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BIOLOGIA CELULAR

Ingeniera en
Biotecnologa

1.- Introduccin
1. Que es la Biologa Celular.
2. Aspectos Histricos de la Biologa
Celular.
3. Teora Celular.
. Concepto de clula
. Evolucin de la teora celular
4. principales herramientas
. Microscopia.
. Tcnicas histolgicas

1.1. Biologa celular.


disciplina cientfica que se encarga de
estudiar las propiedades, la estructura, las
funciones y el ciclo vital de las clulas.

La citologa o biologa celular es la


rama de la biologa que estudia las clulas
en lo que concierne a su estructura, sus
funciones y su importancia en la
complejidad de los seres vivos.

1.2. Aspectos histricos de la


biologa celular
Ya en la antigedad, los filsofos y
naturalistas haban llegado a la
conclusin de que tanto los animales
como
los
vegetales,
estaban
constituidos por diversos elementos
comunes.

Estos elementos eran las estructuras


macroscpicas, como races, tallos y
flores en los vegetales y segmentos y
rganos en los animales
Como en esta poca no existan
aparatos ni tcnicas para observar
las estructuras microscpicas, los
componentes
celulares
ms
importantes pasaron inadvertidos.

En el siglo XVII, con el invento del microscopio,


fue posible aumentar la imagen de los materiales
vivientes, lo que permiti establecer las bases de
la Biologa Celular, disciplina moderna que
apoya en la bioqumica, gentica, fisiologa,
biofsica
e
histologa,
para
dilucidar
la
estructura, organizacin y funcionamiento
de la clula. As se ha logrado describir el
movimiento de diferentes molculas hacia
adentro y fuera de la clula a travs de la
membrana en apariencia, impermeable. El
transporte
de
sustancias
es
vital,
pues
proporciona a la clula compuestos que proveen
energa y, por otra parte, elimina aquellos que
resulta nocivos.

1665

Emple por primera vez la palabra


clula. observ al microscopio un corte
de corcho que describi como una
estructura formada por huecos o
espacios similares a las celdillas de un
panal.

1675

Holands Antonio van Leeuwenhoek,


contribuy de manera especial al desarrollo
de la Biologa Celular con el descubrimiento
de los microbios en el agua.

1824

Investigador francs H. Dutrochet,


observ al microscopio porciones de
plantas y animales, despus de lo cual
propuso que stas se encontraban
formadas
por
clulas,
las
que
constituan las unidades bsicas de la
estructura de los seres vivos.

1831

ingls Robert Brown en 1831, fue el


primero en reconocer el ncleo celular, lo
descubri en estructuras vegetales como
una estructura central y pequea

1839

Jan E. Purkinje, fisilogo checo, acu el


trmino protoplasma para designar el
contenido vivo de la clula

ACTIVIDAD 1
Realizar una lnea del tiempo con los
acontecimientos mas importantes en
la historia de la biologa celular.

1.3 Teora Celular.

1838
1839

Mathias
Schleiden,
botnico alemn y Theodor
Schwann zologo de la
misma
nacionalidad,
relacionaron
todos
los
descubrimientos anteriores
y los ampliaron con sus
propias observaciones en
tejidos
vegetales
y
animales, lo que los llev
elaborar la Teora Celular.

Esta teora constituye uno de los conceptos


generales y fundamentales de la Biologa y
establece que la clula es la Unidad Bsica
Estructural y Funcional de los seres vivos, y
que todos los organismos estn constituidos por
una o ms clulas.
A mediados del siglo XIX, se ampli la
investigacin celular. Rudolf Virchow,
investigador alemn, aplic la teora celular al
estudiar las clulas de tejidos enfermos,
consider a la clula como la Unidad
Estructural, y tambin estableci que todas
las clulas se originan a partir de otras.
En 1855, escribi el tratado Omnis cellula e

Tamao celular
Las clulas son las unidades bsicas de los seres
vivos. La mayora de ellas son de pequeo
tamao por lo que es indispensable el uso de
instrumentos como los microscopios para su
visualizacin. Por lo general el poder resolutivo
del ojo humano es de 0.2mm (200 m), o sea la
menor distancia vista o resuelta por el ojo
humano es de dos lneas separadas 1mm de
distancia; si hay dos lneas a 200 m de distancia,
veremos una sola lnea. Los microscopios se
utilizan para mejorar la resolucin.

La invencin del microscopio en el siglo


XVII posibilit la serie de descubrimientos
posteriores de las mismas. En 1665 Robert
Hooke utilizando un microscopio ptico
simple, examin un corte de corteza,
encontr que esta estaba compuesta por
una masa de diminutas cmaras, que
llam clulas, en realidad slo vi las
paredes celulares, ya que este tejido est
muerto a la madurez y las clulas ya no
tienen contenido. Mas tarde, Hoock y
algunos
de
sus
contemporneos
observaron clulas vivas.

