INTRODUCCIN A LA

METROLOGA QUMICA
QUMICO LANDER PREZ

ESQUEMA DE UN ANLISIS COMPLETO

Actualmente los laboratorios analticos independientemente de que se dediquen a
la investigacin o estn vinculados a la industria se enfrentan diariamente a
problemticas mucho ms complejas que hace varias dcadas.
El surgimiento de nuevos materiales implica la consideracin de nuevas matrices y
nuevos analitos. Si se enfoca esta realidad desde el punto de vista qumico,
encontramos una gran cantidad de materiales de diversa naturaleza y estado
fsico, que pueden estar compuestos por un nmero elevado de sustancias
qumicas, dentro de las cuales nos puede interesar uno, varios o todos los
componentes, los cuales pueden estar presentes a su vez en diferentes
concentraciones.

ESQUEMA DE UN ANLISIS COMPLETO

Lo ideal sera contar con un mtodo analtico que requiera del mnimo nmero de
operaciones, con el mnimo de muestra, en el cual el resultado pueda ser obtenido de
forma rpida y a bajo costo y que cuente con adecuados criterios de calidad.

ESQUEMA DE UN ANLISIS COMPLETO

En la prctica nos enfrentamos a mltiples dificultades entre las que podemos citar la
complejidad de la matriz.

Otra dificultad muy comn es no contar con una metodologa apropiada que se ajuste
perfectamente a nuestra situacin( nos obliga a adoptar procedimientos ya reportados en
la literatura cientfica, o a cambiar algunos de los pasos fundamentales.)

Por otra parte cada vez aumentan ms las exigencias de calidad para la aceptacin de un
mtodo analtico, lo que exige esfuerzo y un riguroso tratamiento estadstico que permita
considerar el resultado como confiable.
Factores tan importantes como son el tiempo y el costo del anlisis. En ocasiones se nos
exigen resultados rpidos, por lo que al disear la metodologa del anlisis debe
contemplarse este aspecto. El costo es tambin esencialmente importante, sobre todo en
nuestras condiciones.

ESQUEMA DE UN ANLISIS COMPLETO

El camino que conduce al conocimiento de la composicin total o parcial de una

matriz requiere indiscutiblemente de esfuerzo intelectual, aptitud, experiencia,
intuicin y sobre todo de un adecuado criterio qumico analtico. Este criterio tiene
muchas veces ms peso que la disponibilidad de grandes y costosos instrumentos.
La solucin es llegar a una metodologa analtica que permita transformar el
material en una muestra medible y que a su vez obtengamos resultados que
puedan considerarse confiables.

ERRORES EN EL ANLISIS CUANTITATIVO

Por ms minuciosamente que se efecta una determinacin cuantitativa, el

resultado obtenido, como regla, siempre difiere algo del contenido verdadero de la
sustancia estudiada, es decir, est afectado por un cierto error.

ERRORES EN EL ANLISIS CUANTITATIVO

CLASIFICACIN:
1. Errores determinados o sistemticos
2. Errores indeterminados o accidentales.

ERRORES EN EL ANLISIS CUANTITATIVO

Errores determinados o sistemticos :

Son los errores del mismo signo debidos a causas definidas que influyen en el
resultado, aumentando o disminuyndolo. Estos errores generalmente se puede
prever y eliminar o efectuar correcciones correspondientes.
Errores del mtodo (particularidades del mtodo)
Errores debido a los instrumentos y a los reactivos empleados
Errores de operacin (operaciones analticas)
Errores personales

ERRORES EN EL ANLISIS CUANTITATIVO

2. Errores indeterminados o accidentales.

Estos errores se manifiestan en las pequeas diferencias de los resultados en las
determinaciones repetidas de cierto elemento en la muestra dada, efectuadas por un
mismo mtodo.
No se pueden tener en cuenta ni eliminar, introduciendo ciertas correcciones.
Es posible disminuirlos apreciablemente, aumentando el nmero de determinaciones
paralelas.
La tarea del anlisis es encontrar el valor ms probable de la magnitud que se
determina y evaluar la precisin del resultado obtenido (desviacin estndar).

ENFOQUE ANALTICO

A la cadena de operaciones que se construye a partir del cuestionamiento de

aspectos esenciales para la realizacin del anlisis, es la base del denominado
Enfoque Analtico.

