UNIVERSIDAD TCNICA DE

MANAB
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA
SALUD
ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO

CATEDRA DE BIOLOGIA CELULAR Y

MOLECULAR II
DOCENTE:
Dra.: Mayra Parraga
SEGUNDO NIVEL
Octubre2015/Febrero 2016

VIRUS ARN Y
TRANSCRIPCION INVERSA.
Integrante
1. Carrillo Quijije Mara.
s:

2. Quijije Quijije Cindy.

3. Daz Zambrano Janine.
4. Rivadeneira Gregory.
5. Ureta Panchana Jess.
6. Daza Giler Francisco Javier.
7. Zambrano Zambrano Vernica.
8. Carranza Macas Tatiana.

Cdigo gentico

ADN

ARN

Genomas

Replicacin
Virus
Retrovirus
Clulas eucariticas
Endonucleasa

Genes
Molcula
Fragmento
Vector

El poliovirus:
es un virus perteneciente al genero enterovirus. Es el
agente causante de la poliomielitis en humanos.

Transcriptasa inversa.
Es una enzima que utilizan ciertos virus ( retrovirus)
para duplicarse. Permite la transcripcin de la molcula
de ARN del virus en la molcula de ADN.

Endonucleasas de restriccin .
Son enzimas que cortan los enlaces fosfodiester el
material gentico a partir e una secuencia que
reconocen.

ADN ligasa.
La protena ADN ligasa designa una protena cuya funcin
es reparar las hebras de ADN mediante la creacin de
enlaces covalentes (enlaces entre dos tomos).

Electroforesis.
Es una tcnica para la separacin de molculas segn la
movilidad de stas en un campo elctrico.

EcoRI.
Es una enzima de restriccin producida por el
microorganismo Escherichia coli que posee una
diana de restriccin en el ADN de cadena doble
dependiente de una secuencia metilada

N
R
A
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De acuerdo con el dogma

central, el material gentico
es el ADN, que es capaz de
autorreplicarse adems de
transcribirse a ARNm, que
sirve a su vez de molde para
la sntesis protenica.

Sin embargo muchos virus

contienen ARN en vez de ADN
como material gentico, lo
cual implica la existencia de
otros modos de transferencia
de informacin.

aos 50 se obtuvo evidencia

directa de que el ARN acta
como material gentico por
medio de experimentos que
han demostraron que el ARN
purificado del virus del
mosaico del tabaco poda
infectar nuevas clulas, dando
lugar a una progenie de virus
infectivos.

Los genomas de ARN fueron

descubiertos en virus
vegetales, muchos de los
cuales se componen
nicamente de ARN y
protenas

modo de replicacin de la
mayora de los genomas
virales ARN se determin
posteriormente en estudios
de los bacterifagos ARN de
E. coli. Estos virus codifican
una enzima especfica que
cataliza la sntesis de ARN a
partir de un molde de ARN
utilizando el mismo
mecanismo de apareamiento
entre hebras
complementarias que se da
durante la replicacin del
ADN o durante la
transcripcin de ARN a partir
de ADN.

Aunque la mayora de los

virus animales, como el
poliovirus o el virus
influenza, se observ que
se replicaban por sntesis
de ARN dirigida por ARN,
este mecanismo no
pareca explicar la
replicacin de una familia
de virus animales que
eran de especial inters
debido a su capacidad de
causar cncer en animales
infectados.

Pese a que estos virus contienen ARN

genmico en las partculas virales, los
experimentos llevados a cabo por
Howard Temin en los aos 60 indicaron
que se requera sntesis de ADN en las
clulas infectadas para completar su
ciclo vital. Llevando a la hiptesis de que
los virus tumorales de ARN (denominados
actualmente retavirus) se replicaban por
medio de la sntesis de un ADN
intermediario llamado provirus de ADN.

