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Fernandes
paulofernandes@live.
com
BIOTECNOLOGIA FARMACUTICA
Aula 04
Trabalho
Semanal
Pequeno questionrio semanal
Pesquisas simples de
conceitos e aplicaes prticas
50% da 1 V.A. - Aprox. 8
trabalhos
Entrega no dia = 100% da
nota;
Entrega atrasada = 80% da
nota.
Essa semana: Pesquise e
responda em 9 linhas:
Tecnologia do DNA
Recombinante
utilizado
rotineiramente
nos
laboratrios,
geralmente em sistemas automatizados
especialmente desenhados para efetuar
rapidamente um nmero altssimo de
operaes.
Tecnologia do DNA
Recombinante
A
extrao
de
DNA
um
procedimento relativamente simples.
Tecnologia do DNA
Recombinante
Pelo
menos
30
de
empresas
j
comercializam diferentes tipos de kits
para a extrao de cidos nucleicos,
substituindo os protocolos tradicionais
por
sistemas
mais
fceis
de
automatizar.
Enzimas de Restrio
Tipos de Enzimas de
Restrio
Tipo II
Duas enzimas:
Enzimas de Restrio
A enzima de restrio
corta aqui...
GA A T T C
GA A T T C
CT T AAG
CT T AAG
e aqui...
AAT TC
CT T AA
Extremidades soltas
CT T AA
As fitas se separam
AAT T C
CT T AA
AAT TC
Extremidades soltas
AAT T C
CT T AA
D
G A A T T C
C T T A A G
Ligao Enzimtica
Embora
os
filamentos
complementares permitam que as
molculas
se
liguem
por
complementaridade de bases, as
sequncias acar fosfato ainda no
esto completas nas duas posies
de cada juno. Para selar esta
ligao, so utilizadas enzimas como
a ligase.
Ligao Enzimtica
As
ligases
so
capazes
de
catalisar
a
formao
de
pontes fosfodister
ao final das fitas de
DNA.
A
enzima
responsvel
por
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese de oligonucleotdeos
A sntese de oligonucleotdeos de DNA e
RNA se desenvolve hoje em mquinas
automatizadas (sintetizadores) capazes de
construir, em poucos minutos, molculas
com dezenas de pares de bases.
Estes oligonucleotdeos podem ser utilizados
como sondas ou como primers para a PCR
(veremos um pouco mais adiante).
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese de oligonucleotdeos
A sntese de oligonucleotdeos de DNA e
RNA se desenvolve hoje em mquinas
automatizadas (sintetizadores) capazes de
construir, em poucos minutos, molculas com
dezenas de pares de bases
Estes oligonucleotdeos podem ser utilizados
como sondas ou como primers para a PCR
(veremos um pouco mais adiante).
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese de oligonucleotdeos
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese de cDNA
Uma enzima de origem viral transcreve a
informao gentica no sentido RNA DNA.
Esta enzima, denominada transcriptase
reversa, normalmente garante aos vrus
com genoma de RNA sua multiplicao no
hospedeiro (como o HIV, por exemplo).
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese de cDNA
Como
ferramenta
de
laboratrio,
a
transcriptase
reversa
possibilita
a
construo
de
filamentos
de
DNA
complementares
(cDNA)
a qualquer
molcula de RNA.
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese e Amplificao do
DNA
A reao em cadeia da polimerase
Sntese e Amplificao do
DNA
A reao em cadeia da polimerase
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese e Amplificao do
DNA
Sntese e Amplificao do
DNA
Vetores de Clonagem
Vetores de Clonagem
Vetores de Clonagem
Tipos de Vetores
Vetores
Plasmdeos
Cosmdeos
Bacterifagos
Hospedeiro
s
Bactrias / leveduras
Utiliza
o
clonagem
Plasmdios
VETORES PLASMIDIAIS
Plasmdios
pUC18
pBR322
pUP310
Plasmdios
Plasmdios
Bacterifago
-
- DNA ou RNA;
- Capsdeo
- Biologia do fago
- Utilizados para clonar fragmentos de
9kb a 25 kb
Cosmdeos
- So hbridos
bacterifagos;
entre
plasmdios
Cromossomo Plasmdio
Bactria
Gen de interesse
Plasmdio recombinante inserido na bactria
Cpias do gene
Produo
de plantas
resistentes
a pragas
Cpias da protena
Produo de
hormnio de
crescimento
Produo de bactrias
especializadas
na
limpeza de resduos
Produo de fator de
coagulao, insulina e
outros frmacos.
Biblioteca Gnica
Ela
representa
uma
coleo
de
plasmdeos contendo fragmentos que
suficiente grande para garantir que todo
o DNA genmico seja produzido pelo
Biblioteca Gnica
1
DNA Humano
(genoma)
Milhes de fragmentos do
DNA genmico
Molculas de DNA
recombinante
Introduo dos
plasmdios nas
bactrias
Molculas de DNA
recombinante
Fragmentos de
DNA inseridos
nos plasmdios
Aplicaes
Aplicaes
Aplicaes
Fingerprintingde DNA:
consiste no
uso de DNA para identificar uma pessoa,
sendo um poderoso instrumento para
testes de paternidade, investigaes