INMUNOENSAYOS

DIRECTOS
(DE INTERACCIN SECUNDARIA)

LIC. TM HENRY A. CAMPOS PAJUELO

07/10/16

TIPOS DE
INMUNOENSAYOS
INMUNOENSAYOS

DIRECTOS
PRECIPITACIN

INDIRECTOS
SEGN EL TIPO DE MARCADOR

Ambos componentes de la reaccin (Ag y Ac)

son solubles.

Radioinmunoensayos
Enzimoinmunoensayos

Los inmunocomplejos grandes formados

precipitan.

Fluoroinmunoensayos
Quimioinmunoensayos

FLOCULACIN
Ambos componentes de la reaccin (Ag y Ac)
son solubles.
Los inmunocomplejos grandes formados no
precipitan, quedan flotando formando flculos.

SEGN EL MTODO DE SEPARACIN

Homogneos
Heterogneos
SEGN EL DISEO DEL ENSAYO

AGLUTINACIN
Al menos uno de los componentes (Ag o Ac) es
particulado.
Los inmunocomplejos grandes formados se
observan como aglutinados..

Competitivos
No competitivos
SEGN EL COMPONENTE A DETECTARSE
Directos (sndwich)
Indirectos

AGLUTINACIN

AGLUTINACIN
Al menos uno de los componentes es particulado
(insoluble).
Fases de la reaccin de aglutinacin:
Sensibilizacin (interaccin primaria): Unin Ag y Ac,
no es visible.
Aglutinacin (interaccin secundaria): Se forman
puentes o uniones entre eritrocitos sensibilizados, visible
in vitro.

AGLUTINACIN
Influencias:
Temperatura: IgG a 37C, IgM a temperatura ambiente o
temperaturas fras.
pH.
Tiempo de incubacin: Equilibrio.
Fuerza inica del medio.
Presencia de un nmero adecuado de eptopes en la
superficie, etc.

SUSPENSIN DE
HEMATES

ANTICUERPOS
ESPECFICOS

REACCIN DE
AGLUTINACIN

 La IgM es la mas eficiente aglutinando.

AGLUTINACIN
Las partculas poseen cargas electronegativas
(potencial Z), por el cido silico.
Importante para evitar agregacin espontnea
(adecuado transporte de oxgeno).
Tambin estn rodeados de cationes formando as
una capa doble o nube inica.
Separacin > a 25 nm:
IgM: longitud es aproximadamente 100 nm.
IgG: < de 25 nm, se debe disminuir el potencial Z: albmina,
enzimas, etc.

Aglutinabilidad de los hemates en

funcin del Potencial Z
-23 mV

No hay aglutinacin

-18 mV

Crtico para IgM

-16 mV

Solucin NaCI 0,15

-10 mV

Crtico para IgG

-7 mV

Aglutinacin no especfica

TIPOS DE REACCIONES DE
AGLUTINACIN
AGLUTINACIN DIRECTA (ACTIVA)
Clula o antgeno insoluble + anticuerpo especfico:
Aglutinacin para determinacin del grupo sanguneo.
Aglutinacin para determinacin de antgenos febriles.

TIPOS DE REACCIONES DE
AGLUTINACIN
AGLUTINACIN INDIRECTA (PASIVA)
Clula o partcula inerte recubierta con Ag + Ac
especfico:
Aglutinacin de partculas de ltex.

TIPOS DE REACCIONES DE
AGLUTINACIN
AGLUTINACIN INDIRECTA (PASIVA)
Aglutinacin reversa: Clula o partcula inerte
recubierta con Ac + Ag respectivo.

SE DERIVAN DE AQUELLAS...
HEMAGLUTINACIN:
Hemaglutinacin directa:
Grupo sanguneo

Hemaglutinacin indirecta:
Antgenos bacterianos
Endotoxinas bacterianas
Virus
Antibiticos, especialmente penicilina
Alergenos, etc.

AgA

AgB

AgAB

HEMAGLUTINACIN DIRECTA

Ac: MP
Ag particulado
Aglutinacin

HEMAGLUTINACIN
NEGATIVA

HEMAGLUTINACIN
POSITIVA

HEMAGLUTINACIN INDIRECTA

SE DERIVAN DE AQUELLAS...
INHIBICIN DE LA HEMAGLUTINACIN:
Sensible y especfico para la identificacin de antgeno
soluble en la muestra problema.
Los Ags (virus de la influenza) se incuban con la MP donde
habrn Acs especficos.
La hemaglutinina de los virus se inactiva.
No hay aglutinacin cuando se incuba con eritrocitos.

SUERO PROBLEMA
NEGATIVO

HEMAGLUTINACIN

Ag
VIRUS DE LA
INFLUENZA

HEMATES

No hay Acs contra el virus

de la influenza

Virus (con hemaglutinina)

libres

La hemaglutinina del virus

provoca aglutinacin de los
hemates

INHIBICIN DE LA
HEMAGLUTINACIN

SUERO PROBLEMA
POSITIVO

Ag
VIRUS DE LA
INFLUENZA

HEMATES

RESULTADO
POSITIVO

RESULTADO
NEGATIVO

INHIBICIN DE LA
HEMAGLUTINACIN

AGLUTINACIN
Presenta elevada sensibilidad.
Se puede valorar visualmente.
Slo proporciona resultados cualitativos y
semicuantitativos.

AGLUTINACIN
OJO: En la hemaglutinacin, cuidado con los
anticuerpos heterfilos (IgM):
Absorcin con GR lavados.
Tratamiento con 2-ME.

2-MERCAPTOETANOL
rompe la CADENA J

AGLUTINACIN
La baja cantidad de eptopes en el antgeno o la
presencia de anticuerpos incompletos pueden
provocar una falta de reaccin de aglutinacin,
por la no formacin de inmunocomplejos de
tamao adecuado.

SUSPENSIN DE
HEMATES

ANTICUERPOS
ESPECFICOS

FALTA DE REACCIN
DE AGLUTINACIN

AGLUTINACIN
En este caso se puede evidenciar la reaccin
utilizando el reactivo de antiglobulina humana
(Coombs).

ANTIGLOBULINA HUMANA

ACCIN DEL REACTIVO DE

COOMBS

AGLUTINACIN
La aglutinacin observable in vivo, puede dar
indicios de problemas de infertilidad masculina.

VENTAJAS DE UTILIZAR GR
Disponibilidad inmediata.
Sensibilidad como indicadores.
Posibilidad de almacenamiento prolongado a 4C.