UNIVERSIDAD

NACIONAL
FACULTAD DE CIENCIAS
DE SAN
BIOLOGICAS
AGUSTIN
SEGUNDA
ESPECIALIDAD EN
Microbiologa y Parasitologa
2016

CURSO DE
MICROBIOLOGIA
Blgo. Ren Efran
Campana Quispe
CBP 3485 RNBE 0051
MINISTERIO DE SALUD
Hospital Goyeneche

BACTERIAS
GRAMPOSITIVAS

Bacterias Grampositivas

Bacilos aerobios

Bacilos anaerobios

Bacillus (esporulado)
Corinebacterium
Listeria
Erysipelothrix
Lactobacillus
Clostridium (esporulado)
Actinomyces
Arachnia
Eubacterium
Propionibacterium
Bifidobacterium

Bacterias Grampositivas

Cocos aerobios

Cocos anaerobios

Staphylococcus
Streptococcus
Enterococcus
Micrococcus
Peptostreptococcus
Peptococcus

Cocos grampositivos
Los cocos grampositivos
son los microorganismos
que con mayor frecuencia
se asocian con infecciones
humanas y que ms a
menudo se recuperan de
muestras clnicas en los
laboratorios
de
microbiologa

Cocos grampositivos

ESTAFILOCOCOS

Estafilococos
Especies encontradas en el hombre

Staphylococcus aureus
S. epidermidis
S. saprophyticus
S. hominis
S. hemolyticus
S. warneri
S. capitis
S. saccharolyticus
S. auricularis
S. simulans
S. Cohnii
S. xilosus

Especies encontradas en animales

S. intermedius: perros , gatos
S. caprae: cabras
S. lentus: ovejas
S. hycus: ganado, cerdos
S. sciuri: pequeos mamferos
S. gallinarum: aves de corral
S. caseolyticus: vacas
S. carnosus: carnes procesadas

Identificacin de estafilococos
MORFOLOGIA DE COLONIAS

Staphylococcus epidermidis

Estafilococos
morfologa microscpica

Identificacin de estafilococos
Staphylococcus aureus

Colonias relativamente grandes de 2-3 mm de dimetro

(despus de 24 horas de incubacin), opacas convexas de
consistencia cremosa
Cuando crecen en agar-sangre algunas cepas producen hemlisis
Son catalasa positivas
S. aureus produce coagulasa
La mayor parte de las cepas de S. aureus pueden fermentar
el manitol y formar cido
Muchas cepas de S. aureus producen desoxirribonucleasa
(DNAsa)

Prueba da catalasa
La catalasa es un enzima que descompone el perxido de
hidrgeno (H2O2) en oxigeno y agua.
Por lo general se emplea para diferenciar los estafilococos
(positivo) de los estreptococos (negativo).
Se utiliza: Perxido de hidrgeno, 3%, almacenado en frasco
marrn refrigerado.
Un cultivo puro de microorganismos a estudiar de 18 a 24 horas
(de preferencia sin sangre).
Procedimiento:
Transferir una colonia bien aislada a la superficie de un
portaobjetos, agregar una gota de H2O2.
La rpida aparicin y sostenida produccin de burbujas de gas
constituye un resultado positivo
La aparicin de unas pocas burbujas pequeas formadas
despus de 20 a 30 segundos no se considera un resultado
positivo.

Prueba de coagulasa
La coagulasa es una protena de composicin qumica desconocida
con actividad semejante a la protrombina, capaz de convertir el
fibringeno en fibrina, produciendo un cogulo visible en un sistema
de prueba apropiado
Se emplea con mayor frecuencia para diferenciar Staphylococcus
aureus (positivo) de otros estafilococos y micrococos (negativo)
La coagulasa est presente en dos formas, libre y ligada, cada una
con diversas propiedades que requieren el uso de pruebas
separadas.
Coagulasa ligada (prueba en portaobjetos) tambin llamada factor de
agregacin, est unida a la pared de la clula bacteriana. Las
hebras de fibrina se forman entre las clulas suspendidas en
plasma (fibringeno)
Como reactivo puede utilizarse el plasma humano o de conejo
obtenido de una muestra de sangre fresca, pero se recomienda el
preparado comercial.
Se coloca una gota de suero fisiolgico estril sobre un portaobjetos,
se emulsifica una suspensin del microorganismo a estudiar y se
mezcla con una gota del plasma, observando la formacin de un
precipitado granular de cogulos blancos en un tiempo de 15 a 20
segundos.

