cortar en fetas - Acrlicos
muy delgadas
- Resinas Epoxi
- Lograr lminas muy
- Micrtomo rotatorio
delgadas que sean
- M. de deslizamiento
atravesadas por la luz
- Ultramicrtomo
- Visualizar los tejidos
- Hematoxilina - Identificar molculas en
eosina
ellos
- Tricrmicos
(Histoqumica)
- Histoqumica
- Preservar el corte,
Blsamo del Canad
mantenindolo
- Medios plsticos
aislado del aire y
deshidratado
Proceso de fijacin
La fijacin es en esencia un mtodo para la preservacin
de la morfologa y la composicin qumica de las clulas
y los tejidos.
Consiste en que las clulas conserven su estructura con
un mnimo de modificaciones.
Asimismo algunos mtodos tratan de conservar intacta
su composicin qumica.
La fijacin debe realizarse inmediatamente de extraer las
clulas del organismo, para evitar las lesiones , cambios
osmticos y luego alteraciones estructurales y
bioqumicas ms profundas, autolisis.
Deben actuar sobre fragmentos relativamente pequeos
de tejidos (como regla general menos de 1 cm cbico),
para que la difusin del fijador desde las superficies.
Fsicos
Qumico s
simples
-
Calor
Desecacin
Microondas
Alcoholes
Aldehdos
- cidos
- Sales
Mezclas Carnoy
de
Bouin
qumico Zenker
s
FaGlu
-Metanol
-Etanol
- Formaldehdo
-Glutaraldehdo
- Actico
- Pcrico
-Osmico
- Bicromato de potasio
-Bicloruro de mercurio
Alcohol etlico +Acido actico
Acido pcrico + Formol +Acido
actico
Bicromato de potasio +
Bicloruro de mercurio +
Acido actico
Formaldehdo +
Glutaraldehdo
Lavados
Se debe lavar el tejido para quitar el exceso
de fijador.
Generalmente se emplea agua destilada o
agua corriente a chorro medio, para no
eliminar la preparacin.
Deshidratacin.
El exceso de fijador al momento de la
infiltracin, incluso en la microtoma,
podra afectar los cortes histolgicos, y por
ello se debe lavar. La deshidratacin se
hace empleando diferentes soluciones de
alcohol de concentracin creciente.
Aclaramiento
En este paso se sustituye el alcohol
por un disolvente de parafina. El ms
usado es el xilol (xileno) ya que como
la muestra est deshidratada, el xilol
entrar hasta lo ms profundo del
tejido. Tambin el tejido pierde color
y adquiere un tono acaramelado.
Infiltracin
En este paso la muestra se coloca en
parafina lquida, cabe mencionar que se
debe usar parafina histolgica. Como se ha
dicho en el paso anterior el tejido est
completamente lleno de xilol, ahora debido a
smosis sale el xilol y entra la parafina.
La deshidratacin, aclaramiento e infiltracin
pueden ser realizadas manualmente pero
hoy en da se realizan de modo automtico
en mquinas especficas.
Inclusin
Para la obtencin de cortes finos es
un requisito indispensable que el
tejido
haya
sido
previamente
endurecido: hasta un cierto punto,
cuanto mayor sea la firmeza del
tejido, tanto ms delgada resulta el
corte histolgico. Con el fin de
endurecer los tejidos existen dos
mtodos principales: la congelacin o
la inclusin
Proceso de fijacin
Lavados
Deshidratacin
Aclaramiento
Infiltracin
Inclusin
Microtoma
Tincin
Observacin
http://es.wikipedia.org/wiki/T%C3%A9cnica_histol%C3%B3gica
Microtoma
Se realizan cortes histolgicos muy delgados segn lo
requerido o la costumbre del laboratorio donde se
realice la tcnica. Los cortes van desde 0,5 micras
hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al bao de
flotacin y se pescan con un portaobjetos, se marcan
con la fecha, el tipo de tejido y la tincin con que se
van a procesar. El ngulo de corte entre el cuchillo del
microtomo y el bloque ha de estar entre 10 y 15.
Una vez realizado el corte se da un bao de agua
destilada, para que la parafina se estire. Un buen corte
histolgico debe tener un grosor aproximado de 3-5
micras para que sea fcilmente atravesado por la luz.
Los microtomos ms
usados son
Microtomo para parafina: Se utiliza principalmente para material incluido en
parafina y se obtienen secciones de 5 a 20 m de grosor, para observar con el
microscopio ptico.
Vibratomo: Corta material no incluido, aunque s fijado o duro, en secciones de
30 a centenares de m de grosor, para observar con el microscopio ptico.
Microtomo de congelacin: Con l se consiguen secciones de 30 a unas 100
m de material congelado para su observacin con el microscopio ptico.
Criostato: Consigue secciones a partir de material congelado y se obtienen
grosores de 10 a 40 m, para observar con el microscopio ptico.
Ultramicrotomo: Con l se corta material incluido en resinas y se obtienen
secciones del orden de nanometros de grosor, para observar con el microscopio
electrnico de transmisin.
Ultracriotomo: Su uso no est muy extendido pero se suele emplear cuando se
necesitan secciones del orden de nanometro de material que no se debe incluir,
para observar con el microscopio electrnico de transmisin.
Tincin
Hay muchos tipos de tinciones para diferenciar
en los tejidos las diferentes estructuras o
sustancias.
La tincion ms usada o tambin llamada "de
rutina" es la de hematoxilina y eosina (H&E). Se
usa un colorante llamado hematoxilina que tie
las sustacias cidas o que las contengan, como
el ncleo que contiene cido desoxirriboncleico
(ADN) La eosina amarillenta tie las estructuras
bsicas como el citoplasma y dems orgnulos
eosinoflicos de la clula.
Ejemplos
Masson
PAS
Perls
Plata metenamina
Warthin-Starry
Ziehl-Neelsen
Van Gieson
Azul alcian
Sudn III
Rojo Congo
Tinciones diferenciales : Gram
Histoqumica
La histoqumica es el conjunto de tcnicas de
coloracin destinadas a visualizar sustancias
especficas en los tejidos.
El mtodo histoqumico en sentido estricto es
microscpico debe cumplirse varias condiciones:
1) la sustancia original debe ser inmovilizada y
visualizada por el microscopio en su localizacin
celular original
2) la sustancia debe ser identificada por un
procedimiento que sea especfico para ella o para el
grupo qumico al que pertenece
Ubicacin general
Lpidos
- Sudanes
- Aceite rojo 0
- Tetrxido de osmio
Hidratos de carbono
- PAS
- Azul de Alcian
- Metacromasia
Protenas
Acidos nucleicos
Acidofilia y basofilia
Impregnacin argntica
Histoenzimologa
Inmunohistoqumica
Observacin
Es el ultimo paso de una preparacin
histolgica que es muy empleada en
laboratorios y hospitales, y se realiza
a travs del microscopio ptico o
microscopio electrnico.
Actividad 3
http://biologiadelacelula.files.wordpress.com/2008/04/senali
zacion-celular.pdf
http://bibliotecadeinvestigaciones.wordpress.com/biologia/labiologia-celular/
http://microscopia.galeon.com/productos1689173.html
http://www.biologia.edu.ar/microscopia/microscopia1.htm
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/2-fijacion.php
www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/.../3_tecnica_
histologica.pdf
http://www.dermato101.com.ar/tecnica.pdf