Clase Tuberculosis

Ctedra de Bacteriologa y Micologa - FCV - UNL
EMERGENCIA GLOBAL
8-12 millones de nuevas infecciones con M.
tuberculosis por ao
2-3 millones de personas mueren de TBC por ao
Hay tambin emergencia de cepas con resistencia
multidroga
Estas tendencias y la asociacin con HIV, ha
conducido a que la TBC sea:
En 1882, Robert Koch describi el agente

etiolgico de la tuberculosis (TB) y lo
denomin Bacterium tuberculosis. El
nombre inicial fue sustituido por el de
Mycobacterium tuberculosis en 1896 por
Lehmann y Neumann.
El trmino Mycobacterium significa hongobacteria, y esta denominacin se debe al
aspecto de los cultivos, que en ciertos
aspectos recuerdan a los de los hongos.
CLASIFICACIN DE LAS
MICOBACTERIAS
Complejo
Mycobacterium
tuberculosis
Gnero
Mycobacterium
M canetti
M bovis subesp caprae

M bovis subesp pinnipedii
M bovis BCG
crecimiento lento y no cromgenas
Micobacterias
No
tuberculosas
*M. avium sub avium, M. avium subsp. paratuberculosis,

M. intracellulare, M. silvaticum
COMPLEJO Mycobacterium
tuberculosis
M. tuberculosis
M. bovis
M.africanum
M. canetti
M.caprae
M. pinnipedii
M. microti
M. tuberculosis
Bacilo recto o ligeramente curvo y delgado

3-6 m x 0,3-0,6 m
BAAR
NO se tien con GRAM
solos o agrupados
CULTIVO
Inmviles
Crecimiento lento,> 7 das
Exigentes: Lwenstein-Jensen,
No forman esporas, no capsulados.
Middlebrook en agar y caldo.
Aerobios estrictos
Se dividen por fisin binaria, lenta (15-20
CO2 al 5%
horas)
Temperatura ptima: 37 C
Colonias rugosas, en coliflor, color crema, secas.
1)
Glucolpidos:
a)
Micolatos de trehalosa: estn unidos con cidos
miclicos. Constituyen el llamado factor de crecimiento en
cuerdas, debido a que son responsables de la agregacin de
los individuos bacterianos en forma de cuerdas.
b)
Sulfolpidos de trehalosa: estn localizados en la
periferia de la P.C., funcionan como evasinas (parsitos
intracelulares facultativos).
c)
Micsidos: localizados en la periferia.
2)
Cera D:
Alto contenido lipdico (40-60% del peso seco de la pared)
PARED CELULAR: hidrofbica, alto

contenido en lpidos (60%),
propiedades adyuvantes
El cido miclico y cidos grasos de

cadena corta son responsables de la
tincin inusual (AAR)
Grupo Caractersticas Especie tipo

I
Fotocromgenos *
M kansasii
M marinun
II
Escotocromgenos **
M gordonae
III
No cromgenos
Complejo M avium
Complejo M terrae
IV
De desarrollo rpido
Complejo M fortuitum
Complejo M chelonei
M phlei
* Desarrollan pigmento slo en presencia de luz

** Desarrollan pigmento en ausencia de luz
1. Micobacterias de crecimiento lento, requieren ms de 7 das para

producir colonias visibles, no cromgenas
Especie
Hospedador
Enfermedad
M bovis
Numerosos
mamferos, HE
TBC bovina
M bovis subesp
caprae
Cabra y otros
mamferos
TBC bovina
M tuberculosis
HE, mamferos,
canarios, psitacidas
TBC humana
M africanum
HE, bovinos
TBC humana
M microti
Roedores
TBC ratn
Otros mamferos
TBC en
inmunodeprimidos
10
Micobacterias atpicas, potenciales productores de lesiones