4.-Principales
herramientas
1.4.1. Microscopa

Microscopa
(o
tambin
sin
tilde
microscopia) es el conjunto de tcnicas y
mtodos destinados a hacer visible los objetos de
estudio que por su pequeez estn fuera del
rango
de
resolucin
del
ojo
normal.
Si bien el microscopio es el elemento central de
la microscopa, el uso del mismo se requiere para
producir las imgenes adecuadas, de todo un
conjunto de mtodos y tcnicas afines pero
extrnsecas al aparato.

Algunas de ellas son, tcnicas de


preparacin y manejo de los objetos de
estudio, tcnicas de salida, procesamiento,
interpretacin y registro de imgenes, etc.
la microscopa generalmente implica la
difraccin, reflexin o refraccin de algn
tipo de radiacin incidente en el sujeto de
estudio

Microscopa ptica
Microscopa ptica (microscopa de luz
clsica), consiste en hacer pasar luz visible
de una fuente (difractada, reflejada o
refractada en el sujeto de estudio) a
travs de lentes pticos simples o
mltiples, para lograr una vista ampliada
de la muestra. La imagen resultante puede
ser detectada directamente por el ojo
humano, impresa en una placa fotogrfica
o registrada y mostrada digitalmente.
Microscopio
estereoscpico

El microscopio ptico compuesto tiene los siguientes


Sistemas o partes:

1.- SISTEMA MECNICO:


Soporte
Brazo
Base pie
Tubo del ocular
Cabezal
Revolver
Platina
Tornillos de enfoque:
Tornillo macromtrico
Tornillo micromtrico

SISTEMA
MECANICO

SISTEMA OPTICO
Ocular
Objetivos

Sistema de iluminacin

Condensador
Diafragma
Portafiltro
Espejo
Fuente de Luz

ACTIVIDAD 2
Realizar una investigacin de los
diferentes tipos de microscopios.

Existen distintas variantes de observacin en


MO
Traqueidas del leo de Pinus
Coloracin: safranina
Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El material a
observar se colorea con colorantes especficos que aumentan el contraste y
revelan detalles que no aprecian de otra manera
Microscopa de campo brillante: el material se observa sin coloracin. La
luz pasa directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente
coloreados.
El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de
un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del
objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz
que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen
aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn
analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de
iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin
manchas, invisibles con iluminacin normal.

Microscopa en contraste de fase: se usa


principalmente para aumentar el contraste entre las
partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es
ideal para espcimenes delgados, o clulas aisladas. El
microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono
hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro.
Sin embargo en el microscopio de fase el cono de luz
es ms estrecho y entra en el campo de visin del
objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo
que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio
de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo
de iluminacin provoca variaciones minsculas en el
ndice de refraccin de un espcimen transparente,
hacindolo visible. Este tipo de microscopio es muy til
a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza

con frecuencia en biologa y medicina.

Nomarski, microscopa diferencial de


contraste de interferencia (DIC). Utiliza
dos rayos de luz polarizada y las imgenes
combinadas aparecen como si la clula
estuviera proyectando sombras hacia un lado.
Fue diseado para observar relieves de
especimenes muy difciles de manejar, es
muy utilizado en los tratamientos de
fertilizacin in-vitro actuales. DIC se usa
cuando el espcimen es muy grueso para
usar contraste de fases

Microscopa de fluorescencia: una sustancia


natural en las clulas o un colorante fluorescente
aplicado al corte es estimulado por un haz de luz,
emitiendo parte de la energa absorbida como
rayas
luminosos:
esto
se
conoce
como
fluorescencia. La luz fluorescente de mayor
longitud de onda se observa como si viniera
directamente del colorante.
Clulas epiteliales , triple coloracin:
ncleo (azul), microtubulos (verdes),
actina (rejo). 200X (izq.) y 1000X (der.).

1.4.2 Tcnicas histolgicas


Se denomina tcnica histolgica al conjunto de
operaciones a que se somete una materia organizada
(tejido biolgico), a fin de que sea posible su estudio
por medio del microscopio, posibilitando la
observacin de estructuras no visibles al ojo humano.
Se denomina TCNICA HISTOLOGICA al conjunto de
procedimientos aplicados a un material biolgico
(animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y
conferirle las condiciones ptimas para poder
observar, examinar y analizar sus componentes
morfolgicos a travs de los microscopios fotnicos y
electrnicos.