Prueba de coagulasa
Coagulasa libre (prueba en tubo) es una
sustancia semejante a la trombina presente en
los filtrados de cultivo
En el procedimiento se coloca 0.5 ml de plasma
en un tubo estril, se agrega 0.5 ml de caldo de
cultivo puro de 18 a 24 horas y se mezcla, luego
se lleva a 37C. la reaccin se considera
positiva si cualquier grado de coagulacin se
observa dentro del tubo en un tiempo de 1 a 4
horas , observando cada 30 minutos.
Las pruebas negativas a las 4 horas deben
observarse de nuevo despus de 18 a 24 horas
de incubacin.

Identificacin de estafilococos
.

Fermentacin de manitol

La mayor parte de cepas de Staphylococcus aureus, en

contraste con S. epidermidis y la mayora de los otros
estafilococos coagulasa-negativos, pueden fermentar el
manitol y formar cido.
Se utiliza el medio agar-manitol salado que contiene 7.5%
de cloruro de sodio.
El S. aureus produce colonias con un halo amarillo
indicando la produccin de cido.
Formula:
Extracto de carne
1g
Peptona
10 g
Cloruro de sodio
75 g
D-manitol
10 g
Rojo de fenol
0,025 g
Agar
15 g
pH = 7.4

Prueba de desoxirribonucleasa (DNAsa)

Adems de la capacidad de producir catalasa, coagulasa
libre y fermentar el manitol, muchas cepas de S. aureus
producen desoxirribonucleasa
Se determina mediante la incorporacin
de acido desoxirribonucleico (DNA) en
agar nutriente el cual se inocula en un
punto con el microorganismo de prueba,
se incuba durante la noche y luego se
cubre con HCl 1 M para precipitar al
DNA no hidrolizado. El resultado positivo
es indicado por el aclaramiento del agar
alrededor de la colonia mientras que el
DNA no hidrolizado aparece turbio y
opaco

Identificacin de estafilococos coagulasa-negativos

S. xilosus
S. cohnii
S. saprophyticus

S. epidermidis
S. capitis
S. hominis
S. hemolyticus
S. simulans
S. warneri

Prueba de susceptibilidad a la novobiocina

La mayor parte de cepas de Staphylococcus
saprophyticus son resistentes a la novobiocina,
caracterstica que ha sido utilizada para
diferenciarlo de S. epidermidis y otros
estafilococos coagulasa-negativos
Para realizar la prueba, se prepara
una
suspensin estndar n 0,5 McFarland y se
siembra en una placa de agar-sangre y se
coloca un disco con 5 g de novobiocina y se
incuba a 35 cC 18 a 24 horas. Las cepas
resistentes mostrarn una zona de inhibicin de
16 mm o menos

Gnero Micrococcus
Son encontradas frecuentemente en la piel
del hombre y de otros animales
Los micrococos son clulas esfricas dispuestas en masas
irregulares, racimos, ttradas o paquetes.
Los micrococos son muy abundantes en la naturaleza, vindose
aislado mas frecuentemente del polvo y del agua. A menudo se
encuentra en utensilios y equipos usados en alimentacin que no
han sido adecuadamente limpiados e higienizados.
).

Micrococcus luteus

M. lilae

M. halobius

M. sedentarius

M. varians

M. agilis

M. kristinae
M. Roseus

M. nishinomiyaensis

Gnero Micrococcus

Se tiende a pensar que Micrococcus es generalmente un organismo

comensal o saproftico, aunque podra ser tambin un patgeno
oportunista, particularmente en pacientes con inmunodeficiencia,
tales como enfermos de VIH. Puede ser difcil identificar
Micrococcus como la causa de una infeccin puesto que el
organismo est presente normalmente en la microflora cutnea.

El gnero es raramente asociado con enfermedades. En raras

ocasiones la muerte de pacientes inmunodeprimidos se ha debido a
infecciones pulmonares producidas por Micrococcus. Tambin
puede estar implicado en otras infecciones, incluyendo bacteremia
recurrente, shock sptico, artritis sptica, endocarditis, meningitis y
neumona cavitaria (pacientes inmunodeprimidos).

