UNIVERSIDA NACIONAL

PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGA

SELECCIN IN VITRO
Autor:
Pisfil Colchado Katheryn Georget

SELECCIN IN VITRO

La seleccin in vitro es un
procedimiento del cultivo de
clulas y tejidos en la que estas
estructuras son sometida una
determinada
presin
de
seleccin con la finalidad de
seleccionar lneas celulares que
exhiban
tolerancia
de
resistencia al factor de presin
ejercido.
Esta
presin
de
seleccin esta dada por diversos
factores
como
temperatura,
sequa,
metales
pesados,
herbicidas,
toxinas
de
microorganismos patgenos, etc.

Es el mejor mtodo debido a su

capacidad
de
manipular
variaciones al resultado esperado.
Es un mtodo de variacin
somaclonal:
condicin
para
cambiar el somacln con el
carcter
deseado(Van
Den
Bulk,1991;Karp,1995).
Cuando la capacidad intrnseca de
variacin de los cultivos crecidos in
vitro es potencializada a travs de
la adicin de un agente de
seleccin al medio de cultivo, es
posible
obtener
variantes
somaclonales con tolerancia a
ese agente de seleccin; esta
tcnica se denomina seleccin in
vitro(Lesrari 2006).

La seleccin in vitro puede aplicarse a poblaciones inicialmente homogneas,

a poblaciones de clulas hibridas por fusin de protoplastos o a clulas
transformadas por ingeniera gentica.

Solo tal planta tolerante es capaz de crecer ,para obtener la planta con el
carcter deseado no toma mucho tiempo(Biswas et al2002)
El logro de la tcnica de seleccin in vitro esta en la disponibilidad de :
-alta variacin de la clula
-una fcil aplicacin del mtodo de seleccin in vitro(Widoretno,2003)
-el carcter deseado para ser heredado(Yusnita,2005)

El procedimiento de seleccin es semejante al utilizado para bacterias en

experimentos de microbiologa, con la diferencia de que en este caso las
bacterias permanecen libres en tanto que en las clulas vegetales tienden
a formar agregados celulares, lo que de alguna manera altera la
distribucin de las clulas que se modifican, aun cuando los criterios de
aplicacin de la gentica microbiana sean los mismos (Murphy,1982).

Micromanipulacon

Seleccin
total.

Seleccin
por
resistencia

El objetivo es mostrar y discutir las

potencialidades que ofrece la
seleccin
in
vitro
en
el
mejoramiento gentico de los
cultivos y la obtencin de las lneas
celulares
productoras
de
sustancias
metablicas
secundarias.
Collin & Dix(1990)consideraron seleccin
varias estrategias en el proceso de
visual.
seleccin in vitro:

seleccin
contraria o
counterselecti
on.

seleccin
por
resistencia

Seleccin
visual

Las clulas son cultivadas directamente bajo el factor

de presin de seleccin, el que puede ser
qumico(p.e.una toxina) o fsico( p. e. temperatura
alta).nicamente las clulas resistentes o tolerantes
que continan su crecimiento sern seleccionadas
como
lneas
celulares
resistentes
a
enfermedades(cf.Jones,1990),marcadores
genticos(cf.Negrutiu
1990),hbridos nucleares(cf.
Gleba
&Shlumukov,1990)
hbridos
citoplasmticos(cf.Medgysey,1990)y
clulas
transformadas(cf.Lindsey &Jones,1990).

Aplicado cuando el fenotipo requerido no

tiene una ventaja requerida respecto las
clulas del cultivo inicial ,pero puede ser
visualmente identificado permitiendo su
rpida seleccin.Aplicado a cultivos que
acumulan pigmentos, como las antocianinas
o los pierden, como la clorofila; combinando
la seleccin por resistencia y la seleccin
visual, u ejemplo es la obtencin de lneas
celulares resistentes a antibiticos.

seleccin
contraria

Seleccin
total

Basado en el hecho de que ciertas drogas pueden

matar solo clulas en divisin, en tanto que otras,
donde la inhibicin es inhibida, por ejemplo, por una
deficiencia nutricional, pueden sobrevivir.es aplicado
en mutantes autotrficos y algn otro mutante letal
condicional, donde no se cuenta con un adecuado
procedimiento de seleccin (cf.Phythoud &
King,1990).

Aplicado para pruebas de crecimiento en medio de

cultivo no-adecuado, y es utilizado en la identificacin
de auxotrofos(cf.Phythoud & KING, 1990)o en
pruebas bioqumicas inmunolgicas para identificar
lneas
celulares ,por ejemplo, productoras de
metabolitos secundarios(cf.Wilson,1990).

MICROMANIPULACIN

Cultivo de callos

Cultivo de
suspensiones
celulares

Tamao del explante

Plaqueamiento de
suspensiones
celulares

Cultivo en
tratamientos
crecientes del factor
estresante

Cultivo de
protoplastos

Tiempo de duracin
del cultivo

Cultivos
diferenciados

A metales
pesados
A herbicidas

TOLERANCIA

A salinidad
a estrs
hdrico
a
temperaturas
extremas

Resistencia

patgenos

Seleccin
utilizando
parsitos
fngicos
obligatorios
Seleccin
utilizando virus

Seleccin
utilizando
parsitos
facultativos

txinas

Debido a su natraleza los virus

permiten la realizacin de
estudios sobre resistencia in vitro
un un amplio numero de
sistemas y tejidos,lo que ha sido
expresado en callos,protoplastos
y suspensiones
celulares(Murakishi
et al.,1984)
Utilizando hongos y bacterias
facultivas en interacciones con
el cultivo de callos.