ENFOQUE ANALTICO
Qu especie (o especies) quiero medir y en que matriz se encuentran?
En qu rango de concentraciones estn presentes?
Qu operaciones o procesos qumicos, fsicos o biolgicos pueden afectar la
concentracin o la estabilidad de las especies objeto de estudio?
Qu tcnica analtica es la adecuada para el estudio de dichas especies?
Qu componentes propios de la matriz pueden constituir interferencias en el
anlisis?
Qu nivel de precisin y exactitud requiere el mtodo analtico para cumplimentar
el objetivo propuesto?
Qu materiales y equipos se necesitan para ejecutar el proyecto?

ESQUEMA DE UN ANLISIS COMPLETO

Se define como una serie de etapas y operaciones comunes a cualquier mtodo
analtico, que es necesario considerar a la hora de realizar el anlisis:
ETAPAS
Definicin de los objetivos
Seleccin del mtodo analtico
Muestreo
Preparacin de la muestra
Determinacin
Clculos, reporte e interpretacin de los resultados.

DEFINICIN DE LOS OBJETIVOS.

La definicin de los objetivos es la etapa que permite trazar la estrategia de
anlisis sobre la base de las respuestas a las primeras interrogantes que habamos
planteado:
Qu especies se van a determinar, o lo qu es lo mismo, quin o quienes son los
analitos?
En qu matriz se encuentran?
Qu tipo de anlisis necesito realizar? En este caso nos estamos refiriendo a
definir si es necesario realizar una cuantificacin o si la simple deteccin cualitativa
es suficiente.
Para analistas experimentados esta etapa pudiera parecer trivial, sin embargo en el
caso de los estudiantes, o de analistas de poca experiencia es necesario dejar clara
la diferencia entre objetivo analtico y el problema a resolver.

SELECCIN DEL MTODO ANALTICO.

La seleccin del mtodo analtico ha sido considerada siempre como una de las
etapas de mayor importancia en el esquema de un anlisis completo. Para la correcta
seleccin del mtodo adecuado para la realizacin de un anlisis es necesario
considerar diferentes aspectos tales como:
Caractersticas del analito
Caractersticas de la matriz
Validacin del mtodo analtico

 Caractersticas del analito:

En este sentido debemos considerar la naturaleza qumica y las propiedades fsico
qumicas del componente que se desea cuantificar. No existe ningn mtodo analtico
universal, es decir que sea aplicable a la determinacin de toda clase de analitos.

 Caractersticas de la matriz:
Obviamente dentro de las caractersticas importantes a considerar est el estado de
agregacin y la complejidad de la matriz. No es lo mismo realizar un anlisis sobre un
producto lquido que sobre uno slido, puesto que la matriz ha de sufrir diferentes
tratamientos en funcin de su estado de agregacin. As mismo, estos tratamientos
sern ms engorrosos en la medida que la matriz sea ms compleja, es decir, posea
un mayor nmero de componentes, puesto que entonces el mtodo seleccionado ha
de ser ms especfico a fin de determinar solo aquella sustancia que interesa (analito)
en presencia de un gran nmero de otras sustancias que coexisten en la matriz.

Validacin del mtodo analtico:

El trmino validacin est directamente relacionado con la palabra calidad. En
trminos generales validacin es el programa mediante el cual se establecen los
requisitos ptimos para cumplimentar el objetivo propuesto. De hecho pueden ser
validados los mtodos analticos, los instrumentos, el personal etc. y en este sentido
aumentan cada da ms las exigencias a nivel internacional.

VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO

La validacin del mtodo analtico es el proceso que permite
establecer qu caractersticas del funcionamiento del mtodo
analtico son adecuadas para la aplicacin que se pretende.
El objetivo principal de la validacin analtica es el de asegurar
que un procedimiento analtico dar resultados reproducibles
y confiables que sean adecuados para el propsito previsto.

VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO

Hay importantes razones para validar los mtodos de anlisis.
1. En primer lugar la validacin es una parte integral del
desarrollo de un mtodo analtico,
2. Las Buenas Prcticas de Elaboracin as lo exigen.
3. Desde el punto de vista comercial los mtodos validados
permiten obtener datos fiables por lo que se facilitan las
transacciones comerciales basadas en la aceptacin mutua
de los resultados.

VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO

Los requisitos o criterios de validacin que debe cumplir un mtodo
analtico y que deben ser determinados en el procedimiento de
validacin, segn lo estipulado por diferentes organizaciones
internacionales son los siguientes.
Exactitud (Precisin y Veracidad o Justeza)
Selectividad
Linealidad
Sensibilidad de calibrado
Lmite de deteccin y lmite de cuantificacin
Robustez

1. EXACTITUD

La Exactitud indica la capacidad del mtodo analtico para dar resultados lo

ms prximo posible a un valor verdadero.
Se define segn la norma ISO 5725-1 (1994) como la proximidad de
concordancia entre el resultado de un ensayo y el valor de referencia
aceptado.(concepto cualitativo)

PRECISIN

Es el grado de correlacin o cercana entre los resultados analticos

individuales que se obtienen al aplicar repetidamente el mtodo a varias
muestras, de una homognea comn.(errores aleatorios)

PRECISIN
La necesidad de considerar este parmetro surge debido a que las
determinaciones analticas que presumiblemente se realizan con idnticos
materiales e idnticas condiciones de trabajo, en general, no arrojan
idnticos resultados. Esto se atribuye a los inevitables errores aleatorios
inherentes a cada proceso de determinacin dado que los factores que
influyen sobre el resultado de una determinacin no pueden ser controlados
completamente.
Diferentes factores pueden contribuir a la variabilidad de los resultados de
un mtodo de determinacin. Estos incluyen:
El analista

El equipamiento utilizado

La calibracin del mismo

El medio ambiente (temperatura, humedad, contaminacin del aire, etc.)

El tiempo que separa la realizacin de las mediciones

PRECISIN
La precisin puede expresarse en dos niveles:
Repetibilidad:
Es la precisin entre determinaciones independientes realizadas en las
mismas. Se lleva a cabo sobre la base de un nmero suficiente de
determinaciones de una mezcla homognea del producto. Los ensayos en
este contexto, son los anlisis independientes de muestras que han pasado
por todo el procedimiento analtico, desde la preparacin de la muestra
hasta los resultados de las pruebas finales. La repetibilidad describe la
variabilidad mnima del proceso analtico.
Reproducibilidad:
Es la precisin entre determinaciones independientes realizadas bajo
diferentes condiciones. La reproducibilidad describe la mxima variabilidad
de un procedimiento analtico ya que incluye el estudio en diferentes
condiciones.

PRECISIN

Para llevar a cabo los estudios de Repetibilidad y Reproducibilidad generalmente esta

reconocida la realizacin de al menos 7 determinaciones para cada uno (IUPAC,
2002); aunque se conoce que la estimacin de la precisin puede mejorarse
incrementando en numero de determinaciones en la muestra. Tambin pueden
realizarse estudios de Reproducibilidad Interlaboratorios, los cuales reflejan la
medida de competencia tcnica que presentan los centros de donde se obtendrn
los resultados.

PRECISIN

Los valores de coeficiente de variacin

reportados para que un mtodo
analtico sea considerado preciso, se
mueven en rangos mas o menos
amplios en la literatura cientfica que
aborda esta temtica.

VERACIDAD O JUSTEZA

Indica la capacidad del mtodo analtico para dar resultados lo ms prximo posible
al verdadero valor. Si la diferencia entre el valor hallado y el valor verdadero es
pequea, la exactitud es buena. Una diferencia grande significa que la exactitud es
inadecuada y revela la existencia de errores determinados que deberan corregirse
(expresado como %R).

VERACIDAD O JUSTEZA

La determinacin del %R se puede llevar a cabo a travs de tres procedimientos:

A.) anlisis repetido de una muestra de concentracin nica conocida,
B.) mtodo de adicin de patrn y
C.) comparacin con otro mtodo analtico ya validado.

VERACIDAD O JUSTEZA

A.) anlisis repetido de una muestra de concentracin nica conocida,

La muestra generalmente ser una solucin de concentracin conocida formada por
adicin de una cantidad nica de patrn de analito.
Esta solucin se analiza varias veces (n = 6 10) por el mtodo que se evala y se
calcula el % de recuperacin.

