003 Cinética Enzimática e Inhibidores

Cintica enzimtica
Manuel D. Concha
Toledo
20140901
UNIVERSIDAD PERUANA UNIN

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
E.A.P. de Nutricin Humana
Cintica enzimtica
Estudia las propiedades de la actividad
enzimtica y los factores que la
afectan

Velocidad enzimtica
Es la cantidad de producto formado
por unidad de tiempo
Generalmente se expresa en:

micromoles/minuto

Y = Cantidad de producto = Velocidad

X
tiempo
Producto
formado

Tiempo

Por qu la velocidad
de reaccin no es
indefinidamente
lineal?
Producto
formado
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Tiempo
Por lo siguiente:
La reaccin ha llegado al equilibrio
La enzima se desnaturaliza despus de un tiempo

El producto de la reaccin tiene un efecto inhibidor
sobre la enzima
Esquema de una reaccin

catalizada por enzimas
E
Enzima
+S
Sustrato
ES E
Complejo
enzima-sustrato
Enzima
+P
Producto

E+S
Sitio activo
ES
E+ P

Baja [S]:
Intermedia [S]:
Saturante [S]:
+
Exceso [S]
Gran Exceso [S]
+
Velocidad maxima = Vmax
Velocidad
de la
reaccin
Km = Vmax / 2
UNIVERSIDAD
PERUANA UNIN
Concentracin
de sustrato

Cul es la
relacin entre [S]
y la velocidad de
una reaccin
catalizada por
una enzima?
60
50
Velocidad
de la
reaccin
Velocidad maxima = Vmax
40
30
20
Km = Vmax / 2
10
0
Concentracin de sustrato
Son las siguientes:

A baja [S], la velocidad es directamente proporcional a [S]
A muy alta [S], la velocidad es independiente de [S] y es mxima
Existe una [S], en que la velocidad es la mitad de la Velocidad
UNIVERSIDAD
PERUANA UNIN
mxima (Vmax). Esta [S] se denomina FACULTAD
constante
de Michaelis
o Km
DE CIENCIAS DE LA SALUD
Constante de MichaelisMenten
Es
la
concentracin de
sustrato a la cual
la velocidad de
reaccin es la
mitad de la Vmax
(Km= Vmax/2)
Su smbolo es Km
La ecuacin matemtica
de MichaelisMenten relaciona [S] con la velocidad de

la reaccin, originando una curva
Constante de Michaelis-Menten
Es caracterstica de la enzima y particular
para un sustrato
Refleja la afinidad de la enzima por ese
sustrato en una relacin inversamente
proporcional
Km no vara con la concentracin de
enzima
Significado de una Km pequea

Refleja una alta afinidad de la
enzima por su sustrato, porque a una
baja concentracin del mismo, la
enzima a desarrollado ya la mitad de
la velocidad mxima

Significado de una Km grande

Refleja una baja afinidad de la
enzima por su sustrato, porque a una
concentracin elevada del mismo, la
enzima desarrolla la mitad de la
velocidad mxima

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de MichaelisMenten. Se dice que su cintica no es Michaeliana. Esto
ocurre con los enzimas alostricos, cuya grfica v
frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide. En
la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S]
en una zona crtica (cercana aFACULTAD
la Km)
se traduce en
DE CIENCIAS DE LA SALUD
Nutricin Humana
grandes variaciones en la velocidadE.A.P.
dedereaccin
Actividad enzimtica
El katal es una unidad de actividad
enzimtica
Se define como la cantidad de enzima
que transforma 1 mol de
sustrato/segundo
Su smbolo es kat

Factores que afectan la actividad

enzimtica
1.Concentracin de la enzima
2.Concentracin del sustrato
3.Temperatura
4.pH
5.Presencia de inhibidores
1. Concentracin de la enzima

2. Concentracin del sustrato
Si se mantiene constante la concentracin del E, la

velocidad de la reaccin aumenta exponencialmente al
incrementarse la concentracin del sustrato, ya que al
existir ms molculas de sustrato es ms probable el
encuentro con el enzima y la formacin del complejo E-S
Si continuamos aumentando la concentracin del
sustrato, entonces la E se satura y alcanza la velocidad
mxima

3. Efecto de la temperatura

4. Efecto del pH

5. Inhibidores
Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a tra

interacciones con el centro activo u otros centros especfi
(alostricos)
Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inact

la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula e
De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:
I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro act

