UNIVERSIDADE DO OESTE DE SANTA CATARINA

CAMPUS DE SO MIGUEL DO OESTE

DISCIPLINA DE BIOQUMICA CLNICA I

ELETROFORESE DE
PROTENAS
ACADMICAS: ALINE FELTZ; CARLISE BRUN; CLAUDIA DOS SANTOS;
JULIANA PAINI; JHENIFFER SEVERICO;
MEILLY KLANGENBERG

CONCEITO
Eletroforese: uma tcnica laboratorial usada para separar os
grupos de protenas do soro. Isso possibilita medir e analisar as
protenas individualmente. Para tanto, o soro colocado em um
tipo especial de papel e exposto a uma corrente eltrica. Isso
faz com que os diferentes tipos de protenas se movimentem e
se agrupem. As protenas criam faixas separadas no papel e so
analisadas no laboratrio.

Breve Histrico...

Inicialmente proposta por Arne Teselius (1937).

A eletroforese era tcnica empregada para visualizao de protenas com suas

diferenas de comprimento de fragmentos de aminocidos e cargas eltricas.

Atualmente, o uso desta tcnica comum tambm para estudos com cidos nuclicos
(Brown 1998; Farah 2000), na visualizao de material gentico (cido
desoxirribonucleico e ribonucleico, DNA e RNA).

ARNE TISELIUS
PREMIO NOBEL
DE QUIMICA 1948

POTENCIAL DE USO

Identificao de fungos, bactrias, nematoides, vrus, virides;

Caracterizao de fitopatgenos;

Estudos de gentica e evoluo de fungos fitopatognicos;

Identificao de clones, cultivares e linhagens;

Estudos citogenticos, ecolgicos, fisiolgicos e bioqumicos;

Estudos de resistncia doenas;

POTENCIAL DE USO

Estudos da relao patgeno-hospedeiro;

Determinao do peso molecular de protenas;

Caracterizao de molculas de cidos nuclicos;

DNA recombinante, seqnciamento de nucleotdeos;

Mapeamento de fragmentos de restrio;

Amplificao de DNA.

Princpios da Eletroforese
O princpio da eletroforese utilizada
para separao de DNA, baseia-se na
carga total negativa do DNA (dada
pelos oxignios do grupamento
fosfato). Assim, fragmentos de DNA
obtidos da tcnica de PCR, podem ser
separados pela aplicao de uma
voltagem. Ao final do processo, as
cadeias de DNA estaro prximas ao
plo positivo.

Princpios da Eletroforese

Separar partculas por diferena de carga e massa

Aplicao de corrente eltrica sobre o gel

Isolar fragmentos de DNA, RNA e protenas

Equipamentos

Cuba Eletrofortica

Fonte de eletricidade

Suporte para o gel

Pentes

Pipetas

Equipamentos

Equipamentos

Conceito
Proteinas:so substncias formadas por pequenos compostos
qumicos chamados aminocidos.

As protenas desempenham vrias funes:

fornecem estrutura ao corpo

ajudam a transportar nutrientes

ajudam o corpo a combater doenas

Uma quantidade insuficiente ou excessiva de protenas pode causar

problemas.

Soro
O sangue aparenta ser uma nica substncia a olho nu. Mas, na
verdade, tem vrias partes. Os dois tipos de clulas sanguneas
(vermelhas e brancas) e as plaquetas so slidos. Quando so
removidas, o que resta um lquido.

Grupos de protenas que costumam ser analisadas na EPS so:

Pr albumina

Albumina

Interzona albumina alfa 1

Alfa 1e II globulina

Beta globulina

Gama globulina

PR ALBUMINA

Frao que migra numa posio mais

rpida

Sua diminuio observa se nos

processos inflamatrios

Associada a insuficincia funcional

das clulas hepticas

Possui uma estrutura tetramrica

PM 62000 daltons

Sendo marcador de funo heptica

Umas das menores protenas sricas

Liga se a tiroxina (T4) - transporte

Indicador hepatocelular melhor que a

albumina

Caracteriza se por uma banda fraca

e espalhada

Papel significativo no metabolismo

da vitamina A

20 45 mg/dL

Complexo com a protena de ligao

do retinol

Rica em triptofano
Meia vida de 2 dias na circulao
Sntese sensvel a:
Ingesto de nutrientes
Alteraes na funo heptica
Concentraes sricas flutuam mais rapidamente em
resposta as alteraes da taxa de sntese do que as
das outras protenas como a albumina. Por essa
razo, sua determinao srica tem como mais
importante utilidade clnica a de marcador
nutricional.

ALBUMINA

Mais abundante no soro

2/3 das protenas plasmticas

Diminuio acarreta um srio

desequilbrio da presso onctica
intravascular

Edema perifrico

Maior banda na eletroforese em acetato de

celulose

60% da produo ocorre no fgado

Vida mdia de 17 dias

Liga se a diversos compostos orgnicos

e inorgnicos transportando os como:

Tiroxina, Bilirrubina, frmacos, cortisol,

estrognios, cidos graxos livres, clcio,
magnsio.

