TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE

Es una molcula que proviene de la unin artificial

de dos fragmentos de ADN.

La tecnologa de ADN recombinante es el

conjunto de tcnicas que permiten aislar un gen
de un organismo, para su posterior
manipulacin e insercin en otro diferente.
Adems esta tecnologa nos permite obtener
fragmentos de ADN en cantidades ilimitadas
que llevaran los genes o gen qu se desee

Clulas ANFITRIONA O HUSPED

1. CLULAS BACTERIANAS:
Son las mas usadas, ya que tienen alta velocidad de
replicacin, un bajo costo de mantenimiento de las
colonias y son fcilmente manipulables.
2. LEVADURAS:
tiles en el procesos relacionados con la investigacin de
la expresin y en la regulacin gentica.
3.CLULAS TUMORALES:
Apropiadas en procesos de clonacin ya que la velocidad
de replicacin es muy alta y se mantienen los caracteres
sin producirse cambios, pues son muy estables.

LAS ETAPAS EN LA PRODUCCIN DE ADN RECOMBINANTE

1. PREPARACIN DE LA SECUENCIA
DEL ADN PARA SU CLONACIN.

2. PREPARACIN DE UN VECTOR DE
CLONACIN

.
Es la parte esencial del proceso, ya
que el ADN debe separarse y
concentrarse.

El vector es el portador de la
secuencia de ADN que se desea
clonar. Un vector debe presentar las
siguientes caractersticas:

.
Partimos de clulas con ncleo, que
deben ser lisadas (rotas).
.
Las protenas estructurales, enzimas
ARN y restos moleculares deben
separarse del ADN.
.
El ADN obtenido se concentra y se
fragmenta por accin de las enzimas
de restriccin.
.
Se asla el ADN que se desea clonar,
por ejemplo, mediante cromatografa
lquida o por centrifugacin.

Una pequea secuencia de ADN

fcil de aislar, como, por ejemplo,
un plsmido.
Contener
distintos
puntos
de ataque a enzimas de restriccin
y que sean conocidos.
Poder ser incluido en la clula
anfitriona con facilidad.
Replicarse de forma independiente
al ADN de la clula anfitriona.

LAS ETAPAS DEL PROCESO

CONSISTEN EN:
1. Cortar el vector con enzimas
de restriccin las mismas
enzimas que se utilizaron para
cortar el ADN que se quiere
insertar.
2. Unir el vector y el ADN que se
va a clonar mediante los
llamados extremos cohesivos o
pegajosos, o escalonados.
.Una vez que el ADN ha sido
introducido en el vector se
denomina ADN inserto.

3-

FORMACION DEL
RECOMBINANTE

ADN

La unin del vector y el ADN inserto

mediante una ligasa que se encarga
de realizar el sellado en toda la
secuencia las molculas resultantes
se llaman ADN recombinante.

4. INTRODUCCIN DEL ADN

RECOMBINANTE EN LA CLULA
ANFITRIONA
Para la clonacin (replicacin del ADN
recombinante) se necesita la maquinaria
celular. Por ello, hay que introducir el
ADN recombinante en una clula
anfitriona.

5. PROPAGACIN DEL CULTIVO

Se induce la divisin de clulas

anfitrionas, de forma que se
producen tambin copias de ADN
recombinante y por ello, la
clonacin.
Primero se efecta una siembra en
placas Petri con agar como medio
de cultivo. Se dejan crecer las
colonias.
Cada
una
de
ellas
ser
seleccionada y transferida a
distintos medios lquidos, donde
seguir aumentando el nmero de
individuos de la colonia.

6. DETECCIN Y SELECCIN DE
LOS CLONES RECOMBINANTES

La deteccin y la seleccin de
colonias se realiza en los medios de
cultivo.
En este proceso de la clonacin se
utiliza gran cantidad de clulas es
por eso al final del proceso se
necesita separar las clulas que
tienen ADN recombinante de las que
no la tienen.