II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte d
molcula, causando un cambio conformacional
repercusin negativa
en
la
actividad
enzimtica
FACULTAD
DE CIENCIAS
DE LA SALUD
Inhibicin enzimtica
isostrica

Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la
enzima libre,
con el complejo enzima-substrato o con ambos:
(competitivos, no competitivos, acompetitivos, por
producto)
E+I
EI
ES + I
ESI
2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a

la enzima: (uniones covalentes)
E+I
E
Inhibicin competitiva
sustrato
inhibidor
Enzima
Sin inhibidor
Enzima
con inhibidor
Los inhibidores competitivos son sustancias, muchas veces similares

qumicamente a los sustratos, que se unen al centro activo impidiendo
con ello que se una el sustrato. El proceso es
reversible y depende de la
cantidad de sustrato y de inhibidor, pues
ambos
la
FACULTAD
DEcompiten
CIENCIAS DEpor
LA SALUD
enzima
S
E
I
ES
E+P
Inhibicin
Competitiva
EI
Las fijaciones de sustrato e inhibidor son mutuamente
exclusivas; el complejo EI no es productivo
A muy altas concentraciones de sustrato desaparece la
inhibicin
Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo
qumico del
sustrato
El inhibidor es tan especfico como elE.A.P.
sustrato
de Nutricin Humana
cido Flico y Sulfanilamida

La sulfanilamida es un anlogo estructural
del cido p - aminobenzoico (PABA)
PABA es el punto de partida para la
sntesis de cido flico en las bacterias
El cido flico es una vitamina esencial
para la proliferacin (divisin) bacteriana
Sulfanilamida se usa en el tratamiento
algunas infecciones

Inhibicin no competitiva
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima
en un sitio diferente del sitio activo

S
E
I
ES
S
EI
E+P
Inhibicin
No Competitiva
ESI
El inhibidor se fija indistintamente a la E libre y al complejo

ES; ni el complejo EI ni el complejo ESI son productivos
Inhibicin acompetitiva

Inhibicin acompetitiva

S
E
ES
E+P
I
ESI
Inhibicin
Anticompetitiva
El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES

El complejo ESI no es productivo
Inhibicin Irreversible
Los inhibidores irreversibles reaccionan con un
grupo qumico de la enzima modificndola
covalentemente
El cido flico es una vitamina esencial para la
proliferacin (divisin) bacteriana
A diferencia de la inhibicin reversible, el
efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo
de actuacin
del inhibidor
Los inhibidores irreversibles son, por lo
general, altamente
Inhibicin por unin covalente

sustrato
envenenador
Enzima
envenenadores
Los envenenadores son sustancias que se unen al centro

activo mediante enlaces fuertes en unUNIVERSIDAD
proceso PERUANA
irreversible,
UNIN
FACULTAD
DE
CIENCIAS
DE
LA
SALUD
con lo que impiden de manera definitiva la catlisis
Algunos tipos de inhibidores irre

1. Reactivos de grupos -SH
2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados
Inhibicin enzimtica
alostrica

Enzimas Alostricas
Son enzimas cuya estructura proteica est
formada de varias subunidades
No se rigen por la cintica de MM
Adems del sitio o centro activo tienen sitios
alostricos o de regulacin
Sitio activo/sustratos
Sitio alostrico/moduladores o reguladores
La relacin entre la velocidad de reaccin y la
concentracin de sustrato sigue cintica
sigmoidea
Enzimas alostricas
Las enzimas alostricas
presentan
estructura
cuaternaria
Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de
una
molcula
de
sustrato
La unin del sustrato es
cooperativa
la curva de velocidad
presenta
una
forma
sigmoidal


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Generalmente se expresa en:

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Y = Cantidad de producto = Velocidad

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La enzima se desnaturaliza despus de un tiempo

Esquema de una reaccin

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Gran Exceso [S]

Velocidad maxima = Vmax

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Velocidad maxima = Vmax

Son las siguientes:

de MichaelisMenten relaciona [S] con la velocidad de

Significado de una Km pequea

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Significado de una Km grande

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Factores que afectan la actividad

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2. Concentracin del sustrato

Si se mantiene constante la concentracin del E, la

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Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a tra

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inact

I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro act

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Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:

2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a

Los inhibidores competitivos son sustancias, muchas veces similares

cido Flico y Sulfanilamida

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El inhibidor se fija indistintamente a la E libre y al complejo

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El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES

Inhibicin por unin covalente

Los envenenadores son sustancias que se unen al centro

Algunos tipos de inhibidores irre

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