TCNICAS

HISTOLGICAS

QUE ES VIVIR

ES UNA BELLEZA, ES APRENDER

IGNORAR MENOS
AMAR PARA VINCULARNOS A UNA PARTE
MAYOR DE LA HUMANIDAD
ADMIRAR PARA COMPARTIR LAS
EXCELENCIAS DE LA NATURALEZA Y DE LOS
HOMBRES
MUCHOS NACEN POCOS VIVEN
DEBEMOS TENER UN HAMBRE INSACIABLE
POR APRENDER
JOSE INGENIEROS

OBJETIVO ESPECIFICO

Facilitar al estudiante el aprendizaje de los

conocimientos, habilidades mentales y
motrices en base a la Histologa como
ciencia morfolgica a un nivel productivo,
haciendo nfasis en la utilidad de estos en la
prevencin, diagnstico y atencin primaria
en salud de los problemas dominantes
utilizando cortes de tejidos sanos, colorantes,
microscopios, vistas fijas, as como, medios
convencionales, charla expositiva y medios
audiovisuales.

HISTOLOGA
Griego Histos: tejido, logos: estudio
Se refiere al estudio morfolgico
(anatmico) auxilindose del
microscopio.
En otras palabras Histologa es sinnimo
de anatoma microscpica

HISTORIA Siglo XVII

Robert Hook y Malpighi utilizaron lentes

simples.
Hook denomin clula a las celdas
observadas e identific su ncleo
Malpighi es considerado padre de la
Histologa

Siglo XVIII Leeuwenhoek desarrolla lentes

compuestos
Siglo XIX

Invencin del micrtomo, de las tcnicas

histolgicas y microscopios compuestos
Teora celular por Schleiden y Schwann
Virchow distingue los 4 tejidos bsicos

Elementos a considerar para el estudio de los

tejidos

PREPARACIN DEL TEJIDO

Para observacin de clulas VIVAS
Ventajas: observacin directa de procesos fisiolgicos
in vivo
Desventajas: Difcil manejo y poca duracin
TIPOS DE TINCIN UTILIZADAS
VITAL inyectando colorantes inocuos directo al
animal
SUPRAVITAL inyectando colorante a clulas luego de
su extraccin del organismo

Para observacin de clulas MUERTAS (conservadas)

TCNICAS HISTOLGICAS
DIVERSAS MANERAS EN
QUE SE PUEDEN
PREPARAR LOS CORTES
TISULARES

PASOS SECUENCIADOS
CON EL FIN DE
PREPARAR UN CORTE
HISTOLGICO PARA
PODER OBSERVARSE
AL MICROSCOPIO

PASOS DE LAS TCNICAS

HISTOLGICAS

Toma de Muestra e Identificacin

Fijacin
Inclusin: Deshidratacin Aclaramiento - Impregnacin en
Parafina
Confeccin del bloque
Corte
Tincin
Montaje
Observacin al Microscopio

TOMA DE MUESTRA
Mtodos ms utilizados
Biopsias
Necropsias
Improntas
Frotis de clulas superficiales
Frotis de clulas sanguneas
Animales de experimentacin
Aplastados celulares

1) OBTENCIN DE LA MUESTRA

Capturar un corte histolgico o

espcimen de un animal anestesiado o
despus de la muerte. En humanos es
posible en cirugas al extirpar tejidos
enfermos.

