La centrifugacin es un mtodo de separacin de molculas con diferentes

densidades en una solucin, lo cual se logra al aplicar una fuerza giratoria a

alta velocidad por medio de un rotor.
La centrfuga es el equipo que nos proporciona la tcnica de separacin
basada en el movimiento de partculas por rotacin y aceleracin centrfuga de
modo que, sometidas a altas velocidades durante cortos periodos de tiempo,
permiten la sedimentacin de los componentes de una solucin homognea
segn sus diferentes densidades.
De esta manera, dicha solucin queda finalmente separada en dos
fracciones, la fraccin sobrenadante y la fraccin sedimentada que queda
depositada en el fondo del tubo de centrifugacin.

Es una de las tcnicas ms tiles y empleadas en los laboratorios de

biologa molecular, la centrfuga es un equipamiento bsico en los
laboratorios de anlisis para la separacin y purificacin de numerosas
macromolculas (protenas, DNA, RNA, clulas o fracciones celulares).
La centrifugacin es utilizada para colectar clulas, precipitar ADN, purificar
partculas virales, y distinguir diferencias sutiles en la conformacin de las
molculas.
La mayora de los laboratorios que desarrollan activas investigaciones
tienen ms de un tipo de centrifuga, cada una capaz de utilizar una variedad
de rotores.
Por ejemplo:
Las centrifugas pequeas de mesa pueden usarse para sedimentar clulas o
colectar cadenas de ADN durante la precipitacin con etanol.
Las Ultracentrifugas pueden usarse para unir ADN plasmdico en un
gradiente de cloruro de cesio o diferenciar varias estructuras de replicacin
de ADN en un gradiente de sucrosa.

Fuerza centrifuga relativa (FCR) (Fuerza g)

Durante la centrifugacin, las protenas o molculas de ADN en suspensin son
forzadas al punto ms alejado del centro de rotacin.
El rango en que esto ocurre depende de la velocidad del rotor (medida en rpm:
revoluciones por minuto).
La fuerza generada por la rotacin del roto es descrita como Fuerza centrifuga
relativa (FCR), tambin llamada Fuerza g, y es proporcional al cuadrado de la
velocidad del rotor y a la distancia radial (distancia de la molcula la cual es
separada del centro de rotacin).
La FCR es calculada usando la siguiente ecuacin:

F.C.R= 1,118x 10-5rn2

Siendo:
1,118x10-5 una constante.
r= radio de giro o la distancia horizontal (cm) desde el
eje de rotacin hasta el fondo del tubo.
n= velocidad de rotacin expresada en revoluciones
por minuto (r.p.m.).

La fuerza centrfuga relativa (F.C.R.) es la fuerza requerida para que se

produzca la separacin.
Las unidades de esta fuerza se expresan en nmero de veces el valor de la
gravedad =Xg (Unidades de fuerza gravitacional).
Un g es equivalente a la fuerza de gravedad. Dos g es el doble de la fuerza
de gravedad.
Por ejemplo:
Un FCR de 12 500 es 12 500 veces la fuerza de gravedad y es escrito como
12 500 X g.
A medida que la distancia desde el centro del rotor incrementa,
tambin la fuerza centrifuga.

En la mayora de las especificaciones de fbrica de los rotores se encuentran

tres mediciones del radio del rotor, las cuales son:
Radio Mnimo (rmin): distancia desde el centro del rotor al punto ms alto del
lquido en tubo centrifugado, al colocarse en el rotor en un ngulo particular.
Radio Mximo (rmax): distancia desde el centro del rotor al punto ms
alejado del tubo centrifugado, lejos del centro de rotacin

Radio promedio (ravg): Igual al radio mnimo ms

el radio mximo divido entre dos.

Problema:
Clulas de E. coli sern centrifugadas en un rotor SS-34 (radio mximo
de 10.7 cm) a 7000 rpm. Cul es el FCR (Fuerza g)?
Solucin:

Por lo tanto, 7000 rpm en un rotor SS-34 es equivalente a 5856 x g

Cmo convertir Fuerza g a revoluciones por minuto (rpm)?

Problema:
El protocolo de un artculo cientfico
describe una centrifugacin a 6000 x g.
Qu rpm deber ser utilizado con un
rotor SS-34 (radio mximo de 10.7
cm)para conseguir esta Fuerza g?
Solucin:

Por lo tanto, un rotor SS-34 deber

girar a 7100 rpm para obtener
6000 x g

Nonograma para determinar fuerza g y revoluciones por minuto (rpm)

Representacin grfica de la relacin entre rpm, Fuerza g y el

radio del rotor.

Problema:
Un rotor con un radio giratorio de 7.5 cm es utilizado para sedimentar a una
muestra con clulas. Las clulas sern centrifugadas a 700 x g. Qu rpm
deber ser utilizado?
Solucin:

Calculando tiempos de sedimentacin

El tiempo (en horas) requerido para sedimentar una partcula en agua a
20C a travs de la mxima longitud de trayectoria del rotor (distancia entre
rmin y rmax) est dada por la ecuacin:

Siendo:
t: tiempo de sedimentacin en horas
k: factor clearing (aclaramiento) del rotor, representa la
eficiencia de sedimentacin relativa del rotor dado de una
centrifuga a mxima velocidad de rotacin.
s: coeficiente de sedimentacin de la partcula centrifugada en
agua a 20C expresada en unidades Svedberg

Mide la eficiencia de
sedimentacin del rotor.
El factor de aclaramiento, k,
est definido por la ecuacin:

Su valor decrece al incrementar

la velocidad del rotor.
Al ser ms bajo el factor k, ms
eficiente es la habilidad del rotor
para sedimentar una partcula
deseada.
El factor k para cualquier rotor es
provedo por el fabricante,
asumiendo que el fluido a
centrifugarse tiene la densidad del
agua a 20C
El factor k aumentar si el medio
tiene una mayor densidad o
viscosidad que el agua.

Muchos factores afectan el rango en el que una particular molcula

biolgica sedimentar durante la centrifugacin a travs de un medio.
Tamao
Forma
Flotabilidad

Una molcula con un alto peso molecular sedimentar ms rpido

que una con un bajo peso molecular.

Una Unidad Svedberg describe el rango de sedimentacin de

una molcula y est relacionada con su tamao.
Est expresada como una dimensin de tiempo, de manera que 1
Unidad Svedberg es igual a 10 -13 sec.
Para la mayora de las molculas biolgicas, el valor de la Unidad
Svedberg radica entre 1S (1 Unidad Svedberg; 1 x10-13 sec) y
200 S (200 Unidades Svedberg; 200 x 10-13 sec)
El nombre de las subnidades ribosomales 30S y 50S de E.coli,
por ejemplo, derivan de sus rangos de sedimentacin expresadas
en Unidades Svedberg.

Problema:
Un rotor SS-34 tiene un rmin de 3.27 cm y
un rmax de 10.70 cm para un tubo sellado
conteniendo el volumen mximo permitido.
Si una molcula 120S ser centrifugada en
un medio acuoso a 20, 000 rpm a 20C.
Cunto durar sedimentar esta molcula?
Solucin:
El factor k primero debe ser calculado.
Sustituyendo los datos en la ecuacin
dada

Por lo tanto, un rotor SS-34 girando a

20,0000 rpm tiene un valor de factor k de
746

Por lo tanto, par sedimentar una molcula

120 S, deber girar en un rotor SS-34 a
20,0000 rpm por 6 horas y 14 minutos.