ANTIBIOGRAMA

Tipos de antibiograma
Las pruebas de susceptibilidad
antimicrobiana in vitro pueden hacerse:

Por dilucin
Por difusin

Se realizan segn ciertas normas

estandarizadas por el CLSI.

Antibiograma por Dilucin

Tcnica de referencia en la mayora de

estudios clnicos de susceptibilidad a los
antimicrobianos.
Entrega un resultado cuantitativo, ya
que permite determinar la concentracin
mnima inhibitoria (CIM).
Se puede realizar en medio lquido
(caldo) o en medio slido (agar).
Mtodo complejo y de alto costo.

Antibiograma por difusin

Es el mtodo mas usado.

Es prctico y sencillo de
realizar y de
implementar.
Permite analizar un gran
numero de atb al mismo
tiempo y bajo las mismas
condiciones.
Entrega un resultado
cualitativo (S, I, R y No S)

Antibiograma por difusin:

Mtodo Kirby-Bauer

Este mtodo se basa en el uso de una cantidad

constante del antimicrobiano impregnado en un
reservorio de papel filtro.
Al ser aplicado sobre la superficie del agar (ya
sembrado), forma por difusin un gradiente de
concentracin del antimicrobiano.
La sensibilidad se indica por el tamao del halo de
inhibicin de crecimiento alrededor del disco.

Entonces

Se entiende por antibiograma el estudio

de la sensibilidad "in vitro" de las
bacterias a los antibiticos.

Aplicaciones

til para bacterias de rpido desarrollo

como: Enterobacterias, Staphylococcus
spp, Enterococos, Vibrio cholerae, entre
otras.

Tambin para bacterias de crecimiento

fastidioso como: Streptococcus spp,
Haemophilus spp y Neisseria spp.

La lectura debe realizarse bajo normas

del CLSI.

Reglas para realizar las pruebas de

sensibilidad por difusin

Trabajar con aislados identificados.

Operar con microorganismos aerbicos o

anaerbicos facultativos que se desarrollan rpido
en AMH.

En casos especiales como: Haemophilus spp,

Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus penumoniae,
estreptococos grupo viridans y -hemolticos, se
procede de acuerdo a normas especiales (CLSI).

Que estn en la fase logartmica de crecimiento.

Materiales y equipos

pHmetro
Incubadoras 35
Refrigeradoras
Autoclave
Cabina de
bioseguridad
Bao Mara
Espectofotmetro
Vrtex

Regla o escalimetro

Termmetros

Pinzas

Placas petri

Erlenmeyer

Hisopos de algodn

Tubos con tapa rosca

Pipetas

Gradillas

Procedimiento
El procedimiento estandarizado por el CLSI sigue
la siguiente secuencia:
1. Preparacin del inculo
2. Estandarizacin del inculo
3. Inoculacin en las placas de agar
4. Aplicacin de discos de antibiticos
5. Incubacin de las placas
6. Medicin de halos
7. Interpretacin de los resultados segn las
tablas del CLSI

1. Preparacin del inculo

Hay dos mtodos:
1. Mtodo de crecimiento previo: para
microorganismos de crecimiento rpido.

Cundo lo realizamos?
Cultivo con mas de 24 hrs
Cultivo en medio selectivo: McK
Cultivo con muy pocas colonias

Seleccionar 3 a 5 colonias de la misma

morfologa
Transferirlas a un tubo que contenga
caldo IBM, caldo soya tripticasa o agua
peptonada.
Incubar por 4 hrs a 35 C.
Luego estandarizar el inoculo a la
turbidez de 0.5 Mc Farland.
Sembrar en el medio.

Cont
2. Mtodo de suspensin directa:

Cuando realizamos?
Cultivo fresco: 18 a 24 hrs de
incubacin.
Seleccionar 3 a 5 colonias.
Transferirlas directamente a solucin
salina 0.85%

2. Estandarizacin del
inculo

Patrn de
turbidez: 0.5 Mc
Farland (1,5-2x108
UFC/mL).
Estandarizar el
inculo por
comparacin.
Utilizar una tarjeta
blanca con rayas
negras de
diferente grosor.

Caractersticas de
crecimiento
Debe utilizarse el medio de cultivo adecuado:
Bacterias de rpido desarrollo:
Agar Mueller-Hinton
Bacterias de desarrollo fastidioso:
Agar Mueller-Hinton con sangre de carnero al
5%: para Streptococcus spp., N. meningitidis*
Agar HTM: para Haemophilus spp.
Agar GC suplementado: para Neisseria
gonorrhoeae

3. Inoculacin de las Placas

Introducir el hisopo
estril en la
suspensin
realizada.
Rotar por las
paredes del tubo.
Sembrar
suavemente en
tres direcciones en
un ngulo de 60 a
65.

4. Aplicacin de los discos

Sacar los ATB 2 horas antes.

No usar ms de 6 discos en placas de
100 mm, ni ms de 12 en placas de 150
mm.
Verificar carga de acuerdo al
microorganismo.
Colocar los discos y presionar
ligeramente.
Distancia entre disco y disco: 25 mm; y
de disco al borde: 20 mm.
Aplicar los discos dentro de 15 minutos
posteriores a la inoculacin, ya que
entre mas tiempo pasa dan falsa
resistencia

5. Incubacin de las Placas

A 35C
Si son de crecimiento fastidioso: 35C en
CO2.

6. Medidas de Zonas de
Inhibicin
Antes de analizar las lecturas
debemos verificar:

Crecimiento uniforme.

Medir el rea de inhibicin a ojo

desnudo.
Zonas de inhibicin uniformes y
circulares.

Medir con regla o escalmetro en

forma invertida y fondo oscuro con
luz reflejada.

Cualquier deformacin de los halos,

estudiarse por mecanismos de
resistencia.

7. Interpretacin de
los Resultados

Utilizar tablas del

CLSI.
Existen cuatro
categoras:
Sensible
Intermedio
Resistente
No Sensible

Gracias!