Esta hiptesis fue recibida inicialmente con

desconfianza generalizada dado que implica la
sntesis de ADN dirigida por ARN

Sin embargo, en
1970
HOWAR
D TENIN

DAVID
BALDIMO
RE

Descubrieron de forma independiente

que el ARN de los virus tumorales
contenan una enzima que cataliza la
sntesis de ADN desde un molde de
ARN.

La sntesis de ADN a partir de ARN

Ahora
denominada

TRANSCRIPCION
INVERSA

Establecid
a como:
Un nuevo modo de
transferencia de informacin
en sistemas biolgicos.

La transcripcin inversa es importante

no solo en la replicacin de los retrovirus
sino tambin en al menos otros dos
aspectos de la biologa molecular y
celular.
La transcripcin
inversa no es
exclusiva de los
retrovirus; ocurre
tambin en las
clulas:
- Es crucial para
replicar los extremos
de los cromosomas
eucariotas.
- La transcripcin
inversa es a menudo
la responsable de la
transposicin de
secuencias de ADN de
un lugar u otro

Las enzimas que

catalizan la sntesis
de ADN dirigida por
ARN( TRANSCRIPTA
SAS INVERSAS) se
utilizan
experimentalmente
para generar copias
de ADN a partir de
una molcula de
ARN.

El uso de la transcriptasa inversa ha

permitido el estudio de ARNm de las
clulas eucariotas por medio de los
mtodos moleculares de
manipulacin del ADN utilizados
actualmente.

ADN RECOMBINANTE
Los experimentos clsicos en biologa molecular fueron
llamativamente exitosos en el desarrollo de los conceptos
fundamentales sobre la naturaleza y expresin de los genes.
Estos estudios se basaron en el anlisis gentico
Eleccin como modelos de organismos simples y de
rpida replicacin (como las bacterias y los virus).

Sin embargo, no estaba claro cmo se podran generalizar estos

principios fundamentales para proporcionar un entendimiento
molecular de la complejidad de las clulas eucariotas.
Los genomas de la mayora de los eucariotas (p. ej., el
genoma humano) son hasta mil veces ms complejos que el
de E. coli.
A principio de los aos 70 .
Desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante, que
proporcion a los cientficos la posibilidad de aislar,
secuenciar y manipular genes individuales derivados de
cualquier tipo celular.
El estudio molecular detallado de la estructura y funcin de
los genes eucariticos, revolucionando nuestro entendimiento
de la biologa celular.

Endonucleasas de restriccin
El primer paso en el desarrollo d la
tecnologa del ADN recombinante fue la
caracterizacin de las endonucleasas de
restriccin estas son enzimas que cortan el
ADN en lugares concretos y especficos de
su secuencia-. Fueron identificadas en
bacterias, donde aparentemente cumplen
una funcin defensiva frente a la entrada
en la clula de ADN extrao.
Las bacterias posee una amplia variedad
de endonucleasas de restriccin que cortan
el ADN en mas de un centenar de sitios de
reconocimiento, cada uno de los cuales
consiste en una secuencia especifica de
entre cuatro y ocho pares de bases
Dado que la endonucleasa de restriccin
digieren el ADN a nivel de secuencias
especificas pueden ser utilizadas para
cortar una molcula de ADN en sitios
nicos. Por ejemplo, las endonucleasa de
restriccin EcoRI reconoce las secuencia de
seis pares de bases GAATTC.

Dado que la endonucleasa de restriccin digieren el ADN a

nivel de secuencias especificas pueden ser utilizadas para
cortar una molcula de ADN en sitios nicos. Por ejemplo, las
endonucleasa de restriccin EcoRI reconoce las secuencia de
seis pares de bases GAATTC.