localizadas en HE y animales, fotocromgenas, slo en presencia de
luz Grupo I de Runyon
Especie
M kansasii
M marinum
M simiae
Hospedador
Enfermedad
Ciervos, cerdos,
bovinos
Procesos
tuberculoides,
pulmones y
ganglios
Peces, mamferos
acuticos y
anfibios
TBC peces,
procesos
granulomatosos
diseminados
HE
Granuloma de
piscina y peceras
Primates
Pulmn HE,
ganglios monos
sanos
11
Especie
Hospedador
Vacas, ovejas, cabras,
otros rumiantes, conejos
M avium subesp
paratuberculosis
HE
Paratuberculosis
Enf de Crohn?
Colitis ulcerosa?
HE
Linfadenitis, artritis
spticas, neumonas,
cutneas
Ratones
Cutneas
Gatos y roedores
Lepra felina y murina
M haemophilum
M lepraemurium
Enfermedad
12
2. Micobacterias de crecimiento rpido (Grupo IV de Runyon) requieren

menos de 7 das para producir colonias visibles
Especie
Hospedador
Enfermedad
M chelonae
Tortugas, peces,
bovinos,
gatos,cerdos,
manates, monos
Lesiones
granulomatosas
diseminadas,
abscesos
M abscessus
HE
Enf respiratoria
crnica, infec
postraumticas
M fortuitum
Bovinos, gatos,
perros, cerdos
Lesiones
granulomatosas
M phlei
Gatos y rumiantes
Ndulos cutneos
Bovinos
Mastitis
granulomatosa
Gatos
Lesiones cutneas
M smegmatis
13
Especies escotocromgenas, producen pigmento tanto en presencia

como en ausencia de luz Grupo II de Runyon
Especie
Hospedador
Enfermedad
Cerdos domsticos
y salvajes, jabales,
vacas y bfalos
Lesiones
granulomatosas en
gang cervicales y
entricos
HE
Escrofulariosis
M scrofulaceum
14
NO TODAS LAS BACTERIAS

CAUSAN ENFERMEDAD
Pocas bacterias son siempre
patgenas
Muchas bacterias son
potencialmente patgenas
La mayora de las bacterias

nunca son patgenas
15
MEMBRANA
Bacterias intracelulares
facultativas
Salmonella
Yersinia
Brucella
Mycobacterium
CELULAR
Bacterias intracelulares
obligadas
Chlamydia
Rickettsia
Coxiella
CLULA
HOSPEDADORA
Bacterias extracelulares
Escherichia coli
Pseudomonas
16
Cpsula externa
Modificacin de la estructura del
antgeno LPS O
Produciendo y viviendo dentro de un
biofilm
Uniendo antgenos del hospedador a
la superficie celular. Especficamente
la protena A y G con el receptor Fc de
las inmunoglobulinas.
Produccin de proteasa no especifca
Proteasas especifcas
IgAasa
Peptidasa C5b
Exotoxina citoltica que matan fagocitos
Evitando la fagocitosis
Supervivencia dentro de
fagocitos
Invasin no fagoctica de las clulas
17
18
19
20
21
22
23
R1
CH
OH
R2
COOH
R1 y R2: cadenas laterales variables

Mycobacterium: C79 C85
Nocardia: C48 C58
Corynebacterium: C32 C36
Rhodococcus: C34 C54
24
25
26
27
Bacteria
Siderforo
Protenas
portadoras
Clula
Lactoferrina
Fe3+
Fe3+
Transferrina
Fe3+
Fe
2+
Fe3+
Receptor
Hemoglobina
Fe2+
28
29
PROCEDIMIENTO
TCNICAS
EXAMEN DIRECTO
Coloracin de
Kinyoun
Coloracin de ZiehlNeelsen
DETECCIN DE
CRECIMIENTO
Lowestein-Jensen
Ogawa- Kudoh
IDENTIFICACIN DE
LA ESPECIE
Pbas bioqumicas
tradicionales
(Niacina, Catalasa,
Reduccin de
Nitratos etc)
TIEMPO
PROMEDIO
24 HORAS
20-25 DAS
50-55 DIAS
30
PROCEDIMIENTO
TCNICAS
EXAMEN DIRECTO
Coloracin
Auramina/Rodamina
24 horas
DETECCIN DE
CRECIMIENTO
BACTEC,
15 das
IDENTIFICACIN DE
LA ESPECIE
BACTEC, Sondas de
ADN, HPCL
18 das
TIEMPO
PROMEDIO
31
2 g de muestra libre de cseum+ 4 cc de albmina bovina al