VERACIDAD O JUSTEZA

A.) anlisis repetido de una muestra de

concentracin nica conocida,(9.09)
Este procedimiento posee el
inconveniente de realizar el anlisis en
una solucin patrn del analito y no
sobre la matriz, por lo que no considera
la influencia de posibles sustancias
interferentes que pudieran existir en la
matriz.

VERACIDAD O JUSTEZA
B) Mtodo de adicin de patrn.
En este caso se trabaja con el extracto del
analito obtenido de la matriz original por un
procedimiento adecuado. De esta solucin
se toman como mnimo dos alcuotas, a una
de ellas se le aade una cantidad conocida
de un patrn de referencia del analito, y
ambas se analizan en paralelo.
Los resultados obtenidos de ambas
determinaciones se procesan y la diferencia
indica la cantidad cuantificada del patrn
aadido por el mtodo en cuestin.

VERACIDAD O JUSTEZA

Un patrn de referencia es una sustancia de

elevada pureza y estructura y composicin
idnticas al analito que se determina. As por
ejemplo, un patrn de referencia de la vitamina
C consiste en cido ascrbico altamente puro.
Hoy en da se comercializan patrones de
referencia para casi todas las sustancias
conocidas y usualmente se adquieren a altos
precios.

VERACIDAD O JUSTEZA
C) Comparacin con otro mtodo
analtico ya validado.
Otra posibilidad para conocer la
exactitud de un mtodo analtico es la
comparacin de los resultados
obtenidos por este, con los resultados
obtenidos a travs de otro mtodo ya
validado.
En este procedimiento se parte de una
muestra homognea que se analiza
repetidamente (n > 6) por el mtodo
analtico nuevo y por el mtodo de
referencia.

2. SELECTIVIDAD
La selectividad o especificidad se define como la capacidad de un mtodo analtico
para medir exacta y especficamente el analito, sin interferencia de impurezas u
otros componentes que puedan estar presentes en la muestra.
La selectividad es una condicin esencial para conseguir una buena exactitud, por
lo que constituye un criterio clave en la validacin de un mtodo analtico.
La selectividad depende de las caractersticas del propio mtodo analtico y de las
caractersticas de la muestra (matriz) que se analiza.

3. LINEALIDAD
Se entiende por Linealidad la capacidad de un
mtodo
analtico
de
obtener
resultados
proporcionales a la concentracin de analito en la
muestra dentro de un intervalo determinado.
El ensayo de Linealidad puede efectuarse tanto
sobre soluciones de concentraciones crecientes
del analito que se determina o sobre muestras
problemas a las que se han adicionado cantidades
crecientes de un patrn del analito. En ambos
casos el procedimiento se conoce como curva de
calibracin o curva de calibrado.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
Una curva de calibracin es la representacin
grfica de una seal que se mide en funcin
de la concentracin de un analito. La calibracin
incluye la seleccin de un modelo para estimar
los parmetros que permitan determinar la
linealidad de esa curva. y, en consecuencia, la
capacidad de un mtodo analtico para
obtener resultados que sean directamente
proporcionales a la concentracin de un
compuesto en una muestra, dentro de un
determinado intervalo de trabajo.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
En el procedimiento se compara una
propiedad del analito con la de
estndares de concentracin conocida
del mismo. Para realizar la
comparacin se requiere utilizar
mtodos y equipos apropiados para la
resolucin del problema de acuerdo al
analito que se desee determinar.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
La etapa de calibracin analtica se
realiza mediante un modelo de lnea
recta que consiste en encontrar la
recta de calibrado que mejor ajuste a
una serie de n puntos
experimentales, donde cada punto
se encuentra definido por una
variable x (variable independiente,
generalmente concentracin del
analito de inters) y una variable y
(variable dependiente, generalmente
respuesta instrumental).
y = mx + b .

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
A partir de la curva de calibracin y
a fin de asegurar que la recta
encontrada con los puntos
experimentales se ajuste
correctamente al modelo matemtico
de la ecuacin se calculan los valores
de la ordenada al origen, la pendiente
y el coeficiente de determinacin (r2).

