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la ecuacin M-M
Grfico Lineweaver y
Burck (L-B)
Eje X
1/[S]
Eje Y
1/V
Grfico Eadie
Scatchard (E-Scat)
Eje X
V
Eje Y
V/S
GRAFICO DE LINEWEAVER Y
BURCK
Llamado tambin Grfico de dobles
recprocas.
Su deduccin se inicia tomando la inversa de
la ecuacin de MM
V
= Vm [S]
Km + [S]
1
V
1
V
= Km
+
Vm . [S]
= Km . 1
Vm
[S]
[S]
Vm. [S]
1 .
Vm
Grfico L-B
Es un mtodo exacto pero deben tenerse
algunas consideraciones:
1) Las concentraciones elegidas deben estar
cercanas al Km
- Si son muy altas con respecto al Km la
recta tiende a ser horizontal
- Si son muy bajas con respecto al Km la
interseccin de la recta estar muy cerca al
origen
Ej : [S] >> Km
Km = 0.5 mM (1 / Km = 2)
[S1] =
10 20 -30 mM
-1
-1
Ej : [S] >> Km
Km = 2 mM (1 / Km = 0.5)
[S1] =
1 /[S1] = 10 5 03 mM-1
-0.5
10
determinan el trazado
Pequeos errores en la determinacin de la
velocidad magnifican la recproca, pueden
introducir errores significativos en la pendiente
m .
X = - Km
m = 1/Vm
Km/Vm
- Km
[S]
Grfico de Woolf-Augustinson
Hofstee
Grfico de Woolf-Augustinson
Hofstee
Simplificando y operando :
Operando y despejando V;
V=
Vm
Km/[S] + 1
V (Km/[S] + 1) =
Vm
Grfico de Woolf-Augustinson
Hofstee
Y calculando intercepto para y=0 :
X = - b/ m
V
X = Vm/Km
Vm
m = - Km
Vm/Km
V/ [S]
Vm
Km/[S] + 1
V (Km/[S] + 1) =
Vm
V (Km/[S] + 1) =
Km
Vm/Km
V/ [S]
Vm/Km
m = - 1/Km
Vm
Y calculando intercepto
para y=0 :
X = Vm
E1+ E2
E1
E2
INHIBIDORES
Inhibicin competitiva
Clsica
Excluyente
Mutuamente excluyente
Enlace compartido
Por sobreposicin
Cambio en la configuracin
Parte de la premisa
de semejanza
estructural con el
sustrato
Conocida tambin
como Inhibicin
por anlogo de
sustrato
Inhibidor
y Sustrato
compiten
por alcanzar
el centro activo
de la enzima
La semejanza
estructural no es un
condicionante
La unin de uno
impide la
insercin o
alcance del otro al
Inhibidor
y Sustrato
Son excluyentes por
generarse un
impedimento
estrico
I
S
La unin de uno
impide la
insercin del otro
al centro activo
Inhibidor
y Sustrato
Son excluyentes por
compartir un enlace
Comn sobre la enzima
(como en el aminocido
de unin)
I
S
La unin de uno
impide la
insercin del otro
al centro activo
No tienen
necesariamente
los mismos sitios
de unin, pero stos
se solapan
I
S
La unin de uno
impide la
insercin del otro
al centro activo
No tienen
necesariamente
los mismos sitios
de unin, pero stos
se solapan
I
S
S
La unin de uno
dificulta la
insercin del otro
al centro activo
I
Cada uno tiene un sitio
de unin diferente, pero la unin
de uno, origina cambio conformacional
E + S
Ks
E-S
+
I
Ki
E-I
Ki = [E] [I]
[E-I]
Kp
E + P
Acepciones
6. Distribucin de [ET] esta repartida en :
Por tanto :
V =
Kp . [E-S]
[Et]
V =
Vm . [ S ]
Km (1 +[I])+ [ S
]
Ki
Ecuacin de M_M para determinar velocidad
de reaccin Inhibida competitivamente