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Espectro de Radiao
Eletromagntica
Curto
Energia
Comprimento de
onda ()
Longo
Energia
NO APRESENTAM MOMENTO
GULAR
12 ASSOCIADO
16
NO EXIBEM PROPRIEDADES
GNTICAS
6
8
C O
AUSNCIA 32
DE SINAIS DETECTVEIS
R RMN
O SO APLICVEIS
ANLISES DE
16
N
H
13
6
C
Spi
Princpio
No Espectro de
RMN
Campo
baixo
Campo
alto
RMN
Onda pulsada
Onda
Principal vantagem: alta razo sinal/rudo para um mesmo
pulsada
tempo de medida
RMN no Domnio de Tempo (RMN-DT)
Utilizam ms permanentes de baixo campo
magntico (<60 MHz) e menos homogneos
Baixa resoluo
Intensidade x Tempo
RMN com Transformada de Fourier (RMNTF)
Utilizam ms oscilantes de alto campo
magntico
(>100 MHz), mais homogneos e estveis.
Alta resoluo
Interface LC-RMN
Dissoluo do
composto em
solvente delterado
Equipamento
de RMN
Tubo de RMN
(5mm)
Modo de Operao:
Continuous - Flow
Pr-requisitos
Instrumentao do HPLC;
Instrumentao da RMN;
Sonda de fluxo contnuo;
Vlvula instalada antes da sonda para registrar tanto o espectro no
modo stopped-flow quanto continuous flow.
Uso de solventes deuterados j na fase de separao por HPLC
LC-RMN
Tcnica hifenada;
Fornece informaes estruturais da molcula;
Tcnica com baixa sensibilidade;
Alto custo;
Condies de fase reversa
Mtodos de supresso de
solvente
Cuidados gerais
Amostras devem ser solveis em solventes deuterados
Ex. CDCl3,DMSO-d6,MeOH-d4,MeCN-d3,acetona-d6,benzeno-d6,D2O.
Quantidade ideal de amostra
RMN de H 5-10 mg
(amostras muito concentradas alargam as linhas do espectro)
Observaes:
As amostras devem ser filtradas, pois a presena de partculas insolveis pode
prejudicar o ajuste de homogeneidade do campo magntico.
Transferir a soluo para um tudo de RMN de 5 mm limpo, seco e isento de
trincas.
Aps a anlise, a amostra deve ser imediatamente retirada do tubo de RMN, pois
ela poder ficar parcialmente impregnada em sua parede, tornando com o tempo
inadequado para anlise de RMN.
Condies Cromatogrficas
- Coluna C18 250 mm x 4,6 mm
- Fase mvel : D2O com 1% cido Triclorofluoractico 80:20
Acetonitrila
- Fluxo 1 mL/min
- UV 254 nm
- HPLC acoplado a RMN stopped-flow
- Amostra um extrato metanlico diludo em D2O
Standard
20-hydroxyecdysone
2-deoxy-20-hydroxyecdysone
Resultado Cromatogrfico
(B) 2-deoxy-20hydroxyecdysone
(C) 2-deoxyecdysone
Estruturas Qumicas
(A) 20hydroxyecdysone
B) 2-deoxy-20hydroxyecdysone
(C) 2-deoxyecdysone
Concluso
Estes resultados demonstram claramente que
o HPLC-RMN eficientemente utilizvel para
a identificao dos ecdisterides presentes
neste extrato parcialmente purificado atravs
da
separao
realizada
no
HPLC
de Silene otite.
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