INMUNOFENOTIPO HPN

Valoracin de protenas que utilizan GPI para su

anclaje a la membrana citoplasmatica

Dr. Elas Prez Becerra

Citometria de Flujo

Definicin
La

HPN, tambin conocida como Sx. De

Marchiafa-Micheli, es una enfermedad
adquirida y clonal de la clula tronco
hematopoytica con la consiguiente
produccin
de
clulas
sanguneas
defectuosas.

Epidemiologa
La

HPN es una enfermedad poco

frecuente, su tasa anual de incidencia no
esta bien establecida. Se estima que sea
5 a 10 veces menor que la anemia
aplasica.
Afecta a pacientes de ambos sexos y
puede aparecer a cualquier edad, pero se
describe mayor frecuencia en el sexo
femenino.

Cuadro clnico
El

comienzo de la HPN suele ser

insidioso y la evolucin tiende a ser
prolongada y variable.
Generalmente cursa con episodios de
hemlisis intravascular y hemoglobinuria.
Asociados a infecciones, menstruacin,
medicamentos, trasfusiones, ejercicio,
entre otras.

Cuadro clnico
Hemlisis

intravascular crnica sin patron

nocturno definido.
Puede cursar con pancitopenia, carencia
de hierro, trombosis venosa e infecciones
de repeticin.

Defecto molecular
El

clon anomalo de precursores

hematopoyeticos, es hipersensivo a la
lisis por el complemento, surge como
consecuencia de una mutacion somatica
del Gen PIG-A (Fasfatidil Inositos glicn
del grupo A).

Defecto molecular
El

Gen PIG-A es el responsable de la

sintesis de una estructura quimica
llamada Glucofosfatidilinositol (GPI) por
medio del cual se unen un grupo de
protenas a la membrana celular.

Expresin de protenas que utilizan el anclaje

por GPI
Antgeno Funcin

Distribucin celular

CD14

Receptor LPS

CD16

FcRIII

CD24

Monocitos
Neutrofilos

(Polimorfismo GPI)

Clulas B y granulocitos.

CD55 (DAF) Regulacin del comp. Todas las cel. Hematopoyeticas.

CD52 (CAMPATH)

Linfocitos y monocitos.

CD58

Todas las cel. Hematopoyeticas.

Adhesin

CD59 (MIRL) Inhibidor CAM

Todas las cel. Hematopoyeticas.

Expresin de protenas que utilizan el anclaje

por GPI
Antgeno Funcin

Distribucin celular

CD14

Receptor LPS

CD16

FcRIII

CD24

Monocitos
Neutrofilos

(Polimorfismo GPI)

Clulas B y granulocitos.

CD55 (DAF) Regulacin del comp. Todas las cel. Hematopoyeticas.

CD52 (CAMPATH)

Linfocitos y monocitos.

CD58

Todas las cel. Hematopoyeticas.

Adhesin

CD59 (MIRL) Inhibidor CAM

Todas las cel. Hematopoyeticas.

Expresin de protenas que utilizan el anclaje

por GPI
Antgeno Funcin

Distribucin celular

CD14

Receptor LPS

CD16

FcRIII

CD24

Monocitos
Neutrofilos

(Polimorfismo GPI)

Clulas B y granulocitos.

CD55 (DAF) Regulacin del comp. Todas las cel. Hematopoyeticas.

CD52 (CAMPATH)

Linfocitos y monocitos.

CD58

Todas las cel. Hematopoyeticas.

Adhesin

CD59 (MIRL) Inhibidor CAM

Todas las cel. Hematopoyeticas.

CELULAS TRONCO CD34

Fisiopatologa
Lisis intravascular
El

mecanismo de hemlisis parece ser la

activacin incontrolada del complemento
en la superficie de los eritrocitos
anormales por la marcada reduccin o
ausencia de protenas de membrana
reguladoras
de
la
actividad
del
complemento (CD59 y CD55).

Fisiopatologa
Infecciones
Las

infecciones son frecuentes y se

atribuyen a defectos cuantitativos y
cualitativos en los leucocitos (p.ejem. La
disminucion de CD16 trae como resultado
una actividad quimiotactica y fagocitica
pobre).

Fisiopatologa
trombosis

El tromboembolismo venoso es una de las complicaciones ms temidas en la

HPN y junto a los episodios hemorrgicos son responsables de un 50% de la
mortalidad por esta enfermedad. Se presenta entre el 12 y el 40% de los casos.
Representa el mayor factor pronstico negativo; la mayora de las trombosis
intraabdominales principalmente de las venas heptica y mesentric. La
localizacin ms frecuente y grave es la trombosis de la vena heptica o sndrome
de BUDD-CHIARI, el cual se presenta entre el 15 y 30% de los pacientes con
HPN. Frecuentemente ocurre durante una crisis hemoltica, surgiendo que la
activacin del complemento es responsable de ambos. Otras veces es ms
gradual e insidioso.

Se plantean 3 clases de mecanismos:

a) Deterioro de la fibrinlisis,
b) Hiperactividad de las plaquetas y
c) Hipercoagulabilidad.

Diagnostico HPN
Cuadro

clnico. General de orina.

Biometria hemtica. DHL
Haptoglobinas
Hemosiderina en
orina.
Medula sea
Hb. Libre en plasma
Fosfatasa alcalina en los neutrofilos.
Acetilcolinesterasa eritrocitaria.

Diagnostico HPN
Para

un diagnostico de certeza de HPN y la

identificacin del dficit de expresin de GPI, es
necesaria la demostracin del defecto de
expresin
en
al
menos
dos
lneas
hematopoyticas distintas de al menos dos
marcadores (dos protenas asociadas a GPI o
una protena asociada a GPI y FLAER)

CELULAS HPN

INDICACIONES

Aspectos metodolgicos
AcMo.
Flourocromo.
Preparacin de la muestra.
Eventos analizados.
Equipo.

Anlisis en neutrofilos

Tamao de la clona HPN

Tamao de la clona HPN

Panel recomendado para HPN

Diagnostico HPN
Demostrar dos tipos celulares con el defecto

Diagnostico HPN
Demostrar dos tipos celulares con el defecto

Requerimientos
metodolgicos

Tratamiento

El AcMo eculizumab es un anticuerpo humanizado IgG kappa. Este AcMo se

une especficamente y con gran afinidad al componente C5 del
complemento. Esta union previene la generacin del subfragmento C5a y del
complejo de ataque a la membrana (MAC) C5b-9. Cuando se administra por
va intravenosa, la semivida de eliminacin de eculizumab es de 272 82h
(~11 das), permaneciendo fundamentalmente en el espacio vascular. El
estado de equilibrio de las concentraciones plasmticas de eculizumab se
logra ~150 das despus de la primera administracin. La farmacodinamia de
eculizumab se correlaciona directamente con la concentracin plasmtica del
medicamento, y el mantenimiento de concentraciones plasmticas superiores
a 35 g/mL conlleva en la practica al bloqueo completo de la actividad
hemoltica dependiente de la activacin de C5

eculizumab

Monitoreo

Monitorizacin de la eficacia: El descenso rapido de la

cifra de la LDH serica hasta un valor prximo al normal
tiene una gran utilidad para comprobar que eculizumab
esta
bloqueando
la
actividad
hemoltica
del
complemento. Para ver la capacidad de respuesta de la
medula osea es muy util monitorizar el recuento de
reticulocitos. Los casos tratados con eculizumab que
muestran una escasa elevacion de la cifra de Hb y
tienen un recuento de reticulocitos bajo pueden traducir
un componente medular hiporegenerativo.

Monitoreo terapia con

aculizumab

GRACIAS