Esterilizacin de

medios de cultivo

Esterilizacin
Conceptos bsicos
Lasfermentacionessedebenllevaracaboconcultivos puros,dadoquelapresenciade
otrosmicroorganismospuedeproducircompetenciaporlosnutrientesy/oproduccinde
compuestosqueinhibanlaproduccindeproductosdeinters,porellose necesita que
al iniciodelafermentacinelsistemaseencuentre libre de m.o.
Existenprocesosquenecesitanquelos efluentes se encuentren libre de m.o.,eselcaso
delasetapasfinalesdelosprocesosdetratamientos de agua servidasoRILes.

Para mantener las condiciones de asepsia se pueden aplicar procesos de:

1.

Esterilizacin: Erradicacin, remocin, destruccin o inactivacin de todo

tipodevida,detalmaneraquelasclulasremanentesnopuedanreproducirse,
esdecir,unaeliminacindelacapacidad de reproduccin.

2.

Desinfeccin: Remocin, destruccin o inactivacin de esas clulas que

podrancausar deterioroenelmedio(notodaslasclulas).

3.

Pasteurizacin: Remocin,destruccinoinactivacindetodolos patgenos

viables naturales por medio de tratamiento trmico tanto para slidos como
lquidos.

Elementos que se deben esterilizar

1.

Fermentador

2.

Equiposaccesorios
1.

Mangueras

2.

Electrodos

3.

Agitadores

4.

Filtros

3.

Mediodecultivo

4.

Airequecirculaporelfermentador
1.

Entrada

2.

Salida

Mtodos de esterilizacin
Mtodo

Condiciones

Uso

Observaciones

Calor Hmedo
(Vapor)

121C(250F)
14.7psig
15minutos

MediosLquidos
Slidos

Barato
Eficiente

CalorSeco

130-150C
1-2horas

ElementosdeVidrio
Slido

Mscaroqueelcalorhmedoyms
lento.

0.2m

Paraproductossensiblesala
temperatura,talescomoenzimas,
aire.

Agentes
Qumicos

Noseutiliza enmedios,
pues puede permanecer
e impedir el crecimiento
delosm.o.

CapacidadOxidativaoalcalina:

Mecnicos

Filtracin

Radiacin:
Ultravioleta,
RayosX

Cloracinquerequieredeetapas
posterioresparaeliminarelcloro.
Ozonificacin.
Vibracin
Ultrasonido
Centrifugacinaaltavelocidad
DegradacindelDNA
Utilizadaentratamientodeefluentes
conflujosbajos

Esterilizacin Qumica

Esterilizacin Qumica
No se utiliza ampliamente dado que la mayora de los desinfectantes
tienenbajaaccin.Adicionalmentepuedeninterferirenelcrecimientode
losm.o.

Sebuscanagentesque:

Actenenformarpida
Noseancaros
Noseaninflamables
Noseanexplosivos
Noseantxicos

Losmsutilizadosson:
-propiolactona
Oxidodeetileno(enmediofrio)
Fenolocompuestosfenlicos(Crestol,ortofenilfenol)
Alcoholes:Etanol,Metanol
Halgenos:Hipoclorito,Cloroaminas.

ESTERILIZACIN DE MEDIOS
LQUIDOS

Cintica de muerte de los microorganismos

Lacinticadeinactivacindelosm.oesunacinticadeprimerordenrespectaalnmerodem.o.
Seexpresacomo:
- dN/dt = k N

(1)

Donde:
Cintica de Inactivacin

N:Nmerototaldeclulasviables;
t:tiempodeesterilizacin

Num e ro m .o.

k:Constantededecaimientoomuerte,esfuncindelatemperatura,
SudependenciaconlatemperaturaesdeltipoArrhenius:.

0,8
0,6
0,4
0,2
0
1

7
Tiem po

k ko e

Ea
)
RT

T=f(t)

11

13

Si se integra la expresin (1) se tiene:

t
t
N
k dt N N o exp( k dt )
ln
No 0
o

Si se trabaja a temperatura constante se tiene:

N N o . exp(k .t )

donde No es el nmero de m.o iniciales en el sistema.

Diseo de procesos de esterilizacin

Objetivo:Determinarelciclodeesterilizacin
SedefineelfactorDEL,(CriteriodeDiseo),como:

No
k dt
ln
Nt 0
t

Total

Donde:Nonmerodemicroorganismosiniciales
Ntnmerodemicroorganismosfinales.

Loscriteriosdediseoson:
1. Sinoseconocek.
2. Imposibilidad de esterilidad absoluta, grado de
esterilidad,deseableallegarNt=10-3esporasom.o
(estadstico).
3. Silaesterilidadinicialesdesconocida,seasumeuna

9
N
0
concentracin,,delordende10
esporas/Litro.

N N .V

V:Volumendeliquidoaesterilizar

Procesos de esterilizacin

K K 0e

E
RT

Elprocesodeesterilizacindiscontinuacomprendetresetapas:
a)Etapadecalentamiento
b)Etapademantencin
c)Etapadeenfriamiento

PorlotantoelfactorDELpuede
dividirseenestastresetapas:

Total calentamiento mantencin enfriamiento

Esterilizacin Batch
Lasetapasdecalentamientoy/oenfriamientopuedenser:
ParaCalentamiento

a)VaporDirecto(Modelohiperblico)

b)ResistenciaElctrica(ModeloLineal)
c)Camisadecalefaccinconfuenteisotrmico(ModeloExponencial)

Vapor
Camisa de Vapor
Resistencia
Elctrica