TECNOLOGA DEL ADN

RECOMBINANTE

INTRODUCCIN:
La habilidad para detectar y aislar genes normales y
mutados, su secuencia y la expresin de sus productos
proteicos son de vital importancia y ha tenido un fuerte
impacto en la biologa y la medicina.
Ha hecho posible investigar ms a fondo la estructura y
funcin de los genes, especialmente de los genes
eucariotas que eran inaccesibles por otros mtodos.

IMPORTANCIA BIOMDICA:

La compresin de la tecnologa del ADN recombinante es

importante por varias razones:

1.

ofrece un enfoque racional para comprender las bases moleculares de

ciertos padecimientos

2.

Mediante la tecnologa del ADN recombinante, las protenas humanas

se pueden producir en abundancia para terapias.

3.

4.

Se puede obtener protenas para vacunas y para pruebas de diagnostico

Se puede disear una terapia gnica para la enfermedad de celulas
falciformes, talasemia y otros padecimientos .

LA TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE

CONSTITUYE UNA SUMA DE TCNICAS
SIENDO LAS MS IMPORTANTES:

La rotura especfica del ADN mediante nucleasas de restriccin, facilita el aislamiento

y la manipulacin de los genes individuales.
La secuenciacin rpida de todos los nucletidos de un fragmento purificado de
ADN, que posibilita determinar los lmites de un gen y la secuencia de aminocidos que
codifica.
La hibridacin de los cidos nucleicos que hace posible localizar secuencias
determinadas de ADN o ARN, utilizando la capacidad que tienen estas molculas de
unirse a secuencias complementarias de otros cidos nucleicos.
La clonacin del ADN, mediante la cual se puede conseguir que un fragmento de ADN
se integre en un elemento gnico autorreplicante (plsmido o virus) que habita en una
bacteria, de tal manera que una molcula simple de ADN puede ser producida generando
muchos miles de millones de copias idnticas.
La ingeniera gentica mediante la cual se pueden alterar secuencias de ADN
produciendo versiones.


ENZIMAS DE RESTRICCIN:

Las enzimas de restriccin son capaces de reconocer y cortar

secuencias especificadas de DNA de doble cadena. Estas
enzimas, que pueden aislarse de bacterias, lo cortan en
lugares discretos, definidos por la secuencia de nucletidos,
produciendo fragmentos de ADN de tamao definido.
Por lo tanto un fragmento de DNA puede cortarse con una
enzima de restriccin y despus unirse a otro fragmento con
extremos complementarios empleando la DNA ligasa.
Finalmente las molculas de ADN producidas mediante la
unin de dos o ms fragmentos se denominan molculas de
ADN recombinante.

AMPLIFICACIN DEL ADN A TRAVS DE LA

CLONACIN:

La clonacin molecular permite la produccin de un

gran nmero de molculas de ADN idnticas.
sta tcnica se basa en el hecho de que las molculas
de ADN quimricas pueden construirse en vectores de
clonacin, tpicamente de plsmidos que son molculas
de ADN pequeas y circulares capaces de replicarse de
manera independiente al ADN bacteriano.

1.

2.

3.

4.

De sta manera se puede crear una molcula de ADN

recombinante usando un plsmido. Este proceso consta
de las siguientes etapas:
Se corta el ADN circular del plsmido con enzimas de
restriccin (endonucleasas), para generar extremos
cohesivos.
Se corta el ADN que se quiere multiplicar.
Asegurndose que los extremos del plsmido y los del
ADN al insertar sean complementarios y puedan
unirse.
Se une el gen que se desea introducir (inserto) por
medio de la enzima ADN ligasa y luego se introduce el
plsmido inserto en bacterias.
Se selecciona las bacterias que hayan introducido el
plsmido con la ayuda de antibiticos. Dado que los
plsmidos contienen un gen de resistencia a ellos.

Al exponer a las bacterias a ese antibitico, slo las que hayan

incorporado el plsmido sobrevivirn, mientras que las que no lo
tengan morirn. Esta es una manera relativamente eficaz de obtener
millones de copias del ADN incorporado. Dado que todas las copias
del gen provienen de una sola molcula multiplicada a partir de una
nica bacteria que dio origen a la colonia, esta tcnica lleva el
nombre de clonacin.

LAS TCNICAS DE ELECTROTRANSFERENCIA E HIBRIDACIN

PERMITEN VISUALIZACION DE FRAGMENTOS ESPECFICOS

ELECTROTRANSFERENCIA DE SOUTHERN
(PARA ADN), NORTHERN (PARA ARN) Y
WESTERN (PARA PROTENA).
stos procedimientos son tiles para determinar
cuntas copias de un gen hay en un tejido dado, o si
hay alguna alteracin gruesa en un gen, porque el paso
de electroforesis separa las molculas con base en el
tamao.
stos procedimientos pueden detectar una mutacin
puntual.

REACCIN EN CADENAS DE POLIMERASAS (PCR)

La PCR es un mtodo para amplificar la secuencia

blanco de ADN, proporciona
un medio sensible, selectivo y rpido
de amplificar cualquier secuencia de
ADN deseada.

Nos permite analizar el ADN en una sola clula, folculo piloso o

espermatozoide. La PCR tambin se usa para:

1) detectar agentes infecciosos, en especial virus latentes

2) hacer diagnsticos genticos prenatales

3) detectar polimorfismos allicos;

4) establecer tipos de tejido exactos para transplante;

5) estudiar la evolucin usando ADN de muestras arqueolgicas

6) anlisis de ARN cuantitativos despus de copia de ARN y

cuantificacin de ARNm por medio del llamado mtodo de RT-TCR o
7) efectuar evaluacin de ocupacin de protena-ADN in vivo usando
valoraciones de inmunoprecipitacin de cromatina .

LAS APLICACIONES PRACTICAS

DE LA TECNOLOGIA DEL DNA
RECOMBINANTE VAN EN AUMENTO

Es posible producir protenas para

investigacin y diagnstico
La tecnologia del DNA recombinante
se utiliza en el anlisis molecular de la
enfermedad
El Mapeo gnico localiza genes
especficos para cromosomas distintos

EL MAPEO GNICO

Por tanto, la localizacin de genes puede definir un

mapa del genoma humano. Ya produce informacin
muy til en la definicin de la enfermedad humana.
Tcnicas usadas para lograrlo:
La hibridacin de clulas somticas
La hibridacin in situ

Gracias