Cours

d'Hmato-cytologie
DUT ABB
4- automatisation de l'Hmogramme

Auteur : Bruno Flamand,

IUT de Dijon

CYTOLOGIE HEMATOLOGIQUE
LHEMOGRAMME englobe:
-les numrations des lments figurs
-le dosage de lHmoglobine
-la mesure de lHmatocrite
-le calculs des constantes rythrocytaires et
plaquettaires
-ltablissement de la formule leucocytaire
Prlvement: sang veineux sur EDTA (ou citrate de Na),
ventuellement sang capillaire
LHmogramme est automatis compltement ou
partiellement dans les laboratoires

Numrations: GR, GB, Plaquettes.

Valeurs et constantes:
-rythrocytaires:
-Taux Hmoglobine sanguin Hb
-Hmatocrite Ht
-Volume Globulaire Moyen VGM
-Concentration Corpusculaire Moyenne en Hb CCMH
-Taux Corpusculaire Moyen en Hb TCMH
-Indice de Distribution des Rouges IDR
-plaquettaires:
-Thrombocrite THT
-Volume Plaquettaire Moyen VPM
Indice de Distribution Plaquettaire IDP

Formule leucocytaire: rpartition des diffrentes sous-populations de

leucocytes: PN, PE,PB,L,M
-FL manuelle par lecture microscopique de frottis color au MGG (100
200 leucocytes rpertoris), si anomalie de FL automatise
-FL automatise (5000 10000 leucocytes rpertoris)
Les rsultats sont rendus en valeur relative % et en valeur absolue par
mm3, mais linterprtation nest valable que sur les valeurs absolues

LHmogramme: NFS Numration Formule (leucocytaire) Sanguine

GR, Hb, Hte,VGM,TCMH,IDR: orientation du diagnostic des anmies

Plaquettes: diagnostic des pb dhmostase primaire
GB, FL: diagnostic des pb infectieux, inflammatoires, leucmiques

Anciennes units

Facteur x
106

Units
internationales

Globules rouges

106 par mm3

Hmoglobine

g/100 ml

Hmatocrite

% ou dl/dl

VGM

TCMH

pg

0,062

fmol (femto,10-15)

CCMH

% ou g/100ml

0,062

mmol/L

Globules blancs

103 par mm3

106

G/L (giga, 109)

Plaquettes

103 par mm3

106

G/L (giga, 109)

0,621
0,01

T/L (tra, 1012)

mmol/L
L/L
F/L (femto,10-15)

GR
Hmatocrite
Hmoglobine

Homme 4,5 6 .106 /mm3

Femme 3,8 5,5 .106 /mm3
Homme 40 54 %
Femme 37 47 %
Homme 13 17 g/100ml

VGM

Femme 12 16 g/100ml
82 98 fl

CCMH

32 36 %

TCMH

> 27 pg

IDR

<15 %

Plaquettes

150 000 450 000 /mm3

GB

5000 10 000 /mm3

Granulocyte neutrophile

1500 7000 /mm3

Granulocyte osinophile

0 400 /mm3

Granulocyte basophile

0 100 /mm3

Lymphocyte

1500 4000 /mm3

Monocyte

200 800 /mm3

Dfaut

Paramtres

Excs

Erythropnie

GR

Polyglobulie

Hemodilution

Hmatocrite

Hemoconcentration

Anmie

Hmoglobine

Microcytose

VGM (Normocytose)

Hypochromie

CCMH*

Hypochromie

TCMH (Normochromie)

Macrocytose

IDR

Anisocytose

Thrombopnie

Plaquettes

HyperThrombocytose

Leucopnie

GB

Hyperleucocytose

Neutropnie

Granulocyte neutrophile
Granulocyte osinophile

Polynuclose
neutrophile
Hyperosinophilie

Granulocyte basophile

Basocytose

Lymphopnie

Lymphocyte

Hyperlymphocytose

Monocytopnie

Monocyte

Monocytose

*La CCMH est considre comme un indice moins sensible de lhypochromie que la TCMH dans les anmies, en effet
la TCMH diminue avant la CCMH dans linstallation dun cas danmie

Automatisation de l'hmogramme
La chronologie par tapes

Semi Auto Automates

GB Plt
VGM
GR Hb
Hte
1954

Numration

Formule 3 pop.

