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CONSERVACIN DE CEPAS

MICROBIANAS

Objetivos que hay que alcanzar para conservar correctamente las cepas
microbianas en los laboratorios de microbiologa.
Que el cultivo a conservar sea puro, evitando que se produzcan
contaminaciones durante el proceso de conservacin.
Que durante el tiempo de conservacin sobrevivan al menos el 70-80% de
las clulas.
Que estas clulas permanezcan genticamente estables.

MTODOS DE ELECCIN O DE
CONSERVACIN A LARGO PLAZO.
Son los mejores porque en ellos se
paraliza el crecimiento de las
clulas microbianas, pero stas no
han muerto.

Se garantiza al mximo la
estabilidad gentica, por evitarse la
aparicin de generaciones
sucesivas.

Los mtodos de conservacin pertenecientes a


este grupo son dos: congelacin y liofilizacin.

a) Conservacin por congelacin.

Se congelan las clulas en suspensin en un lquido con un agente crioprotector y se guardan a temperaturas
inferiores a 0 C, con lo que el agua se congela

Al no disponer las clulas de agua en forma


lquida, no hay crecimiento.

Cuando se quiere trabajar con las clulas as


conservadas, se recuperan subiendo la
temperatura.

Este es el mejor mtodo de conservacin desde todos los puntos de vista, pero tiene el
inconveniente de requerir aparatos especiales

Tambin resulta ser el mtodo ms molesto para realizar el envo de las


cepas.

1. Edad de las clulas:


En la mayora de los casos
conviene utilizar clulas
maduras del inicio de la
fase estacionaria de la
curva de crecimiento.
4. Empleo de agentes
crioprotectores:
Estas sustancias
protegen del dao que
se pueda producir en
las clulas
microbianas en el
momento de la
congelacin.

Factores que influyen en la


viabilidad y estabilidad de
las clulas conservadas
por este mtodo son los
siguientes:

Este mtodo no se debe emplear para la


conservacin de microorganismos
anaerobios, como por ejemplo el gnero
bacteriano Clostridium, ya que al estar
las clulas en una superficie hay un
mayor contacto con el oxgeno y puede
afectarse la viabilidad.

2. Velocidad en la
congelacin y
descongelacin: Es mejor
que las variaciones de la
temperatura sean
rpidas, tanto para la
congelacin como para la
descongelacin, por lo
que para descongelar
conviene poner las
clulas a 37C.

3. Temperatura de almacenamiento: Debe


ser lo ms baja posible. Lo mejor es
guardar tubos cerrados o sellados, que
contengan las clulas microbianas,
sumergidos en nitrgeno lquido, que tiene
una temperatura de 195C, o bien en la
fase gaseosa del nitrgeno lquido, con una
temperatura de 140C.

La liofilizacin se consigue
por sublimacin del hielo de
las clulas.

Para la liofilizacin se
recomiendan como
crioprotectores el inositol
para la mayora de las
bacterias y la leche
descremada para hongos
y actinomicetos

b)
Conservacin
por
liofilizacin.

Es un mtodo muy
recomendable por su comodidad
para el almacenamiento y para
el envo de las cepas, pues una
vez conseguidos los lifilos
pueden almacenarse a
temperatura ambiente (18C20C)

Tampoco se da crecimiento
en las clulas conservadas
por este mtodo, puesto
que se les ha quitado el
agua mediante la
liofilizacin, que es un
proceso suave

Tipo de microorganismo.

Condiciones de
almacenamiento.

Concentracin celular.
Factores que influyen
especficamente en la
eficacia de la
liofilizacin como
medio de conservacin.

Atmsfera de oxgeno
en el tubo.

Temperatura durante la
sublimacin.

Grado de deshidratacin
alcanzado.

MTODOS ALTERNATIVOS.
Son los que se utilizan cuando no se pueden emplear los mtodos de eleccin, bien
por carecer de los equipos necesarios, o bien porque la cepa microbiana no resiste los
tratamientos de la conservacin por estos mtodos.

a) Conservacin por transferencia peridica.

b) Conservacin por suspensin en agua destilada o en agua de mar estril.

a) Conservacin por transferencia peridica.

La cepa microbiana
se guarda en forma
de cultivo activo en
el medio de cultivo
en el que ha
crecido.

Estas clulas no pueden


permanecer
indefinidamente en el
mismo tubo, porque al
seguir activas excretan
productos txicos del
metabolismo que se
acumulan, provocando el
envejecimiento y muerte
celulares, por lo que es
necesario transferirlas a
otro tubo con medio de
cultivo fresco.

Este es el peor mtodo


para conseguir la
estabilidad gentica,
puesto que al estar las
clulas creciendo hay
una alternancia de
generaciones, y al cabo
del tiempo las clulas
que se estn guardando
sern descendientes
lejanas de las clulas
iniciales y es posible que
ya no conserven algunas
de sus caractersticas.

b) Conservacin por suspensin en agua destilada o en agua de


mar estril.

Es un mtodo alternativo muy utilizado y que da altos porcentajes de


viabilidad en diversos tipos de microorganismos, tanto hongos filamentosos
como levaduras y algunas bacterias.

Consiste en suspender en agua estril unas cuantas clulas del


cultivo que se quiere conservar.

MTODOS RESTRINGIDOS.
En este grupo se engloban mtodos no empleados habitualmente, pero a los que es necesario
recurrir a la hora de conservar grupos de microorganismos muy determinados que no resisten bien
la liofilizacin o la congelacin, como por ejemplo los gneros bacterianos spirillum, rhodospirillum,
etc.
Estos metodos se basan en la paralizacin del crecimiento por eliminacin del agua disponible para
las clulas.
a) Desecacin en papel de filtro.
b) Desecacin en suelo, arena, silicagel, etc.
c) Desecacin en bolitas de alginato
d) Desecacin en sal gorda para halobacterias.

a) Desecacin en papel de filtro.

Se utiliza un papel bastante absorbente (whatmann n 3) que se impregna con una


solucin muy densa de clulas y se deja secar al aire (en condiciones estriles).

Tambin es posible desecarlos por el procedimiento que se llama desecacin lquida (ldry) porque se utiliza para ello el liofilizador, pero sin que haya habido congelacin
previa de las clulas.

b) Desecacin en suelo, arena, silicagel, etc.


Se aaden las clulas a estos sustratos que las protegern al desecar. los
microorganismos productores de esporas se pueden conservar durante
bastante tiempo por este mtodo.

ste es un procedimiento
bastante eficaz.

Las clulas se encuentran en una


matriz de alginato y la eliminacin
del agua se hace por tratamiento
con soluciones hipertnicas
sucesivas y posterior desecacin al
aire hasta que se pierde un 70% de
su contenido en agua.

c) Desecacin en
bolitas de alginato

Este es un mtodo
que se est
utilizando incluso
para la conservacin
de algas y clulas
vegetales.

d) Desecacin en sal gorda para halobacterias.


Para su conservacin por este mtodo se mezclan las
clulas con sal y se dejan desecar espontneamente.

Debido a la higroscopicidad de la sal, la desecacin no es total, pero las


clulas dejan de multiplicarse por ser insuficiente el nivel de agua
disponible.