Obtencin del material histolgico


Los tejidos se pueden obtener de diferentes
formas:
Biopsia
- Biopsa excisional - Biopsia incisional Biopsa endoscpica - Biopsia colposcpica Puncin aspiracin con aguja fina (PAAF) Biopsia por puncin con aguja gruesa (Trucut)
Abiopsia
Necrociruga (llamada vulgarmente autopsia)

Sinopsis general
Paso
Obtencin

Fijacin

Inclusin

Corte

Coloracin

Montaje

Objetivos
-Proveer el material para su
estudio al microscopio

Medios usuales
- Biopsia
- Reseccin quirrgica
- Autopsia
- Preservar el material
- Formol al 10 %
- Evitar la autlisis
- Bouin
- Eliminar los m.o.
- Glutaraldehdo
- Embeber el material en un
- Parafina
medio fcil de cortar en fetas - Acrlicos
muy delgadas
- Resinas Epoxi
- Lograr lminas muy
- Micrtomo rotatorio
delgadas que sean
- M. de deslizamiento
atravesadas por la luz
- Ultramicrtomo
- Visualizar los tejidos
- Hematoxilina - Identificar molculas en
eosina
ellos
- Tricrmicos
(Histoqumica)
- Histoqumica
- Preservar el corte,
Blsamo del Canad
mantenindolo
- Medios plsticos
aislado del aire y
deshidratado

Proceso de fijacin
La fijacin es en esencia un mtodo para la preservacin
de la morfologa y la composicin qumica de las clulas
y los tejidos.
Consiste en que las clulas conserven su estructura con
un mnimo de modificaciones.
Asimismo algunos mtodos tratan de conservar intacta
su composicin qumica.
La fijacin debe realizarse inmediatamente de extraer las
clulas del organismo, para evitar las lesiones , cambios
osmticos y luego alteraciones estructurales y
bioqumicas ms profundas, autolisis.
Deben actuar sobre fragmentos relativamente pequeos
de tejidos (como regla general menos de 1 cm cbico),
para que la difusin del fijador desde las superficies.

Propiedades de los fijadores:


- Producen una rpida muerte celular,
evitando la autlisis
- Preservan la morfologa celular y tisular
- Preservan la composicin qumica
- Penetran a los tejidos con relativa rapidez
- Facilitan la coloracin posterior
- Inhiben el crecimiento microbiano y por lo
tanto la putrefaccin
- Aumentan la consistencia de los tejidos
- Algunos de ellos colorean sustancias de los
tejidos.

Efectos indeseables de algunos


fijadores:
- Retraen los tejidos
- Precipitan en forma de cristales
- Endurecen demasiado las muestras
- Poseen olor desagradable e irritan la
piel y las mucosas
- Producen alteraciones importantes a
nivel molecular
- Producen alteraciones importantes a
nivel ultraestructural


Fsicos

Clasificacin general fijadores

Qumico s
simples
-

Calor
Desecacin
Microondas
Alcoholes

Aldehdos

- cidos

- Sales
Mezclas Carnoy
de
Bouin
qumico Zenker
s
FaGlu

-Metanol
-Etanol
- Formaldehdo
-Glutaraldehdo
- Actico
- Pcrico
-Osmico
- Bicromato de potasio
-Bicloruro de mercurio
Alcohol etlico +Acido actico
Acido pcrico + Formol +Acido
actico
Bicromato de potasio +
Bicloruro de mercurio +
Acido actico
Formaldehdo +
Glutaraldehdo

Lavados
Se debe lavar el tejido para quitar el exceso
de fijador.
Generalmente se emplea agua destilada o
agua corriente a chorro medio, para no
eliminar la preparacin.
Deshidratacin.
El exceso de fijador al momento de la
infiltracin, incluso en la microtoma,
podra afectar los cortes histolgicos, y por
ello se debe lavar. La deshidratacin se
hace empleando diferentes soluciones de
alcohol de concentracin creciente.

Aclaramiento
En este paso se sustituye el alcohol
por un disolvente de parafina. El ms
usado es el xilol (xileno) ya que como
la muestra est deshidratada, el xilol
entrar hasta lo ms profundo del
tejido. Tambin el tejido pierde color
y adquiere un tono acaramelado.

Infiltracin
En este paso la muestra se coloca en
parafina lquida, cabe mencionar que se
debe usar parafina histolgica. Como se ha
dicho en el paso anterior el tejido est
completamente lleno de xilol, ahora debido a
smosis sale el xilol y entra la parafina.
La deshidratacin, aclaramiento e infiltracin
pueden ser realizadas manualmente pero
hoy en da se realizan de modo automtico
en mquinas especficas.