0,4%+ 10 cc de agua destilada estril
Homogeinizacin
Decontaminacin
10 cc homogeneizado+cloruro
de hexadecil piridinio
10 cc homogeneizado+cloruro
de benzalconio
Tto de 15-20 minutos
Tto de 15-20 minutos
Centrifugacin 15/3000rpm
Centrifugacin 15/3000rpm
Concentracin de micobacterias
Descartar sobrenadante
Siembra
32
MEDIO
COMPONENTES
INHIBIDORES
33
34
35
36
37
38
Mycobacterium tuberculosis
39
40
REACTIVOS:
TCNICA DE
TINCIN
Fucsina
fenicada
- Colocar los
portaobjetos
sobre(colorante
el soporte primario:
de tincin.3 g
bsica,
50 ml fenol
100 mlde
etanol
- Cubrir lafucsina
preparacin
totalmente
con laysolucin
fucsina
filtrada. 95%).
Alcohol-clorhdrico
al 3% flameando
(decolorante:
3 mlveces
-Calentar suavemente
el portaobjetos
varias
cido
clorhdrico hasta
concentrado
y 97
etanol
(por ej., 3-4)
la preparacin
la emisin
de ml
vapores,
evitando la95%).
desecacin y la ebullicin.
Azul
metileno (contracolorante:
3 g azul
- Lavar con
agua de
(preferiblemente
destilada en muestras
metilenolaypreparacin.
1.000 ml agua destilada).
estriles) ydedecantar
- Aadir el alcohol-clorhdrico (decolorante) y mantener durante 2
min.
- Lavar con agua y decantar.
- Aadir el azul de metileno dejndolo durante 3 minutos.
- Lavar con agua y dejar secar a temperatura ambiente.
41
42
43
REACTIVOS:
TCNICA
DE TINCIN:
fenicada de Ziehl:
-Fucsina
Colocar
los portaobjetos sobre el soporte de tincin.
Sol A.: 3 gr de fucsina bsica en 10 ml de alcohol etlico de 95
-Cubrir
preparacin
totalmente
confundido)
la solucin
dede agua
Sol B.: la
5 gr
de fenol ( 4,66
ml de fenol
en 95 ml
destilada.y dejar 10 minutos
fucsina
Azul decon
metileno
- Lavar
aguaalcalino de Loeffler (sol. saturada): 0,3 gr de azul de
metileno
- Decolorar
con alcohol cido
30 ml de alcohol etilico de 95
- Alcohol
Lavar con
cido:agua
concentrado
. . . . .dejndolo
3 ml
- Aadir elHCL
azul
de metileno
durante 1 minuto
Alcohol
etlico
95 . secar
. . . . 97 amltemperatura ambiente.
- Lavar con
agua
y dejar
44
ESPECIE
Niacina
Nitrato
Catalasa
a 68 C
M.tuberculosis
+
+
-
M.bovis
45
Diagnstico molecular: Depende de la

demostracin del DNA o RNA del
microorganismo en la muestra. El RNA y mRNA,
en particular, pueden ser la mejor indicacin de
la viabilidad de las clulas de micobacterias.
micobacterias
1. Tcnicas de hibridacin.
2. Tcnicas de amplificacin e hibridacin con sondas
especficas.
3. Tcnicas de amplificacin y corte con enzimas de
restriccin.
4. Secuenciacin.
46
Perspectiva: Diagnstico molecular
1. RPIDO
2. SENSIBLE
3. ESTANDARIZABLE
47
Diagnstico molecular
INTERFERN GAMMA (IFN )