7 par. 8 par.
- Plt (+ Plt)
1972

Formule 5 populations

18 par. 22 par.
(NFS)
(HD)
1980

1990

+
Rtic.
1994

+
Etaleur/Colorateur

2000

Pentra 60 Horiba-ABX

Pentra 120 Retic Horiba-ABX

Sysmex
XT
ACT 5DIFF
Beckman
Coulter

CELL-DYN 3700
Abbot Laboratories

CELL-DYN SMS
Abbot Laboratories

Coulter HMX
Beckman Coulter

LH 1500 Series Automation Beckman Coulter

CELL-DYN WorkCell Abbott Laboratories

LA NUMERATION DES TROIS LIGNEES GR, GB, PLT

Deux principes trs diffrents:
La Variation dimpdance
Principe Coulter du nom des inventeurs (Wallace and Joe
Coulter- 1953), Mthode de rfrence, la plus rpandue.
Utilise pour les numrations, et la formule leucocytaire
approche.
La mesure optique
Associe les principes de bases de la Cytomtrie en Flux (1977):
-focalisation hydrodynamique
-diffraction lumineuse recueillie diffrents angles /incidence
Utilise surtout pour la numration des GB associe la FL,
cependant quelques automates utilisent la mesure optique pour
les numrations des 3 lignes GR, GB, PLT (Bayer automate
ADVIA 120, Sysmex automate XT2000)

La variation d'impdance
Principe Coulter
I= constante

Electrode
Electrodeinterne
interne

U= R I et R = l / s
: rsistivit et l: largeur

Vide
Vidergul
rgul
Bac de
comptage

Electrode
Electrode
externe
externe

Saphir perc
dun microorifice

1 impulsion U
= 1 particule

Flux
Fluxde
dediluant
diluantconducteur
conducteur

Micro-orifice,
surface s
Diamtre 4mm

Impulsion

Temps

La valeur de limpulsion de tension U

est proportionnelle au volume cellulaire

Construction des histogrammes de distribution volumtrique:

1-amplification des impulsions (V en mV)
2-tri des impulsions selon des seuils lectroniques
3-Rpartition des impulsions dans des canaux lectroniques (256 ou 128)
en fonction du niveau dimpulsion donc du volume cellulaire
4-comptage des impulsions dans un intervalle de volume cellulaire
U = f(volume cellulaire)

Seuil

Histogramme de distribution volumtrique

Numration des Globules Rouges et des Plaquettes

Bac de comptage des GR/PLT

Comptage et mesure du volume partir d'une suspension cellulaire dilue

en solution isotonique: taux de dilution lev (1/10 000 1/20 000 ), ce qui
permet de rendre ngligeable une interfrence des GB

Un seul bac de comptage:

Toute particule d'un volume suprieur 25 fl (et infrieur 250 fl) est
compte comme un GR
Toute particule dun volume suprieur 2 fl (et infrieur 25 fl) est
compte comme une PLT
Chaque particule est place dans un histogramme de distribution
volumtrique

Numration des Globules Rouges

Histogramme des GR

VGM

Mise en vidence de fragments de

cytoplasme ou de grandes
plaquettes par l'analyse de
l'histogramme partir de 24 fl.

La traine peut correspondre aux :

Passages en concidence
Agrgats cellulaires
Cellules ages
Globules blancs

Numration des Globules Rouges

Les paramtres calculs

L'IDR ou RDW (Red Cell Distribution Width)

L'IDR est une valeur statistique correspondant au CV % calcul sur la
distribution des rouges = coefficient d'anisocytose.

Double
population

50

100

200

IDC Normal< 15%

50

100

200

IDC Elev 18 %

50

100

200

IDC trs Elev 35 %

Ht = Hmatocrite

TCMH = Teneur cellulaire moyenne en hmoglogine.

TCMH en pg = (Hb g/100 ml / Nb GR) x 10

CCMH = Concentration cellulaire moyenne en hmoglobine.