2) FIJACIN
El propsito es CONSERVAR el
protoplasma con el menor grado de
alteracin posible
Evitar la autlisis por enzimas liberadas
por el propio tejido
Detener procesos celulares dinmicos
Conservar ntegra la estructura lo mas
posible
Aumentar la afinidad por determinados
colorantes
Conferir cierta rigidez al tejido

Formalina
(formaldehido)*
Alcohol
SIMPLES

Bicloruro de
Mercurio
Bicromato de potasio

FIJADORES

cido Pcrico
Actico smico
Glutaraldehido
LQUIDO DE
(Microscopia
BOUIN
electrnica)
COMPUESTOS cido pcrico +
cido actico +
formalina
LQUIDO DE
ZENKER

LAVADO, DESHIDRATACIN Y ACLARACIN

Previo a la inclusin se LAVA el

tejido, luego se pasa [ ]CRECIENTES
de alcohol etlico hasta llegar a [ ]
mxima (100%) para
DESHIDRATARLO y luego se
ACLARA consiste en eliminar el
agente deshidratante y sustituirlo
por un lquido que se mezcle con el y
con el medio de inclusin.
ACLARADORES:

XILOL
CLOROFORMO
BENCENO
ACEITE DE CEDRO

3) INCLUSIN (EMBEBIMIENTO)
Se coloca el tejido en medio de Inclusin y
luego
se prepara el bloque dejando solidificar el
medio
de inclusin para tener una masa homognea
firme
que contiene el tejido incluido
FINALIDAD DE LA INCLUSIN
Proporcionar un soporte rgido (bloque de
tejido)
para facilitar el corte
MEDIOS DE INCLUSIN
PARAFINA
CELOIDINA

4) CORTE

Seccionar el
bloque de
parafina
endurecida en el
MICRTOMO en
cortes de 3-10
m de espesor
que pasa al
portaobjetos con
albmina de
huevo en su
superficie (para
adhesin)

100 m..

5) TINCIN (COLORACIN)
REQUISITOS
1) Aclarar (eliminar
parafina) con XILOL,
TOLUOL u otro agente
aclarador
2) Pasar por
concentraciones
DECRECIENTES de alcohol
PROPSITO
Destacar el contraste
natural y hacer ms
evidentes los
componentes celulares y
tisulares del CORTE

6) MONTAJE
- Se quita el exceso de colorantes
lavando con agua o alcohol (segn
solvente del colorante)
-Se deshidrata (alcohol en [ ]
CRECIENTES)
-Se aclara: pasar por el aclarador.
-Se coloca una gota de medio de
montaje, esta posee INDICE DE
REFRACCIN IGUAL AL VIDRIO

MEDIO DE MONTAJE
BLSAMO DE CANAD

- Se coloca un cubreobjetos encima

de la preparacin, se deja secar.
Estando el corte listo para su
observacin microscpica

COLORANTES
Sustancias qumicas, orgnicas
complejas utilizadas para colorear
componentes celulares o extracelulares
Se pueden considerar como Sales
neutras con radicales tanto cidos
como bsicos
Sin teir PIEL

Coloracin de Van Gieson

Orcena ntrica

Coloracin con

CLASIFICACIN
El criterio ms simple es basar la
clasificacin en el uso con respecto a
los componentes celulares y
tisulares
USO GENERAL
Identifica ncleo y citoplasma

USO

ESPECIFICO
Identifica componentes
particulares

Los colorantes de uso general son sales

neutras que tienen radicales tanto cidos
como bsicos
Por sus radicales (que donan)
cidos

cuando la propiedad de
tincin est en el radical cido
(acidfilas). Los colorantes cidos
tienen carga NEGATIVA
Coloracin ROJO - ROSADO
Bsicos

cuando la propiedad de
tincin est en el radical bsico
(basfilas). Los colorantes bsicos
tienen carga POSITIVA
Coloracin AZUL - VIOLETA

COMPONENTES
Son molculas que poseen esqueleto
incoloro, que normalmente es un anillo
aromtico de benceno, al cual se le unen
dos tipos de radicales: uno que aporta el
color, (CROMFORO), y otro que
posibilita la unin a elementos del tejido
denominado AUXOCROMO
Al conjunto de estos elementos unidos
en una molcula se denomina
CROMGENO

COLORANTES
CIDOS EOSINA
para teir
CITOPLASMA
cido pcrico
cidos azoicos
Cromo tropo
cidos diazoicos
Azul de trpano
Rojo de trpano