Mide respuesta inmune celular
LT sensibilizados responden frente al Ag
liberando citoquina
Deteccin de INF con ELISA
48
Diagnstico molecular
PCR
alta sensibilidad y especificidad
potencial
desarrollo y lecturas rpidas
varias modalidades
Secuencias genmicas ideales:
especficas de especie o subtipo a
detectar
con varias repeticiones en el genoma
de tamao pequeo
estables
49
Secuencias ms utilizadas:
IS6110
Especfica de micobacterias tuberculosas
1 2 copias en M bovis
5 a 23 copias en M tuberculosis
Secuencia corta: ideal para estudios en tejidos fijados
IS1081
Especfica de micobacterias tuberculosas
5 6 copias en M bovis
1 2 copias en M tuberculosis
Secuencia ms larga: ideal para estudios en tejidos
frescos
50
Electroforesis en gel de mltiplex productos

PCR (IS1081 y cytb) corridos sobre 3% de gel
agarosa . Lneas 1 y 8: 100 bp DNA
marcadores. Lneas 26: muestras de LN
bovino con VL. Todas muestran amplificacin
de DNA mitocondrial bovino (producto cytb,
flecha a) y las de las lneas 2, 3, 5 y 6 fueron
positivas pra el producto IS1081 de 135 bp
(flecha b).
Taylor et al. BMC Veterinary Research 2007 3:12
51
52
Actividades biolgicas atribuidas a componentes de origen micobacteriano
COMPONENTE
ACTIVIDAD BIOLGICA
cido miclico (con glucolpido)
Induce formacin de granuloma
Fosfolpido (con manosa)
Inmungeno, actividad adyuvante
Micsidos (glicopeptidolipido)
Antgenos relacionados con el serotipado del complejo M aviumintracellulare, implicados en la formacin de la pseudocpsula
alrededor de la bacteria fagocitada
Micsidos (fenoglicolipido)
Antgeno especfico de M tuberculosis, M leprae y M kansaii,

implicado en la formacin de la pseudocpsula alrededor de la
bacteria fagocitada
Cera D
Actividad adyuvante, induce artritis en ratn y rata, induce

granuloma
Factor Cord
Toxicidad en ratn, factor de virulencia, inhibicin de la migracin de

PMN, disminucin de la sntesis de glucgeno en hgado y msculo,
inmungeno, actividad adyuvante, induce granuloma
Sulftidos
Factor de virulencia, toxicidad en el ratn, inhibe la fusin fagosoma

lisosoma en macrfagos infectados
Muramil dipptido
Actividad adyuvante, inmunomodulador
Pared celular
Actividad adyuvante, induce granuloma, inmunomodulador
Micobacterinas y exoquelinas
Quelantes de hierro, factores de patogenicidad

53
54
55
56
57
58
59
ROBLEDO R, Jaime y MEJIA M, Gloria Isabel. Actualidad en el diagnstico de tuberculosis por el

laboratorio. Infect., oct./dic. 2001, vol.5, no.4, p.252-259. ISSN 0123-9392.
60
ROBLEDO R, Jaime y MEJIA M, Gloria Isabel. Actualidad en el diagnstico de tuberculosis por el

laboratorio. Infect., oct./dic. 2001, vol.5, no.4, p.252-259. ISSN 0123-9392.
61
Criterios de clasificacin
Ritmo de crecimiento.
Produccin de pigmentos en presencia/
ausencia de luz.
62
Dra. Isabel Kantor - Situao da tuberculose como zoonose no