CCMH en % = (Hb en g/100 ml / Nb GR 10 6/mm3 x VGM) x 1000

Ht = (GR 10 6/mm3 x VGM fl ) / 10

Numration des Plaquettes

Histogramme des PLT et paramtres calculs

VMP

Grandes Plaquettes > 20 fl

Petites plaquettes, dbris ? < 2 fl

Le Thrombocrite
TCT ou THT %= (VMP fl x Nb de
Plaquettes 10 3/mm3 ) x 1000
L'IDP ou PDW
Indice de distribution plaquettaire CV
% sur la distribution volumtrique
des PLT= coefficient danisocytose
plaquettaire

Numration PLT
Existent des seuils variables
permettant limination risques dinterfrences et
numrations justes

Dbris
Shizocytes

GR
microcytaires

Petites plaquettes Grandes plaquettes

Numration des globules blancs

Bac de comptage des GB

Comptage partir d'une suspension cellulaire dilue en liquide

hmolytique: taux de dilution faible, (1/200 1/300)
Un bac de comptage rserv
Toute particule d'un volume suprieur 35 fl est compte comme un
globule blanc.

Les globules rouges sont lyss (ammonium quaternaire, ferri

cyanure, cyanure de K+), permet la libration de Hb
CyanMetHb
Une partie de la dilution des leucocytes passe dans une cuve
spectrophotomtrique pour la mesure 540 nm
Source lumineuse LED

Cuve de
mesure

Photo-dtecteur

Filtre

Correction de passage en concidence

Doublet ou triplet cellulaires

Le rsultat de numration est assujeti

une correction dite "correction de
concidence".
Occasionnellement deux ou trois
cellules peuvent traverser l'orifice de
comptage en mme temps.

Temps

Une impulsion de grande amplitude est

gnre.

La frquence de ces passages en

concidence est statistiquement
prvisible en fonction du nombre de
cellules. Cette correction est ralise
automatiquement par les analyseurs.

LA FORMULE LEUCOCYTAIRE automatise

TROIS POPULATIONS ou CINQ POPULATIONS (5 Diff)
La formule leucocytaire 3 populations ou formule approche, (GRA /
Lympho / Mono): pour la majorit des automates, elle est ralise par
analyse par variation dimpdance des volumes cellulaires des globules
blancs, aprs lyse des GR, et action diffrentielle dune lyse mnage
sur les GB, lyse qui modifie leur volume.
Cette FL approche na pas de valeur lgale, et trs peu de valeur
fonctionnelle, un automate de ce type dcharge lautomate principal du
passage de sangs de patients sans anomalie
La FL complte ou 5 populations, permet en associant plusieurs
principes technologiques, lanalyse des GN, GE, GB, M, L, et le
reprage facilit de populations anormales du sang (lymphocytes
atypiques, cellules immatures prcurseurs, rythroblastes)

Il est des circonstances o il faut effectuer obligatoirement une formule

au microscope, et ne pas se contenter de la formule de lautomate:
FL du nouveau-n
Premier examen dun malade avec nettes anomalies de numration
Variations brutales et inexpliques par rapports aux NF antrieures
Incohrence avec le contexte clinique ou thrapeutique
Alarmes de lautomate pour lesquelles il ny a pas dexplication vidente
au vu du dossier et/ou des examens antrieurs
Alarmes de lautomate pour distribution cellulaires inhabituelles sur les
graphes

Formule 3 populations
Rle de la lyse diffrentielle (Cytolyse mnage)

La membrane devient semipermable

Le contenu cytoplasmique est
libr
La membrane cytoplasmique
se rtracte autour du noyau et
des granulations
Le volume final dpend de la
taille du noyau, de sa
lobularit et des granulations.

Histogramme diffrentiel volumtrique de GB

Dtermination de 3 sous-populations
Reconnaissance des cellules d'aprs le volume rsultant, par variation
dimpdance
3 sous populations : Lymphocytes, Monocytes, Granulocytes.
Les anomalies de distribution sont signales par des alarmes.

Lymphocyte, 30 100 fl
Alarme L1:
agrgats PLT,
Erythroblastes

Mono 100 160 fl

Alarme M2, G1: Prcurseurs

Granulocytes, Eosinophilie

Granuleux, 160 450 fl

Formule Leucocytaire 5 populations

Analyse automatise individuelle des caractristiques cellulaires
naturelles ou modifies dun seul leucocyte PERFORMANCE
Analyse sur un nombre lev de leucocytes (5000 10000):
PRECISION de la FL automatise par rapport FL microscopique
Circulation des GB , aprs hmolyse des GR, individuellement, spars,
dans un systme liquide de flux laminaire: Focalisation Hydrodynamique
ou gainage cellulaire, principe de base de la technologie de CytoMtrie en
Flux (CMF)
Apparition successive des GB indivualiss dans un ensemble de mesure,
permettant une analyse optique simultane de plusieurs paramtres
naturels (volume cellulaire, prsence de granulation, htrognit du
noyau) ou modifis (coloration, fluorescence) de la cellule.
(CFM = FACS Fluorescence Activated Cell Sorter )