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
Por tener una buena exactitud y
confiabilidad estadstica, el mtodo
ms empleado para encontrar los
parmetros de la curva de calibrado es
el mtodo de los mnimos cuadrados
Este mtodo busca la recta del
calibrado que haga que la suma de
los cuadrados de las distancias
verticales entre cada punto
experimental y la recta de calibrado
sea mnima o tienda a cero. A la
distancia vertical entre cada punto
experimental y la recta de calibrado se
le conoce como residual.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
En la prctica para construir la curva de
calibracin
se
utilizan
disoluciones
que
contienen concentraciones
conocidas
de
analito, llamadas disoluciones patrn o
estndar. Los estndares o disoluciones patrn
para construir la recta de calibrado deben ser
preparadas en forma independiente, a partir de
una o varias soluciones madre; el nmero de
puntos a escoger depender del uso que se d a
la recta de calibrado.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS

La verificacin del comportamiento

de un analito mediante una curva de
calibracin requiere un mnimo de
cinco puntos
para
un intervalo de
confianza del 95 % y de ocho puntos
para uno del 99 %.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
BLANCO. Definido por IUPAC como la lectura resultante originada por la matriz, los
reactivos o cualquier otra medida residual debida al instrumento a al proceso de
medicin, que contribuye al valor obtenido en el proceso analtico para el
mensurando.
Los blancos miden la respuesta del procedimiento analtico a las impurezas o
especies interferentes que existan en los reactivos o, simplemente, a las especiales
caractersticas del instrumento de medida.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
Independientemente de la tcnica instrumental responsable de la seal analtica
los parmetros que se determinan a partir de las curvas de calibracin obtenidas con
cualquiera de ellas son:

linealidad

la sensibilidad

lmite de deteccin

lmite de cuantificacin

intervalo analtico

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
Linealidad del sistema de medicin
La linealidad de la curva de calibracin es
un requerimiento fundamental en la
prctica del anlisis qumico cuando se
realizan curvas de calibracin. En general
la linealidad no se cuantifica pero se
observa por simple inspeccin o
mediante pruebas significativas de no
linealidad. (r2>0,98)

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
Sensibilidad.
La sensibilidad de mtodo mide su
capacidad para discriminar entre
pequeas diferencias en la concentracin
del analito. Dos factores limitan la
sensibilidad. la pendiente de la curva de
calibracin y la precisin del sistema de
medida.
Para dos mtodos que tengan igual
precisin, el que tenga la mayor
pendiente ser el ms sensible

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
Lmite de deteccin (LD).
En general este trmino se define como la
mnima concentracin del analito
detectable por el mtodo. Su
determinacin es importante pero los
problemas asociados con ella son diversos;
estos problemas han sido estadsticamente
estudiados y varios criterios de decisin
han sido propuestos. Aunque ninguno es
universal uno de los ms aceptables es
el de la concentracin que correspondera
a la medida del promedio del blanco+ 3s.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
Lmite de cuantificacin (LC)
Llamado
tambin
lmite
de
determinacin, se define como la ms
pequea concentracin del analito que
puede ser determinada con un nivel de
exactitud y
precisin
aceptables.
Dependiendo del convenio utilizado
se considera como la concentracin
de analito que corresponde al valor del
promedio del
blanco
mas 5, 6 o 10
veces la desviacin estndar del mismo.

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS
Intervalo analtico.
Est definido como el intervalo de
concentracin en que el analito puede
ser determinado mediante la utilizacin
de la curva de calibracin; se considera
que es el comprendido entre el lmite
de
cuantificacin
hasta
la
concentracin en la cual se pierde la
linealidad de la curva

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS

MTODOS ANALTICOS

Albmina srica.
Se conoce que el promedio de 10
mediciones del blanco fue 0.015 con una
desviacin estndar de 0.002
En esta curva se observa linealidad
hasta valores de absorbancia iguales a
0.4; este valor corresponde a una
concentracin igual a 0,0207 mol//L El
coeficiente de correlacin de la curva
considerando nicamente estos cuatro
puntos es igual a 0,9987 mientras que
si se consideraran todos ellos el
coeficiente de correlacin sera igual a
0,9382.

 Robustez
El estudio de robustez investiga la influencia de pequeos cambios en las condiciones
analticas sobre la fiabilidad del mtodo analtico, localizando los factores que
originan fluctuaciones menores y los que necesitan una atencin especial por cuanto
originan variaciones significativas.
Esto se realiza cuando se precisa un estudio completo de reproducibilidad, como es
caso de un estudio interlaboratorios, por lo que el laboratorio que ha desarrollado el
mtodo analtico debe efectuar previamente el estudio de robustez.