Blga.

Marel Tello

ANYPLEX II DETERMINACIN DE
TBC/MDR/XDR

ESTUDIOS
EN PER

La tuberculosis (TB) y sus principales formas resistentes, TB-MDR

y TB-XDR (sta virtualmente incurable) constituyen uno de los
problemas de salud pblica ms importantes en el pas y la
PRIMERA CAUSA DE MUERTE POR ENFERMEDAD INFECCIOSA.

Segn
cifras
oficiales de la ESNPCT en el ao
2006, cada hora 4
personas
fueron
diagnosticadas de
TB y cada da
fallecieron
3
personas por esta

Segn la OMS, considerando el

porcentaje de deteccin del programa
y estimaciones del sub-registro para el
2006, el nmero de enfermos se
incrementa a 6 por hora en el
Per.

Slo las provincias de Lima y Callao

notificaron ms casos de TB que
Colombia, Ecuador, Argentina, Chile o
EEUU y obtuvieron la tasa de
incidencia por 100,000 habitantes
ms alta en todo el continente
americano, por encima de Hait,
Bolivia, Guayana y de algunos pases
del frica Subsahariana como Uganda,
Etiopa,
El
Congo,
Mozambique,

30 millones de habitantes

No hay datos para Per de TB

XDR

PER

Alta incidencia de TB.

Primer pas en Amrica con mayor carga de TB MDR y TB XDR (80 y
90%, en Lima y Callao).
Existe tratamiento con drogas de primera y segunda lnea.
El MINSA no esta dotada de la capacidad ejecutiva para tomar
decisiones oportunas sobre esta enfermedad, la que contina
diseminndose y matando principalmente a la poblacin
econmicamente productiva de las ciudades ms importantes
del pas.
El primer nivel de atencin, actualmente responsable del manejo de
estos pacientes, no tiene los recursos suficientes para tratarlos.
Esta penosa realidad es consecuencia directa de la pobreza y del

PER
La magnitud alcanzada por la TB, la TB MDR y la TB XDR en
el Per, justifica que esta enfermedad sea declarada en
emergencia sanitaria nacional para lograr la movilizacin
de recursos del tesoro pblico y desarrollar un eficiente
programa ejecutivo de control que considere las
recomendaciones internacionales en el contexto de la
experiencia ganada en el pas.

PER
Medidas Inmediatas:

Creacin de un centro de referencia nacional.

Centros de referencia regionales especializados en prevencin,

diagnstico y tratamiento de la TB, con la capacidad de lograr la
universalizacin de pruebas de sensibilidad para ofrecer
tratamientos individualizados al 100% de los afectados.

Tratamiento institucionalizado de las principales formas resistentes,

hasta controlar su condicin de transmisor.

Brindar un subsidio a la persona afectada para cubrir las necesidades

bsicas de su familia mientras dura su terapia.

Resultados en 8h
tanto para
TBC/MDR/XDR

Tiempo entre: 8-12

das

LINEZOLID
El Linezolid es un antimicrobiano para el
tratamiento de infecciones por bacterias gram
positivas resistentes y ha sido reportado en
estudios in vitro frente a M. tuberculosis, las dosis
sugeridas en humanos son de 600mg a 1200 mg
por da. Su uso ha sido limitado debido a que se han
reportado serios efectos adversos: mielotoxicidad y
toxicidad neuroptica, los cuales son dependientes de
la dosis y de la duracin del tratamiento.

LINEZOLID
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) ha
clasificado a las drogas de segunda lnea para el
tratamiento de la TB MDR, considerando al linezolid
dentro del grupo que incluye adems a laclofazimina,
laamoxicillina/clavulanato,
la
thioacetazona,
la
claritromicina y elimipenem (llamado, Grupo 5). Sin
embargo, para la TB XDR el tratamiento no se
encuentra estandarizado y su eficacia es incierta.

COSTO
TRATAMIEN
TO TB

COSTO POR PACIENTE EN

MXICO

TB sensible: 150-200 dlares.

TB MDR: 1,500 - 2,500 dlares.

SUDFRICA:
US$ 81 - 166 para la deteccin de un caso de tuberculosis
US$ 92 - 183 para el rgimen completo de terapia
preventiva con isoniazida (TPI) y US$ 20 - 44 para el
tratamiento preventivo con cotrimoxazol durante seis
meses

COSTO ESTIMADO PER

TRATAMIENTO 2009
En EsSalud:
S/.1500 por paciente con TB sensible.
S/. 25 000 por paciente con TB MDR.