SELECCIN DE CALLOS ORGANOGENICOS TOLERANTES A BAJA TEMPERATURA

Y REGENERACION DE PLANTAS DE Melia azederach L.
Sandra Sharry y Walter Abedini.
Cento Experimental de Propagacin Vegetativa(C.E.Pro.Ve).CIC PBA.Facultad Agrarias y
Forestales,Universidad Nacional de la PlataC.C.La Plata,Bueno Aires.(1992-1994)

importancia
En la industrial
forestal y como
fuente de
metabolitos
secundarios con
propiedades
insecticidas y
medicinales.

Materiales y
mtodos
Acondicionamient
o de explantes
Optimizacin de
un protocolo de
induccin de
callos
organognicos.
Obtencin de
plantas
completas
Anlisis de callos.

resultados
Sobrevivencia
45% de callos
sometidos a baja
temperatura(4C)
,con una tasa de
regeneracin de
1 a 5 brotes cada
250mg de callo.

Seleccin in vitro a Ustilago scitaminea Syd sobre callos embriognicos de

caa de azcar.
Leonardo Garca , Lourdes Garca, Novisel Veita , Idalmis Bermdez.
Instituto de Biotecnologa de las Plantas. Universidad Central Marta Abreu de las
Villas. Carretera a Camajuan Km 5 . Santa Clara Villa Clara. Cuba(2002)

Con el objetivo de incrementar la

eficiencia de los mtodos de
seleccin in vitro a la enfermedad
del carbn de la caa de azcar .
Obtuvieron callos embriognicos de los
genotipos:
Ja 60-5,
IBP 85-23 (susceptibles) y
B 43-62(control resistente)
que fueron expuestos a diferentes
concentraciones de cultivo filtrado de
Ustilago scitaminea Syd.(0, 75, 87 y 95
ml.l-1 de medio de cultivo de induccin de
embriones).
.

Los resultados indicaron que existi

una correspondencia entre la respuesta
al cultivo filtrado y los ndices de
resistencia a la enfermedad en el
campo.

observ que en la medida en que aument

la concentracin del cultivo filtrado en el
medio, aument la afectacin en el
crecimiento de los callos, en todas las
concentraciones la afectacin fue menor

SELECCIN In Vitro DE FORMAS TOLERANTES DE PAPA (Solanum tuberosum, L.) A

FILTRADOS DE Phytophthora infestans (Mont.) de Bary
Hernndez, Mara M.; Estvez, Ana; Mor, Olivia; Gonzlez, Mara E.; Mrquez, Ramona; Castillo, J.
G.; Ortiz, Ursula.
Instituto Nacional de Ciencias Agrcolas.La Habana, Cuba.(2003)

SELECCIN Y REGENERACIN in vitro DE SOMACLONES DE TOMATE DE

RBOL (Solanum betacea cav. Sendt) UTILIZANDO FILTRADOS DE CULTIVO
DE Colletotrichum acutatum CON ACTIVIDAD PECTINASA.
Carlos Patio Torres; Rodrigo Hoyos Snchez y Luca Afanador Kafuri.
Universidad Nacional de Colombia, Sede Medelln. Facultad de Ciencias Agropecuarias. A.A.
1779, Medelln, Colombia. (2007)

Metodologa para la seleccin in vitro de Mycosphaerella fijiensis

Morelt en banano.
L.Garca,L.Herrera,I.Bermdez,N.Veita,J.Clavero.
Instituto de Biotecnologa de las Plantas.UCLV,Clara,Cuba(2002 )

VENTAJAS
a)No implica tcnicas de manipulacin
gentica Molecular
b) Permite la manipulacin simultanea de un
numero prcticamente ilimitado de clulas
en un solo ciclo de seleccin.
c) Existen protocolos de regeneracin in vitro
efectivos para muchas especies de
importancia econmica.
d) Hay disponibilidad de muchas tcnicas
moleculares para una discriminacin rpida y
eficaz de variantes genticos vs. Variantes
Epigenticos
e) No requiere de insumos o infraestructura
especializada

f) Es una tcnica bien sustentada

cientficamente.

APLICACIONES
a) Generacin de

germoplasma
resistente/tolera
nte a factores de
estrs bitico
(v.gr. estrs
hdrico,alinidad,
metales
pesados),
condicin que
generalmente
tiene una base
gentica de
c) generacin
compleja.
ornamentales
con
caractersticas
novedosas
(v.gr.tamao,
color, textura)

b) seleccin
directa de
mutantes con
tolerancia y/o
resistencia a
factores biticos
con base
gentica mono
gnica.

d) estudio y
anlisis de los
mecanismos de
interaccin
molecular entre
las clulas de las
plantas y
losfitopatogenos,
asi como las
respuestas de las
clulas vegetales