Elevao ocorre nos quadros de

desidratao e em longo perodo de
torniquete

Reverso ps reidratao

 Diminuio ocorre por:

Comprometimento da sntese ( m nutrio, m
absoro, disfuno heptica)
Perdas (ascite ou nefropatia depletora de protenas ou
enteropatias)
Diminuio frequente em indivduos doentes:
Administraes de lquidos intravenosos
A posio deitado em pacientes internados espalha os
lquidos corporais diluindo os componentes, albumina
em torno de 10%
Perda na urina, lquido asctico
Perda gastrointestinal (enteropatias ou diminuio da
sntese heptica)
Queimaduras
Processos inflamatrios

INTERZONA ALBUMINA ALFA 1

Espao no corado entre a albumina e a alfa 1 globulina

Migram duas protenas de importncia clnica, no visveis em condies

normais:

Alfa fetoprotena: concentrao baixa

Fisiolgica no RN fgado fetal

Nvel mximo trigsima semana de gestao e no cncer heptico

Dosagens no lquido aminitico e soro materno deteco de defeitos no tubo neural

Marcador tumoral de carcinoma hepatocelular e clulas germinativas

Alfa lipoprotena: baixa afinidade com o corante

Globulinas
Alfa 1: segunda banda mais rpida,
adjacente a albumina, misturas de
muitas protenas:

Alfa 1 antitripsina

Alfa 1 glicoprotena cida

Alfa 1 antiquimiotripsina

Alfa 1 antitripsina

Principal constituinte da banda

Inibidor e neutralizadora de proteases (elastase)

Produzida em resposta a irritantes ou

inflamao

Prevenindo resposta bioqumica severa no

processo inflamatrio

Deficincia homozigota: enfisema

(adolescentes e adultos jovens) ou cirrose na
infncia

Deficincia heterozigota: preveno de cirrose e

enfisema

Alfa 1 glicoprotena cida

Mucoprotena ou orosomucide
Alto contedo glicdico
Meia vida de 5 dias na circulao
No um inibidor de protease
Elevada na gravidez
Aumento:

Resposta inflamatria aguda, destruio de tecidos (abcessos, tumores, leses,

cirurgias);
Processos inflamatrios agudos ou crnicos localizados ou sistmicos
(neoplasia, doena do colgeno, tuberculose)

Diminuio:

M nutrio;
Enfermidade heptica severa;
Sndrome nefrtica;
Anticoncepcionais orais;
Gastrointerites

Alfa 1 antiquimiotripsina
Inibidor de proteases
Baixas concentraes
Aumento rpido e visvel na fase inflamatria aguda

Alfa 2: a terceira banda visvel em acetato de celulose:

Haptoglobina
Macroglobulina
Ceruloplasmina

Haptoglobina

Na forma livre apresenta meia vida de 4 dias

Forma complexos com a hemoglobina

Aumento:

stress

inflamao aguda

necrose tecidual

A depleo de haptoglobina
geralmente o indicador
mais sensvel de hemlise

Diminuio:

Episdio hemoltico, pois os complexos so removidos

queimaduras

anemia hemoltica aguda auto imune

 Alfa 2 macroglobulina

Uma das maiores protenas = 725000 D

Sntese heptica
Aumenta dez vezes ou mais na sndrome
nefrtica
Retida pelo glomrulo
Outras protenas so perdidas
Diminuio em hepatopatias crnicas

Beta globulina:
Transferrina
Fibrinognio
Complemento
Hemopexina

Ceruloplasmina ou oxidase cprica

Ligao com o cobre
Sntese heptica
Elevao gravidez, uso de anticoncepcionais orais, estados inflamatrios,
neoplasias malignas
Doena de Wilson
Diminuio da ceruloplasmina com consequente reduo da incorporao do cobre
na apoprotena e reduo drstica da excreo biliar do cobre.
Deposio txica com degenerao celular (rins, fgado e crebro)
Diminuda: anemias, sndrome nefrtica, enfermidade heptica severa e cirrose
biliar primria.

Transferrina (siderofilina)
Produo: fgado, SER, testculos, ovrios
Meia vida de 7 dias
Transportar ons frricos da degradao do heme, da dieta e dos depsitos (ferritina)
para a medula
Administrao de ferro aumentam a saturao seguida pelo retorno da transferrina
normalidade
Significado clnico:
Diagnstico diferencial e monitoramento de anemias
Falha na incorporao de ferro, transferrina normal ou baixa
Diminuio em processos inflamatrios ou malignidade, doena heptica crnica,
m nutrio, sndrome nefrtica ou enteropatias

Hemopexina
Transporte do heme
HEME-HEMOPEXINA

FGADO

HEME
BILIRRUBINA

Diminuio: perda urinria, diminuio da sntese na

insuficincia heptica
Diminuio mais severa ocorre aps a hemlise
intravascular

Complemento
20 componentes imunologicamente distintos
Sangue e lquidos tissulares
Interagem com o complexos Ag-Ac
Para destruir agentes infecciosos
Medido em numerosas reaes imunitrias
Significado clnico:
Diminudo em deficincias hereditrias, doenas do
complemento, reumatologias (artrite) e autoimunes (lpus)
Aumento: infeces de fase aguda

Gama globulinas: banda mais lenta.

Imunoglobulinas ou anticorpos
Imunoglobulinas secretadas por plasmcitos

 IgG
Abundante no lquido extracelular (LEC)
Soro 70 a 75%
Respostas a maioria dos vrus e bactrias
Atravessa a placenta
Resposta policlonal e ampla
IgM
Primeira resposta imune ao estmulo antignico
nica produzida pelo feto
No atravessa a placenta
5 a 10% das Ig totais
RN a elevao na primeira semana sugere infeco por rubola,
citomegalovrus e toxoplasmose

Gamopatia Monoclonal: para protena secretada por uma proliferao monoclonal

de clulas plasmocticas.
MIELOMA MLTIPLO: Desregula a produo de IgG e IgA

Gamopatia policlonal: Largo e difuso aumento da frao y-globulina

doenas crnicas do fgado, infeces crnicas

Referncias:
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