Conesul e Europa
63

Conesul e Europa
64

Conesul e Europa
65

Conesul e Europa
66
67
68
Publicacin del rea de vigilancia

de la
Direccin
de
Epidemiologa
Lepra
Casos y Tasas Acumulados por 10000 habitantes.
Hasta la 11 semana epidemiolgica
PAIS ARGENTINA por Provincia
Aos 2008 - 2010
PROVINCIA
Ciudad de
Buenos Aires
Buenos Aires
Crdoba
Santa Fe
Centro
San Luis
Cuyo
Corrientes
Chaco
Misiones
NEA
Salta
Santiago del
Estero
Tucumn
NOA
Total PAIS
ARGENTINA
2008
Casos
Tasas
2009
Casos
Tasas
2010
Casos
Tasas
8
0
3
10
21
1
1
0
18
2
20
2
0,03
0,01
0,03
0,01
0,02
0,00
0,17
0,02
0,05
0,02
2
1
1
4
0
2
7
2
11
1
0,01
0,00
0,00
0,00
0,02
0,07
0,02
0,03
0,01
1
1
0
2
7
0,00
0,00
0,00
0,02
0,07
0,02
5
4
11
0,06
0,03
0,02
2
0
3
0,02
0,01
1
1
0,01
0,00
53
0,01
18
0,00
12
0,00
Nmero 30 - Ao II
19 de Abril de 2010
Semana Epidemiolgica 15
69

de la
Direccin
de
Epidemiologa
Tuberculosis
Casos y Tasas Acumulados por 10000 habitantes.
Hasta la 11 semana epidemiolgica
PAIS ARGENTINA por Provincia
Aos 2008 2010
2008
2009
PROVINCIA
Ciudad de Buenos Aires
Buenos Aires
Crdoba
Santa Fe
Centro
La Rioja
San Juan
San Luis
Cuyo
Corrientes
Chaco
Formosa
Misiones
NEA
Jujuy
Salta
Santiago del Estero
Tucumn
NOA
Chubut
La Pampa
Neuqun
Ro Negro
Santa Cruz
Tierra del Fuego
Sur
Total PAIS ARGENTINA
Nmero 30 - Ao II
19 de Abril de 2010
Casos
319
170
14
52
555
7
1
14
22
6
101
0
56
163
66
169
26
42
303
20
14
5
18
9
4
70
1113
Tasas
1,05
0,11
0,04
0,16
0,21
0,21
0,01
0,32
0,07
0,06
0,96
0,52
0,44
0,97
1,38
0,30
0,28
0,65
0,43
0,42
0,09
0,30
0,40
0,32
0,31
0,28
Casos
294
154
10
45
503
4
10
14
71
0
12
83
62
175
29
9
275
19
7
9
13
12
4
64
939
Tasas
0,96
0,10
0,03
0,14
0,19
0,11
0,22
0,04
0,67
0,11
0,22
0,90
1,40
0,33
0,06
0,59
0,41
0,21
0,16
0,22
0,52
0,31
0,28
0,23
2010
Casos
150
153
2
19
324
4
6
10
40
6
37
83
115
10
125
10
12
13
3
12
1
51
593
Tasas
0,49
0,10
0,01
0,06
0,12
0,11
0,13
0,03
0,37
0,11
0,33
0,22
0,91
0,07
0,26
0,21
0,35
0,23
0,05
0,51
0,07
0,22
0,15
70

de la
Direccin
de
Epidemiologa
Nmero 30 - Ao II
19 de Abril de 2010
71

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En 1882, Robert Koch describi el agente

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M bovis subesp caprae

crecimiento lento y no cromgenas

*M. avium sub avium, M. avium subsp. paratuberculosis,

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Bacilo recto o ligeramente curvo y delgado

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PARED CELULAR: hidrofbica, alto

El cido miclico y cidos grasos de

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Grupo Caractersticas Especie tipo

* Desarrollan pigmento slo en presencia de luz

1. Micobacterias de crecimiento lento, requieren ms de 7 das para

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Micobacterias atpicas, potenciales productores de lesiones

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Lepra felina y murina

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2. Micobacterias de crecimiento rpido (Grupo IV de Runyon) requieren

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Especies escotocromgenas, producen pigmento tanto en presencia

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NO TODAS LAS BACTERIAS

La mayora de las bacterias

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Produccin de proteasa no especifca

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R1 y R2: cadenas laterales variables

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2 g de muestra libre de cseum+ 4 cc de albmina bovina al

Tto de 15-20 minutos

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Diagnstico molecular: Depende de la

Perspectiva: Diagnstico molecular

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INTERFERN GAMMA (IFN )