TRATAMIEN
TO DE XDR
TB

COSTO POR TRATAMIENTO

MENSUAL: 3 882
TRATAMIENTO SUGERIDO POR 38
MESES: 147 516 (S/.590 064)
PRECIO SIN COSTO DE HOSPITALIZACIN U OTROS
ADICIONALES

10 000 MUESTRAS AL AO (MDR

Y XDR)
PROPUESTA JIWOONG:

TAMIZADO INICIAL:
PCR MTB y otros (10
DLARES)

TRATAMIENTO ACTUAL:

BACILOSCOPA (4 DLARES)

TRANSPORTE:
5 DLARES

TAMIZADO INICIAL:
MDR TB GENOTYPE:
35 DLARES

GASTOS EXTRAS:

ANYPLEX II MTB/MDR/XDR:

KIT DE EXTRACCIN

3 MQUINAS (MS ESPACIO)

100 DOLARES

KIT XDR TB (40 45 DLARES)

TRANSPORTE

TOTAL: 115 DLARES

TRABAJADORES (2 o 3 TRABAJADORES)

COSTO DE IMPLEMENTACIN

TIEMPO: 2 DAS

TIEMPO (3 DAS)

PCR vs BACILOSCOPA
PCR en Tiempo Real

Baciloscopa

Basada en la amplificacin
de secciones especficas de
una regin del ADN que
permite saber si es TB
positivo
pulmonar
o
atpico.

Es una tcnica de tincin que

permite visualizar de manera
rpida si el paciente tiene TB.

Alta especificidad (98%).

Baja especificidad (70%).

*30% falsos negativos que van
a recibir un tratamiento de
S/.1500.

SEEGENE vs HAIN
ANYPLEX II TBC/MDR/XDR

GENOTYPE

Basada en la novedosa tcnica

TOCE que es un PCR multiplex en
tiempo
real
basado
en
temperaturas de melting.
En un solo procedimiento y con un
kit
podremos
saber
si
el
paciente es TB sensible, MDR
TB o XDR TB.
COSTO: 100 DLARES (INCLUYE KIT
DE EXTRACCIN).
TIEMPO: 8 horas.

Su tcnica est basada en la

hibridizacin, la cual est dejando
de ser utilizada debido a su baja
especificidad y alta cantidad de
falsos positivos.
Se requieren 3 KITS, uno de
extraccin, uno de MDR y otro de
XDR.
COSTO:
APROXIMADO
DE
86
DLARES

PARA PROCESAR 5000 MUESTRAS AL

AO:
ACTUALMENTE SE GASTARA:

COSTO
BACILOSCOPA
KIT MDR TB GENOTYPE
KIT XDR TB GENOTYPE
PERSONAL (APROXIMADAMENTE 3)
KIT DE EXTRACCIN (POR PACIENTE)

4 DLARES
35 DLARES
40 45 DLARES
3000 SOLES C/U
11 DLARES

POR PACIENTE SE GASTARA UN APROXIMADO DE:

S/.306, 60 + transporte + Construccin del laboratorio nivel 3 +
Mquinas + 3 veces ms en tiempo para otorgar el resultado

TECNOLOG
A SEEGENE

DPO
TOCE

Ensayo MLTIPLEX
Resultados

mltiples

simultneos.
Una

sola muestra y el mismo

proceso para los anlisis.

Dos

o ms targets o mutaciones
en los genes.

Ensayo MLTIPLEX

Deteccin e identificacin de agentes

infecciosos (Paneles de patgenos).

Identificacin
de
desrdenes
genticos (Paneles de targets para
mutaciones).

Permite la eleccin de la droga y la

dosis
(Paneles
de
farmacogentica).

Nos ayuda a la evaluacin del

progreso de la enfermedad y el

Cambio del paradigma en el Diagnstico

Molecular con la Estrategia de Seegene
Patgeno
Mutacin
SNP

Bajo costo por prueba

1 plataforma para TODOS los

Nuevo paradigma en
Dx Molecular

Panel Maestro

ensayos de Dx Molecular

Alto Multiplex de PCR en Tiempo Real

DPOTM

TOCETM

mTOCETM

Principales Caractersticas de la Tecnologa

de Seegene

DPOTM
TOCETM
mTOCE

TM

1.

Ms de 50plex en PCR convencional o de punto final.

2.

Se amplifica de manera eficiente y equitativa todos

los targets.

1.

Ms de 20plex en PCR en tiempo real.

2.

Tan sensible como una simple PCR en tiempo real

(Uniplex).

1.

Detecta ms de 20 mutaciones en un PCR en tiempo real.

2.

Lo suficientemente sensible para detectar un target que se

encuentre en menos de ~0,1%.

Evolucin Histrica del Diagnstico Molecular

Patente/
Paper

Tecnologa

Compaa

Homogneos
(Sistema
Cerrado)

Multiplex
(> 10plex)

Cuantificacin
(> 10 analitos)

SNP (> 10
mutaciones
puntuales)

Diagnstico Molecular Ideal para el

futuro
1) Multi

deteccin de targets.

2) Sistema
3) Multi

cerrado: PCR en tiempo real.

cuantificacin.