BSICOS para teir

NCLEO y algunas
organelas
Hematoxilina
Hematoxilina frrica
Colorantes de anilina

Azur A
Azul de toluidina
Azul de metileno
Azul brillante de cresilo
Rojo neutro
Verde de Janus

COLORANTES DE USOS
ESPECFICOS

Distinguen componentes de la
matriz extracelular
Orcena o resorcina ( Fibras
elsticas)
Tricrmico
Tricrmico
Tricrmico

de
de
de

Masson ( Verde)
Mallory ( Rosa intenso)
Mallory Azn ( Azul )

Sales metlicas que se precipitan

en los tejidos (impregnacin
argntica)
Sales de plata
Sales de oro

CLASIFICACIN
POR SU ORIGEN
SINTTICOS
Eosina
NATURALES
Animales: carmn
Vegetales: hematoxilina, orcena

POR EL COLOR QUE ADOPTAN

ORTOCROMTICO: adopta el mismo
color .
METACROMTICO: adquiere color
diferente.

MTODOS DE COLORACIN

COLORACIN DIRECTA
Afinidad entre el colorante y el objeto.
COLORACIN INDIRECTA
Requiere la intervencin de intermediarios
o mordientes
para que la coloracin
tenga lugar.
COLORACIN PROGRESIVA
Se hace actuar el colorante hasta que
llegue a su
punto ptimo.
COLORACIN REGRESIVA
Se realiza primero una sobrecoloracin y
luego
se elimina el resto del colorante por medio
de diferenciadores. A este proceso se lo

COLORACIN SIMPLE Se colorean algunos

elementos del preparado (ncleo, fibras elsticas)
COLORACIN COMBINADA
Se
tien
los
elementos
nucleares
y
citoplasmticos
recurrindose, generalmente, al empleo sucesivo
de
colores bsicos y cidos que contrastan por sus
colores. Ej.: H y E
COLORACIN PANPTICA
Es
una
coloracin
combinada
realizada
sucesivamente
por colorantes neutros (May Grnwald - Giemsa)
COLORACIN PANCRMICA En un solo bao
actan todos los colorantes neutros que se
necesiten

HISTOQUMICA
Campo de la investigacin cuyo objetivo es la
localizacin de compuestos qumicos ya conocidos
en regiones especficas o componentes celulares
por anlisis bioqumico, que producen sustancias
coloreadas insolubles. Gracias a las propiedades
qumicas o fsicas inherentes del tejido.
COMPONENTE
MTODO
Iones hierro
Azul de Prusia (adaptacin)
ADN
Reaccin de Feulgen
Proteoglucanos Reaccin del cido perydico de
Schiff
Lpidos
Sudn III, IV, B negro
Enzimas in vivo Sustrato + enzima = Producto
coloreado
Glucgeno
Carmn de Best o PAS

MTODOS MS MODERNOS
INMUNOCITOQUMICA
Basada en inmunofluorescencia de complejos
antgeno-anticuerpo
HISTOQUMICA CON LECTINAS
Para observacin de hidratos de carbono
RADIOAUTOGRAFIA
Sustitucin de una molcula determinada por
su
istopo radioactivo
HIBRIDACIN IN SITU
Para cidos nuclicos. Se marcan con istopos
radioactivos cadenas monocatenarias que se
unen a
segmentos de las cadenas de cidos nuclicos.

