VALIDACIN DEL MTODO DE

SCREENING CON PAPEL CYANTESMO

PARA ANLISIS DE CIANURO EN
SANGRE
Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias
Forenses - Laboratorio de Toxicologa - RB

Emperatriz Ch. De Motta Q.F.

Teresa Prez H. Q.F.
Bogot, Noviembre 2000

Cianuro - Objetivos
OBJETIVO GENERAL: Validar el mtodo de
screening de cianuro en sangre con papel
cyantesmo.
OBJETIVOS SECUNDARIOS

Optimizar los parmetros para la extraccin

Validar los parmetros de desempeo del
mtodo
Aplicar el mtodo a muestras forenses

Cianuro - Muestras 1

Recoleccin rpida por transformacin en tejidos postmorten

para evitar prdida

En intoxicacin oral hay aumento leve en hgado y pulmn,

probablemente por difusin del estmago

La concentracin de cianuro es 3 veces mayor en hgado que

en msculo esqueltico, pero la velocidad de transformacin
es el doble en hgado que en msculo esqueltico. Por lo
tanto el cianuro no se debe medir en hgado despus de 12 h
y en msculo esqueltico despus de 28 h.

Cianuro - Muestras 2

Antes de analizar sangre procedente de autopsia, se

recomienda homogenizarla con ultrasonido u otro
mtodo.

El retraso en el anlisis de cianuro en fluidos y tejidos

biolgicos puede resultar en cambios en la
concentracin

Los cambios en la concentracin de cianuro en sangre

son menores a -20 C y mximos a temperatura
ambiente (20C).

Cianuro - Muestras 3

En intoxicacin aguda no se detect a los 3 das

en rin e hgado, a los 7 das en cerebro y a los
14

das

en

pulmn,

se

encontraron

concentraciones significativas en sangre total a

las 3 semanas.

En concentracin baja, las muestras deben ser

analizadas tan pronto como sea posible, en caso
contrario se deben almacenar a 4 C.

Cianuro - Muestras 4

En concentraciones bajas: No almacenar a -20 C

por que en el proceso de congelacin descongelacin se puede presentar hemlisis
mecnica y conversin del tiocianato plasmtico
en cianuro, en presencia de hemoglobina libre en

medio cido.
Se puede encontrar cianuro postmorten, el cual se
ha reportado en sangre, cerebro, hgado, rin,
tero y contenido gstrico.

Cianuro - Muestras 5

Se ha demostrado produccin de cianuro en

contenido estomacal en humanos, con
concentraciones mximas de 7 a 14 das y
luego
disminucin
lenta
de
la
concentracin, debido a la presencia de
microorganismos
tipo
Pseudomonas
aeurginosa, fluorescens, Chromobacterium
violaceum, entre otras.

Cianuro - Mtodos 1
Pruebas

de screening o tamizaje:

Prueba del papel Cyantesmo en sangre

Pruebas de Coloracin en destilado de
contenido gstrico o de otra vscera,
recibidos en hidrxido de sodio al 10%.
Azul de Prusia
Prueba de volumetra

Cianuro - Mtodos 2

Pruebas de confirmacin
Prueba espectrofotomtrica
Anlisis por cromatografa de gases con
detector de captura de electrones y HS
Anlisis por cromatografa de gases/NPD y
HS.
Anlisis por electrodo de iones especficos

Cianuro - Validacin 1
Diseo experimental
aleatorizado:
Variables de estudio:

simple

completamente

Temperatura de incubacin: 35C - 40 C

Volumen de muestra: 1 - 2 ml
3 replicas para cada nivel de la variable.

Respuesta final: comparacin del color de la tira entre una

solucin acuosa de cianuro y la muestra de sangre en un nivel de
concentracin de cianuro de 1 mg/L.

Cianuro - Validacin 2

El mtodo trabajado es de tipo semicuantitativo, por lo

cual se validaron los parmetros de rango de respuesta,
lmite de deteccin, especificidad e ndice de concordancia

Parmetros de la validacin:
Rango de respuesta: Se determin realizando una curva
de calibracin preparada en agua y en sangre, se
compararon las intensidades del color del papel
tomando como referencia la curva preparada en agua,
en el rango recomendado por la tcnica.