Hydrofocalisation
Flux
de
gainage

Flux chantillon

FOCALISATION
FOCALISATION
HYDRODYNAMIQUE
HYDRODYNAMIQUE

Flux
de
gainage

Flux
de
gainage

Flux
chantillon

- Suspension cellulaire expose une surpression (1 bar) injecte au centre d'une veine
liquide d'entranement (liquide de gainage) circulant une vitesse diffrente
- Sortie de la suspension cellulaire par un rtrcissement d'un micro-orifice 50 m 300
m
- Absence de mlange "Suspension cellulaire/ liquide de gainage" car densit du liquide
de gainage > densit du liquide suspension cellulaire
- Ecoulement laminaire des cellules: 500 5000 cellules/sec, 25 36 km/H, sparation
1mm, orientation des cellules selon leur plus grand axe dans le flux, et dformation
cellulaire uniforme en fonction de la cellule

La mesure optique
Diluant

Diluant

SOURCE

Cellule
photolectrique

Diluant

Diluant
Echantillon

Diffraction lumineuse
La cellule passe individuellement devant un faisceau lumineux conventionnel (lampe halogne
vapeur de Hg ou de Xe) ou LASER (Argon, Kryton-Argon, Helium-Neon)

Diffraction lumineuse
Intensit de la lumire diffracte peut tre corrle des
caractristiques morphologiques cellulaires:
- Intensit de la lumire diffracte par la cellule, recueillie dans l'axe de la lumire
incidente, dite "diffraction aux petits angles" (2 6), (FALS Forward Angle Light Scatter,
ou FSC Forward Scatter Channel), est en relation proportionnelle avec la taille cellulaire ,
la forme cellulaire, et lindice de rfraction cellulaire
- Intensit de la lumire diffracte par la cellule, recueillie de 8 90 de l'axe de la
lumire incidente, "diffraction aux grands angles", (RALS Right Angle Light Scatter, ou
SSC Side Scatter Channel), est relation proportionnelle avec l'htrognit du contenu
cellulaire, prsence/absence et taille de granulation cytoplasmique, forme et taille du
noyau, rapport N/C, densit chromatinienne du noyau, ce Paramtre est appel
Granularit

Dtection aux petits angles :

Taille

Dtection aux grands angles: Granularit

Formule 5 Populations : critres de reconnaissance

Les automates associent divers principes technologiques permettant
laccs divers critres de reconnaissance
Variation Impdance (= Volume cellulaire)
Principe Coulter pour le volume, ou mesure optique pour la taille
Diffraction lumineuse (= taille cellulaire et Granularit)
Diffraction de la lumire par la cellule (diffrents angles)
Cytochimie slective
Coloration dun lment de la cellule, par simple affinit
(ex:coloration des granulations osinophiles) ou par activit
enzymatique chromogne slective (ex: peroxydase des
granulations)
Conductivit (opacit) Courant Radio Haute Frquence (RF)
Structure de la cellule par un conduction courant haute frquence
Cytolyse
Lyse slective de populations. Ex: tous les GB sauf PB.
(videmment dans tous les cas de FL complte automatise, la
lyse de GR est obligatoire

Dtermination de la formule 5 populations

Chaque socit sur ses automates combine plusieurs technologies et
donc plusieurs critres de reconnaissance
Impdance + Conductivit HF + Diffraction lumineuse
BeckmanCoulter Automates MAXM, HmX, GenS, LH500, LH750
Impdance + Cytolyse + Cytochimie (Actvit peroxydasique)
BayerDiagnostics Automates Advia120, Technicon H2, H3
Impdance + Cytolyse + Cytochimie (Coloration des granulationsEo.)
HoribaAbx Automates Pentra60, Pentra80, Pentra120
BayerDiagnostics Automates Advia70
BeckmanCoulter Automates ACT 5Diff
Diffraction lumineuse + Cytochimie (Eosino) + Cytolyse
Sysmex SF3000, XE2100
Diffraction lumineuse multi-angulaire sans cytolyse
AbbottDiagnostics Automates CELL-DYN 3200, 3700, 4000

Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie

Matrice
LMNE

Absorptio
n
lumineus
e

Volume
Saphir

Traitement des cellules

coloration des granulations
Eosinophiles (noir chlorazol)

Lampe
tungstne

Liquide
de
gainag
Double e
Focalisation
hydrodynamique

Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie
MATRICE LMNE

Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie
Histogramme volumtrique Basophiles
Saphir

Mesure du
Volume par
variation
dimpdance

Traitement des
cellules :
Lyse de tous
les blancs sauf
des Basophiles

Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie
Absorbance

Matrice LMNE
Eo

.
. .
. .
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.. . . .
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..
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Bruit
de
fond

Ne

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Nombre

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Ly

LyA

GCI

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GCI
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Mo+Ba

Volume

Basophiles
Noyaux
GB
Volume

Histogramme Basophiles

Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie

Exemple dhmogramme complet sur Pentra Horiba ABX

Beckman Coulter
Impdance/ConductivitHF/Diffraction
Mesures
optiques

V
o
l
u
m
e

Saphir: Mesure
dimpdance
Conductivit
noyau
Diffraction : Surface,granulations

Diffraction lumineuse
Rotated Light Scatter angle
10 70 =(Granularit)

Mesure
Volume
Mesure
Conductivit
courant radio
haute frquence

Beckman Coulter
Impdance/Conductivit/Diffraction
PE

M
GRA

Diffraction

PN
Conductivit

PB

Soustraction des
coordonnes
Diffraction des
PN, PE, du nuage
GRA, pour
rvler PB

Beckman Coulter
Impdance/ConductivitHF/Diffraction
Analyse en 3D
Volume
Mo

Ne
Eo

Ly
Conductivit

Diffraction

Ba

Exemple dhmogramme complet sur Beckman Coulter HmX

Abbott Diagnostics
Diffraction Laser multi-angulaire
Laser ARGON

Granulations
Eosinophiles

PMT1

90 ,Dpolarise

90, Polarise
PMT2

Conplexit du
cytoplasme
7

Complexit du noyau
Numration
Taille

Abbott Diagnostics
Diffraction Laser multi-angulaire
Angles de diffraction et critres de reconnaissance
90Pol/ 90dep

Granulations

Structure
1/3 (0) Taille

10

Faisceau laser
P
o
l
a
r
i
s
a
t
i
o
n

Taille
10 Structure

1/3 (0)

Abbott Diagnostics
Diffraction Laser multi-angulaire
Diffractogrammes
90 Dpolaris

Taille
Ne+Eo
Mo

Ly

Eo

Ba

Ne

Dbris

Structure

90 Polaris

LA NUMERATION AUTOMATISEE DES RETICULOCYTES

Exemple sur automate Pentra 120Rtic Horiba ABX
Marquage fluorescent des ARN rsiduels
Fluorochrome: Thiazole orange
Focalisation dans cellule de
mesure, dune dilution sanguine
1/3000 dans diluant isotonique +
thiazole orange
2 informations recueillies:
-comptage et volume par
impdance (saphir)
-signal dintensit de
fluorescence OFL mise 530
nm, dclench par excitation
transitoire, recueillie 90 du
trajet optique

Matrice Rticulocytes Pentra 120 Horiba ABX

Rticulocytes
fluorescence leve
OFL Intensit
Fluorescence

Rticulocytes
fluorescence moyenne
Rticulocytes
fluorescence faible

GR matures

Volume

Bayer-Technicon
Diffraction/Cytolyse/Cytochimie
Diffraction lumineuse enregistre sous deux angles diffrents
Matric
e
Miroir semiPetit angle
transparent
Lentille
PEROX
2/3
=
Taille
Lentille

Grand angle
5/15
=
Activit
Peroxydasique

Lampe tungstnevapeur Halogne

Miroir semitransparent
Cellule
photolectriqu
e

Traitement des cellules :

substrat chromogne
rvlateur de l'activit
peroxydasique

Bayer-Technicon
Diffraction/Cytolyse/Cytochimie
Petit angle
2/3
=
Taille
Grand angle
5/15
=
Densit
chromatinienn
e

Miroir semitransparent

Diagramme
Basophiles

Lentille

Lentill
e

Miroir
semiCellule
transparen
photolectriqu
t
e

Laser

Traitement des cellules

; Lyse de tous les
G.blancs sauf des
P.basophiles

Bayer-Technicon Diffraction/Cytolyse/Cytochimie
Diagramme Perox et Diagramme Basophiles
Diagramme PEROX Taille Diagramme BASOS

Taille

Neutrophiles

LUC

.
..
.