4) Deteccin

de Mutacin: Resistencia a las Drogas y el Cncer.

er
1er
Desafo

Alta Multiplicidad en el Diagnstico

Molecular
Deteccin de Mltiples Targets

PCR Multiplex

Principales Obstculos en el PCR

Multiplex
1. Uniones

no especficas de primers.

2. Formacin

de dmeros de primers.

3. Disminucin
4. Dificultad

de la sensibilidad.

en la optimizacin.

SUPERADO POR LA TECNOLOGA DPOTM DE SEEGENE

Principio de la Tecnologa DPO

TM

DPO es un nuevo concepto en el diseo de primers que es

estructural y funcionalmente diferente de los primers convencionales
para PCR.

Unin de Polideoxiinosina

ADN molde

DPO (Primer Dual de

Oligonucletidos)

Sitio Target

Principio de la Tecnologa DPOTM

Primer Primer Dual
El brazo 5, que es el ms largo, preferentemente se une
al ADN molde y se inicia la hibridacin estable.

Segundo Primer Dual

El brazo 3, que es el ms corto, se une selectivamente al
sitio objetivo y permite que se produzca la
elongacin.

Aumenta la especificidad para la secuencia de inters

Principio de la Tecnologa DPO

TM

Aunque el largo brazo 5' se una un sitio no objetivo, debido a la

termodinmica, la porcin 3' se resiste a la unin no
especfica bloqueando efectivamente la elongacin.

Debido a las limitaciones termodinmicas, el brazo 3 por s

solo no puede unirse al target a la temperatura de
hibridacin del ensayo.

Eliminacin de primers no especficos

Ventaja de la Tecnologa DPOTM

DPO permite ensayos
multiplex para llevar a cabo
como singleplex

Deteccin de patgenos en
muestras clnicas (carriles 14).

DPO supera la dificultad en

la optimizacin.

3'-Amplificacin rpida
ADNc final (3'-RACE)
Ndufs2.

de
de

1. Primers
convencionales
2. Primers DPOTM

DPO = Amplificacin
Equivalente
Rendimiento equivalente como
singleplex vs multiplex

DPO = Fcil de
Optimizar
Rendimiento equivalente en
todo un rango amplio de

DPO supera obstculos de PCR

Multiplex
PCR Convencional

1.Uniones no especficas
de primers.
2.Formacin de dmeros
de primers.
3.Disminucin de la
sensibilidad.
4.Dificultad en la
optimizacin.
Limitacin en la
Multiplicidad

DPOTM PCR

1.Primer especfico dual.

2.No forma dmeros.
3.Sensible
como
el
singleplex.
4.Tolerante a la variacin
de la temperatura de
hibridacin.
Amplificacin confiable de
Mltiples targets en
Diagnsticos Moleculares

do
2do
Desafo

Alta deteccin de mltiples targets en

PCR en tiempo real.
Mltiples Targets en un solo
canal

Anlisis de la Temperatura
de Melting

Mtodos Actuales de Tm
Sonda Dual Marcada
No
Hibridizad
a
Hibridiza
da

Sonda
TaqMan

No
Hibridiza
da

Sonda Molecular
BeaconNo

No
Hibridizad
a
Hibridiza
da

Hibridiza
da

Variacin de la secuencia en los targets de la sonda resulta en cambios en la Tm Dificultad en la Alta

Multiplexidad

Mtodo Ideal para Tm para un PCR

multiplex en tiempo real
1.
2.
3.
4.

Libertad de variacin de secuencia en el sitio de destino.

Tm Controlado.
Ensayo homogneo (una reaccin / un tubo).
Alta especificidad y reproducibilidad.
Puede alcanzarse por
Tecnologa TOCETM de Seegene

Principio de la Tecnologa TOCETM

Porcin
marcada
ADN
molde

(Molde artificial)

Duplex Catcher es independiente del target

amplicon, conduciendo a una consistente
Tm.

Beneficios de TOCE

Porcin
marcada

TM

ADN
molde

Un Tm pre-determinado (o controlada) permite la deteccin

de mltiples targets en un solo canal

DEMOSTRACI
N
LABORATORIO
YUEN-ROS

PACIENTE N 3

PACIENTE N 3

PACIENTE N 3

PACIENTE N 5

PACIENTE N 5

PACIENTE N 5

CONCLUSIONES
Debido a la clara asociacin entre pobreza y
TB, la disminucin de todas las formas de TB en
el Per, debe ser considerada como un
indicador de la eficacia de las acciones de
lucha contra la pobreza que el estado
peruano se ha propuesto lograr.

CONCLUSIONES
Esta realidad nacional y la propuesta de control
debe ser conocida por la clase poltica del pas y el
pblico en general para que se reconozca la real
dimensin del riesgo diario en el que vive la
poblacin y se tome la decisin poltica para
controlar y erradicar esta enfermedad del pas.