Diferenciacin de micrococos y estafilococos

Los micrococos son oxidativos y no fermentadores en su
metabolismo. Se inoculan por puncin dos tubos con
medio de oxidacin-fermentacin. Un tubo es expuesto
al oxgeno atmosfrico (tubo abierto) y el segundo es
sellado con aceite mineral estril (tubo cerrado). Los
micrococos acidificarn el medio en el extremo del tubo
abierto solamente, mientras que el estafilococo lo har
en los dos. El prpura de bromocresol se usa como
prueba de fermentacin de la glucosa. La produccin de
cido resulta en un cambio de coloracin del medio de
prpura a Amarillo.
Susceptibilidad a la lisostafina la cual es un enzima que
produce el clivaje de los puentes peptdicos en el
peptidoglicano de la pared celular de los estafilococos,
dejando a la clulas bacterianas sensibles a la lisis
osmtica

Diferenciacin de micrococos y estafilococos

Prueba de susceptibilidad a la furazolidona. Se prepara una
suspensin del microorganismo en solucin salina estril y se
siembra en agar-sangre. Se coloca un disco con 100 g de
furazolidona y se incuba a 35C durante la noche. Los
estafilococos son inhibidos y tendrn zonas de 15 mm o ms. Los
micrococos son resistentes y tienen halo de inhibicion de 9 mm o
menos.
Prueba modificada de oxidasa. Utiliza el reactivo de oxidasa
(clorhidrato de tetametil-p-fenilenediamina en dimetil sulfxido)
impregnado en un disco de papel filtro. El desarrollo de un color
prpura en el disco dentro de los 30 segundos, significa un
resultado positivo. Los micrococos son oxidasa modificado
positivos, los estafilococcos son oxidasa modificado negativos
Prueba de susceptibilidad a la bacitracina. La prueba se realiza de
la misma forma que para la prueba de susceptibilidad a la
furazolidona, se utiliza un disco A, 0,04 unidades de bacitracina.
Los micrococos son susceptibles a la bacitracina y tendran una
zona de inhibicin de 10mm o ms mientras que los estafilococos
se manifiestan resistentes.

Tipos de hemlisis

Identificacin de Estreptococos

Identificacin de estreptococos

Reacciones hemolticas en agarsangre de carnero

Susceptibilidad a la bacitracina
Hidrlisis del hipurato
Test de CAMP
Reaccin bilis-esculina
Tolerancia de crecimiento en 6.5%
de cloruro de sodio
Solubilidad en bilis
Susceptibilidad a la optoquina

Estreptococos

Hemolisinas
Los estreptococos producen dos hemolisinas,
Estreptolisina O, antignica pero oxigeno lbil
(inactivada por el oxgeno), y estreptolisina S, no
antignica pero oxigeno estable.
Estas hemolisinas producen un aclaramiento
completo del agar sangre alrededor de las
colonias llamada -hemlisis
La estreptolisina O se observa principalmente en los
estreptococos del grupo A, tambin puede
encontrarse en el grupo G y C.

Hemolisinas
Otros tipos de hemlisis caractersticas de los
estreptococos incluye la -hemlisis
caracterizada por destruccin parcial de la
pared de los eritrocitos los eritrocitos y prdida
de algo de hemoglobina en el agar lo que
resulta en una decoloracin verde
Los estreptococos -hemolticos se denominan
con frecuencia estreptococos viridans lo que en
realidad, no es una especie nica sino un grupo
de estreptococos sin especificidad serolgica
Si las colonias estreptoccicas no producen
hemlisis, se dice que presentan reaccin
gamma.

Susceptibilidad a la bacitracina
Es el mtodo ms empleado en los
laboratorios para la identificacin
presuntiva de estreptococos del grupo A
de Lancefield Streptococcus pyogenes, el
cul es sensible a la bacitracina.
Se utiliza un disco A con 0,04 unidades de
bacitracina sobre medio de agar sangre
Cualquier zona de inhibicin es considerado
positiva

Prueba de CAMP
Es utilizada para la identificacin de de los estreptococcos
del grupo B.
El factor CAMP es una sustancia extracelular producida por
los estreptoccos del grupo B que incrementa la lisis de los
eritrocitos por la -lisina estafiloccica
La prueba se realiza mediante la siembra de una placa de
agar-sangre con una cepa de estafilococo productor de lisina perpendicular a la linea de siembra de los
estreptococos en estudio.
Una zona de hemlisis aumentada,
en forma de punta de flecha en la
interseccin de la lnea de siembra
indica identificacin positiva de
estreptococo del grupo B
(Streptococcus agalactiae)

Genero Enterococcus

Los enterococos son cocos Gram-positivos que se

presentan apareados como diplococos; siendo difcil
distinguirlos
de
Streptococcus
con
solo
las
caractersticas fsicas.