Mo

.
.

Eosinophiles

Activit peroxydase

.
.
.

. . .
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.. .
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. . .. . . .
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Dbris

BASOS .

Ly

Noyaux
monolob
s

.
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. .
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.
. .
.
. .

.
.

.
. .
. .
.
. .
.
. .

Noyaux
Polylobs

Densit Chromatinienne /Segmentation

Sysmex
Volume/RF/Cytolyse
Diagramme RF/Volume
Courant haute frquence

Impulsion RF

Courant continu

Saphir

Sonde
radiofrquence

Source
frquence
radio

Impulsion
impdance

Condensateur

Traitement des cellules :

Lyse diffrentielle et partielle des
blancs.

Volume/RF/Cytolyses
Histogramme Eosino, et Histogramme Baso
Canal
Eosinophiles

Traitement des
cellules : Lyse
diffrentielle. Elle
lyse tous les blancs
sauf les
Eosinophiles

Canal
Basophiles

Traitement des
cellules : Lyse
diffrentielle. Elle
lyse tous les blancs
sauf les Basophiles

Volume/RF/Cytolyses
Matrice RF/Volume et Histogrammes Eo et Ba
Nb

RF

Eo

Volume
Nb

Mo

Ba

Dbris
Ly

Gr
Volume /DC

Volume

Le marquage dautres types cellulaires

Les Rticulocytes
Marquage fluorescent sur ARNs rsiduels
Laser ARGON

Rticulocytes

PMT1

Filtre FL1 auto commutable

Abbot

PMT2

PMT3

Complexit.
Numration
Taille

Rticulocytes
Fluorescence vs Complexit

Diffraction lumineuse +
Cytolyse
Sysmex

Sysmex
Diffraction lumineuse/Cytolyse
Photo-diode
Grand angle

Diode
Laser
Lyse des hmaties
Coloration des Eo.

Cytomtr
e
Destruction
des Ne et Eo
Ly, Mo, et Ba
intacts

Photo-diode
Petit angle

Diffraction lumineuse/Cytolyse
Enregistrement de deux angles de diffraction
Grands angles =

Densit intracellula

(8-20)
Faisceau laser

Petits angles =

Taille

(1-6)

Petits angles =

Grands angles =

Densit intracellulaire

Taille

Diffraction petits angles

Diffraction lumineuse/Cytolyse
Formule Ly, Mo, Eo, Ne+Ba

Mo

Ne+Ba

Ly
Eo

Dbris

Diffraction grands angles

Diffraction lumineuse/Cytolyse
Diffraction petits angles

Dtermination de la 5 me pop : les Neutrophiles

Ne% = 100 % - Ly% - Mo % - Eo % Ba %
Ba
Mo +
Ly
Ne+Eo
Schizocytes

Diffraction grands angles

Diffraction lumineuse avec ou

sans cytolyse complmentaire
Abbott

Rticulocytes
Nouveau bleu de mthylne

Cytolyse complmentaire
Abbott (CD 3200)

Cytolyse : le NOC
CD 3200

Comptage optique des noyaux nus

Une action plus forte de la lyse provoque la destruction des
membranes et la libration des noyaux.

Diffraction lumineuse +
Marquage
Abbott

Marquage l'iodure de
propidium
Granulations
Eosinophiles
Lobularit

90 Pol.

CD 4000

Laser ARGON

PMT1

90 Dpol.

PMT2

PMT3

Viabilit Blcs
Erythroblastes

Complexit.
Numration
Taille

Analyse de la fluorescence
Lkc Marquage des noyaux accessibles
viables
Les noyaux nus
des cellules
Lkc non
lyses et les
viables
noyaux des
cellules mortes
sont marqus
Noyaux nus
par l'iodure de
propidium

LE MARQUAGE D'AUTRES
TYPES CELLULAIRES
RETICULOCYTES
CD4/CD8

Lymphocytes T4/T8
Marquage des sites CD4/CD8 par cytosphres (Ag-Ac)