ARTEFACTOS

Debido a la manipulacin del tejido

durante la tcnica histolgica.
Mala manipulacin durante la
preparacin puede llevar a alteraciones
que le quitarn calidad al corte . Entre
estos:
PLIEGUES Y ARRUGAS
PRECIPITADOS
DEFECTOS DE CUCHILLA
MANEJO POCO CUIDADOSO
DEGENERACIN POST-MORTEN

MICROSCOPIO
Instrumento mas importante de la
Histologa que mediante un sistema
ptico de lentes aumenta varias veces el
tamao de una imagen
Utilidad depende de: PODER DE
RESOLUCIN (capacidad del microscopio
de separar dos puntos que estn muy
unidos
Es

el mas importante porque de este

depende que se vean mejor los DETALLES
AUMENTO:

relacin entre el tamao de

oMicroscopio

de

polarizacin

Microscopios de luz
visible

oMicroscopio

de contraste

de fases
oMicroscopio

de

interferencia
oMicroscopio

oscuro
oMicroscopio

electrnico

oMicroscopio

(ME)

Microscopios de luz
invisible

oMicroscopio

de campo
oME de
Transmisin

ptico

oME

de
Barrido
de luz UV

MICROSCOPIA PTICA (luz visible)

Es el ms utilizado
Trabaja en dos etapas
Primer aumento: OBJETIVO
Segundo aumento: LENTE DEL OCULAR
El haz de luz de la fuente se concentra en un punto por
el CONDENSADOR que lo dirige a la muestra que es
atravesada y llega hasta el OBJETIVO (1era etapa)
Generalmente son 4 objetivos
Pequeo aumento x 10
Mediano aumento x 25
Gran aumento
x 40
Inmersin en aceite x100
Se multiplica por el aumento que brinda el LENTE
(generalmente x 10)
Pequeo aumento
Mediano aumento
Gran aumento
Inmersin en aceite

10 x 10 = 100 veces
25 x 10= 250 veces
40 x 10= 400 veces
100 x 10= 1000 veces

OCULAR

OBJETIVOS

CONDENSADOR
FUENTE DE LUZ

MICROSCOPIO DE POLARIZACIN
Utiliza dos prismas (analizador y polarizador)
para la
observacin de muestras birrefringentes
como fibras
musculares, fibras del T C
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
El contraste es una variacin de intensidad de
la luz y
se puede observar con la colocacin de placas
pticas en el condensador y el objetivo para
convertir
diferencias de fases en diferencias de
amplitud de
Onda

MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA
Se envan dos haces de luz que se unen en la
muestra, provocando un retraso que permite
Medir el grosor del espcimen
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
Utiliza un condensador especial que no
permite
que la luz llegue directamente al centro del
lente,
sino OBLCUO por lo que se ver oscuro y las
pequeas partculas se visualizarn como
polvo que entra por una ventana en un cuarto
oscuro. til para observar quilomicrones

MICROSCOPIOS DE LUZ
INVISIBLE

MICROSCOPIO DE LUZ UV
Utiliza lentes de cuarzo y registra imgenes
que
absorben radiacin ultravioleta en
fotografas.
Posee un subtipo que es la microscopia por
fluorescencia
MICROSCOPIO TRANSMISIN
Su fuente de iluminacin es un haz de
electrones
acelerados al vaco que pasa a travs de la
muestra y se observa en una pantalla. Mayor
poder de resolucin (0.2 0.3 nm)

MICROSCOPIO DE CENTELLEO
Haz de electrones son bombardeados en
la
Superficie de la muestra de la que se
desprendern
electrones primarios y secundarios que se
recogen en un punto registrado por video.

Microscopio

CABEZAL
BRAZO
COLUMNA
PLATINA

BASE

TORNILLO
MACROMTRICO

REVOLVER
PLATINA

TORNILLO
MICROMTRICO

TORNILLO
MACROMTRICO
TORNILLO
MICROMTRICO

Diseado por David A. Terrero S.

M.O

M.E.T

M.E.B

CONOCER
LA
ESTRUCTURA,
ORGANIZACIN Y FUNCIONAMIENTO
DE CLULAS, TEJIDOS, RGANOS,
NOS PERMITIR COMPRENDER EN
UN FUTURO, EL ORIGEN DE LOS
CUADROS
PATOLGICOS
DE
NUESTROS PACIENTES, LOS QUE SE
INICIARAN CON ALTERACIONES A
NIVEL CELULAR.