Esta secuencia esta

presente cinco veces en el
ADN del bacterofago, por lo
que la enzima EcoRI dirige
el ADN del fago en seis
fragmentos de entre 3,6 y
21,2 kilobases de longitud.
Estos fragmentos pueden
separarse segn su tamao
por medio de electroforesis
en gen

El orden de los fragmentos de restriccin se puede

determinar por una serie de mtodos .
Se pueden utilizar los sitios de corte de varias endonucleasas
de restriccin para generar mapas de restriccin detallados
de la molculas del ADN

Es posible aislar con

electroforesis fragmentos
individuales del ADN
producidos por la digestin
con endonucleasas de
restriccin para su estudio
posterior .
La digestin de las
endonucleasas de restriccin
por si proporciona suficiente
resolucin para anlisis de
las molculas de ADN
mayores como genomas
celulares.

Una endonucleasa de restriccin con una secuencia de

reconocimiento de seis pare de bases como la ecoRI corta el
ADN con una frecuencia estadstica de un corte cada 4.096

GENERACION DE
MOLECULAS DE
ADN
RECOMBINANTE

ESTRATEGIA BSICA EN
CLONACIN MOLECULAR
La estrategia bsica en la
clonacin molecular es insertar
un fragmento de ADN de inters
en una molcula (vector) que es
capas de replicarse de forma
independiente en una clula
husped.

MOLECULA RECOMBNANTE O CLON

MOLECULAR

ESTAN COMPUESTOS DE LAS SECUENCIAS DEL ADN

INSERTADO Y DEL VECTOR. SE PUEDEN OBTENER
GRANDES CANTIDADES DE ADN INSERTADO SI SE
PERMITE REPLICARSE A LA MOLECULA RECOMBINANTE
EN UN HUESPED APROPIADO.
POR EJEMPLO:

SE PUEDEN CLONAR FRAGMENTOS DE ADN HUMANO

PUEDEN SER
CLONADO EN VECTORES PLASMIDICOS .

LOS PLASMIDICOS
LOS PLASMIDOS
RECOMBINANTES

LOS PLASMIDOS

SON
PEQUEAS
MOLECULAS
CIRCULARES
DE ADN. (INDEPENDIENTES
DEL ADN CROMOSOMICO)

QUE PORTAN INSERTOS DE

ADN HUMANO PUEDEN SER
INTRODUCIDOS EN E. COLI,
DONDE REPLICAN JUNTO
CON LAS BACTERIAS PARA
DAR LUGAR A MILLONES DE
COPIAS DEL ADN
PLASMIDICO.

 EL ADN DE ESTOS PLASMIDOS PUEDE AISLARSE,

OBTENIENDOSE GRANDES CANTIDADES DE MOLECULAS
RECOMBINANTES QUE CONTIENE UN FRAGMENTO UNICO
DE ADN HUMANO. MIENTRAS QUE UN FRAGMENTOS
TIPICO DE ADN DE UNA LONGITUD DE 1 Kb
REPRESENTARIA MENOS DE UNA PARTE EN UN MILLON DE
ADN
GENOMICO
HUMANO,
REPRESENTARIA
APROXIMANDAMENTE UNA PARTE EN CINCO DESPUES DE
SER CLONADO EN UN VECTOR PLASMIDICO.

Los fragmentos de ADN que pueden ser

clonados no se limitan a aquellos que terminan
en sitios de cortes de enzimas de restriccin.
Es posible aadir a los extremos de cualquier
fragmento de ADN , permitiendo que
prcticamente cualquier fragmento de ADN sea
ligado a un vector y aislado como un clon
molecular.
Adems el ADN, es posible clonar tambin
secuencias de ARN. En el primer paso es
sintetizar una copia de ADN a partir del ARN
por medio de la transcriptasa inversa. El ADN
producido se liga al vector del SDN del modo
antes descrito

Dado que los genes eucarioticos estn

habitualmente interrumpidos por secuencias
no codificadas o intrones , que se eliminan del
ARNm por corte y empalmado o splicing, la
posibilidad de clonar ADNc adems de ADN
genmico ha sido critica para el
entendimiento de la estructura y funcin de
los genes. Adems la clonacin del ADNc
permite que el ARNm correspondiente a un
solo gen sea aislado como un gen molecular