Cianuro - Validacin 3

Lmite de deteccin: se determin analizando

muestras de sangre enriquecidas con cianuro en
concentracin de 1 mg/L, realizando diluciones a
partir de esta solucin.
Especificidad: Se determin analizando muestras
de sangre en diferentes envejecidas y muestras
de sangre enriquecidas con sulfuro de sodio con
el fin de determinar el efecto de la presencia de
estas sustancias, descrito para esta tcnica

Cianuro - Validacin 4

Indice de concordancia: Se
determin de acuerdo a los
resultados obtenidos entre
diferentes peritos, al aplicar el
mtodo a muestras preparadas en el
laboratorio y muestras forenses

Cianuro - Resultados 1
Optimizacin de las condiciones de trabajo:

Temperatura de trabajo: 35 C

Volumen de la muestra: 1 ml

PARMETROS DE VALIDACIN

Rango de trabajo

0,5 a 5,0 mg/L

Lmite de deteccin

0,5 mg/L

Indice de concordancia

100 %

Cianuro - Resultados 3

Especificidad
Muestras que presentan sntomas evidentes de
descomposicin (olor caracterstico, cambio en la
textura y cambio de color) alteran el color original
del papel Cyantesmo.
Las muestras con presencia de sulfuro hacen virar
el color del papel a amarillo marrn, no permitiendo
reconocer la presencia de cianuro.

Cianuro - Procedimiento 1
Colocar 1 ml de muestra, calibrador, control o blanco en
tubo de ensayo taparosca de 12 ml de capacidad
Agregar 200 l de solucin saturada de acetato de
plomo, mezclar.
Agregar 1 ml de cido sulfrico 3.6 M.
Colocar una tira de papel Cyantesmo
sobre la boca del tubo.

(0.8 a 1.0 cm)

Colocar sobre el papel una tira pequea de Parafilm

Colocar inmediatamente la tapa rosca.

Cianuro - procedimiento 2
Sellar el cierre del tubo con otra tira de Parafilm

para asegurar la

hermeticidad
Agitar en equipo Vortex por 10 segundos.
Incubar los tubos a 35C hasta el desarrollo de color azul en los
tubos que contienen las soluciones de calibracin ms diluidas (5 h).
Levantar el papel de la tapa con una pinza.
Comparar el color en los tubos de las muestras con los colores de la
curva de calibracin.
Estimar el rango de concentracin de las muestras analizadas.

Cianuro - Procedimiento

El lote de trabajo comprende:

Control negativo
Curva de calibracin: 5,0 mg/L
Curva de calibracin: 2,0 mg/L
Curva de calibracin: 1,0 mg/L
Curva de calibracin: 0,5 mg/L
Curva de calibracin: 0,2 mg/L
Control de 0,75 mg/L
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Control de 0,75 mg/L

Cianuro - casos forenses

Total de muestras analizadas: 272, desde
marzo de 1999 a marzo de 2000
181 casos (66,5 %) se analizaron en otra
muestra biolgica (CGstrico, hgado) , por el
mtodo colorimtrico de azul de Prusia.
Se present concordancia en 174 casos (96,1
%), de estos fueron positivos por los dos
mtodos 39 casos y no detectados 135.

Cianuro - casos forenses

En 7 casos se present resultado positivo

por el mtodo del papel Cyantesmo en
sangre y resultado negativo en el hgado o
el contenido gstrico por el mtodo de Azul
de Prusia, estos casos pueden ser
explicados por el lmite de deteccin
diferente de los dos mtodos.

Cianuro - conclusiones

Se recomienda el uso del mtodo del papel

Cyantesmo como screening para cianuro en
sangre. De acuerdo a los datos se aument
la sensibilidad para detectar posibles
positivos por este mtodo con respecto al
azul de Prusia y facilit el anlisis en
sangre, la cual no se consideraba
anteriormente en este laboratorio Regional.