Inclusin
Para la obtencin de cortes finos es
un requisito indispensable que el
tejido
haya
sido
previamente
endurecido: hasta un cierto punto,
cuanto mayor sea la firmeza del
tejido, tanto ms delgada resulta el
corte histolgico. Con el fin de
endurecer los tejidos existen dos
mtodos principales: la congelacin o
la inclusin

El tejido se impregna en un material que le


confiere una consistencia adecuada para el corte.
Para el microscopio ptico se usa casi
exclusivamente la parafina. despus por solventes
intermediarios como el xileno, el benceno o el
tolueno (aclarantes). O con acrlicos de bajo peso
molecular como el
metilmetacrilato, lo que permite obtener cortes
ms delgados.
Para microscopa electrnica se incluye casi
invariablemente en resinas epoxi.
Se deben poner a enfriar en un congelador para
su corte.

Proceso de fijacin
Lavados
Deshidratacin
Aclaramiento
Infiltracin
Inclusin
Microtoma
Tincin
Observacin

http://es.wikipedia.org/wiki/T%C3%A9cnica_histol%C3%B3gica

Microtoma
Se realizan cortes histolgicos muy delgados segn lo
requerido o la costumbre del laboratorio donde se
realice la tcnica. Los cortes van desde 0,5 micras
hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al bao de
flotacin y se pescan con un portaobjetos, se marcan
con la fecha, el tipo de tejido y la tincin con que se
van a procesar. El ngulo de corte entre el cuchillo del
microtomo y el bloque ha de estar entre 10 y 15.
Una vez realizado el corte se da un bao de agua
destilada, para que la parafina se estire. Un buen corte
histolgico debe tener un grosor aproximado de 3-5
micras para que sea fcilmente atravesado por la luz.

Los microtomos ms
usados son
Microtomo para parafina: Se utiliza principalmente para material incluido en
parafina y se obtienen secciones de 5 a 20 m de grosor, para observar con el
microscopio ptico.
Vibratomo: Corta material no incluido, aunque s fijado o duro, en secciones de
30 a centenares de m de grosor, para observar con el microscopio ptico.
Microtomo de congelacin: Con l se consiguen secciones de 30 a unas 100
m de material congelado para su observacin con el microscopio ptico.
Criostato: Consigue secciones a partir de material congelado y se obtienen
grosores de 10 a 40 m, para observar con el microscopio ptico.
Ultramicrotomo: Con l se corta material incluido en resinas y se obtienen
secciones del orden de nanometros de grosor, para observar con el microscopio
electrnico de transmisin.
Ultracriotomo: Su uso no est muy extendido pero se suele emplear cuando se
necesitan secciones del orden de nanometro de material que no se debe incluir,
para observar con el microscopio electrnico de transmisin.

Tincin
Hay muchos tipos de tinciones para diferenciar
en los tejidos las diferentes estructuras o
sustancias.
La tincion ms usada o tambin llamada "de
rutina" es la de hematoxilina y eosina (H&E). Se
usa un colorante llamado hematoxilina que tie
las sustacias cidas o que las contengan, como
el ncleo que contiene cido desoxirriboncleico
(ADN) La eosina amarillenta tie las estructuras
bsicas como el citoplasma y dems orgnulos
eosinoflicos de la clula.

Ejemplos

Masson
PAS
Perls
Plata metenamina
Warthin-Starry
Ziehl-Neelsen
Van Gieson
Azul alcian
Sudn III
Rojo Congo
Tinciones diferenciales : Gram

Histoqumica
La histoqumica es el conjunto de tcnicas de
coloracin destinadas a visualizar sustancias
especficas en los tejidos.
El mtodo histoqumico en sentido estricto es
microscpico debe cumplirse varias condiciones:
1) la sustancia original debe ser inmovilizada y
visualizada por el microscopio en su localizacin
celular original
2) la sustancia debe ser identificada por un
procedimiento que sea especfico para ella o para el
grupo qumico al que pertenece

Ubicacin general
Lpidos

- Sudanes
- Aceite rojo 0
- Tetrxido de osmio

Hidratos de carbono

- PAS
- Azul de Alcian
- Metacromasia

Protenas

Acidos nucleicos

- Verde de metilo Pironina


- Anaranjado de acridina
- Reaccin de Feulgen
- Hibridacin in situ

Acidofilia y basofilia
Impregnacin argntica
Histoenzimologa
Inmunohistoqumica

Observacin
Es el ultimo paso de una preparacin
histolgica que es muy empleada en
laboratorios y hospitales, y se realiza
a travs del microscopio ptico o
microscopio electrnico.

Actividad 3

Realizar un cuadro sinptico de


tcnica histolgica.

http://biologiadelacelula.files.wordpress.com/2008/04/senali
zacion-celular.pdf
http://bibliotecadeinvestigaciones.wordpress.com/biologia/labiologia-celular/
http://microscopia.galeon.com/productos1689173.html
http://www.biologia.edu.ar/microscopia/microscopia1.htm
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/2-fijacion.php
www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/.../3_tecnica_
histologica.pdf
http://www.dermato101.com.ar/tecnica.pdf