Dos especies son organismos comensales en el

intestino de humanos: E. faecalis y E. faecium. El
enterococo es un organismo facultativo anaerbico,
prefieren usar oxgeno, pero sobreviven bien en su
ausencia. Tpicamente exhiben gamma-hemolisis en
sangre de cordero agar

Identificacin de enterococos
Cocos

grampositivos
catalasa negativos
Se desarrollan entre 10C y 45C
Crecen bien en NaCl al 6.5%
Hidrolizan la esculina en presencia de bilis
Crecen en agar sangre como colonias
pequeas, color crema o blanco, lisas de
borde entero

Identificacin de enterococcus
Crecimiento en agar sangre

Crecimiento en agar bilis esculina

Identificacin de enterococcus
Agar Slanetz and Bartley

Streptococcus pneumoniae

Identificacin de neumococo

Streptococcus pneumoniae en esputo

Streptococcus pneumoniae en LCR

Lquido cefalorraqudeo

Streptococcus pneumoniae

Los aislamientos de S. pneumoniae tienen un centro deprimido

(flechas amarillas) a las 2448 horas de incubacin,mientras
que los de estreptococo viridans retienen el centro elevado
(flechas verdes).

Streptococcus pneumoniae
La identificacin se lleva a cabo a travs de
tres pruebas:
- Su solubilizacin en presencia de sales biliares.
- Su sensibilidad a optoquina.
- La reaccin capsular frente a antisueros
especficos o "Quellung".

Streptococcus pneumoniae Prueba de optoquina

Prueba de solubilidad en bilis

BACILOS GRAMPOSITIVOS

Bacilos grampositivos no esporulados

Genero Listeria

Listeria monocytogenes es la especie de importancia

clnica
Se encuentra en una amplia variedad de hbitat,
incluyendo flora de animales y humanos y fuentes
ambientales como aguas residuales
Son bacilos grampositivos cortos 0.4 a 0.5 x 1 a 2 u
Producen colonias pequeas traslcidas y grices en
agar-sangre de carnero con una zona estrecha de hemlisis
Son catalasa positiva
Motilidad ptima a 25C
Crecimiento a 4C
Fermentan la glucosa, Trehalosa y salicina
Hidrlisis de esculina ( bilis-esculina)

Bacilos no esporulados

Corynebacterium

La especie tipo es Corynebacterium diphtheriae

Son comunes en suelo y agua y residen en piel y mucosas
de humanos y animales
Son bacilos pleomrficos grampositivos
Son aerobios o anaerobios facultativos
Catalasa positivos
Oxidasa positivos
Excepto C. diphtheriae se consideran contaminantes
cuando se aslan en los laboratorios clnicos

Bacilos no esporulados
Erysipelothrix

Erysipelothrix. rhusiopathiae
Morfologa y caractersticas culturales
Crecimiento en agar sangre produce hemlisis. Puede formar dos
tipos de colonias
lisas - contiene bacilos y cocobacilos
rugosas - contiene largos filamentos delgados
Por lo general, requiere 48 horas para el crecimiento
Microaeroflico con un mejor crecimiento de CO2 que en O2

Catalase, nitrato, ureasa negativa

inmovil
Produccin de H S on TSI
2

Cresimiento en cepillo en agar semisolido

Identificacin de bacilos grampositivos

Identificacin de bacilos grampositivos

BACILOS GRAMNEGATIVOS
NUTRICIONALMENTE
EXIGENTES
Haemophilus
Neisseria

Haemophilus

Son pequeos bacilos gramnegativos inmviles

Requieren factores de crecimiento que estn, presentes
en la sangre factor X (hemina) y factor V (NAD)
Crecen en agar-sangre preparado con 5% de sangre de
caballo o conejo
Pueden crecer en agar-sangre de carnero formando
diminutas colonias alrededor de colonias de
Staphylococcus aureus (colonias satelite)
Comprende nueve especies de importancia clnica

Haemophilus influenzae en Lquido cefalorraqudeo

Identificacin de especies de Haemophilus

Requerimiento de factores
Hemlisis

Catalasa

oxidasa

H. influenzae

H. parainfluenzae

H. haemolyticus

H. parahaemoliticus

H. aphophilus

H. paraphophilus

H. segnis

H. aegyptius

H. ducreyi

Microorganismo

Identificacin de Haemophilus

Requerimiento de factores de crecimiento

Neisseria

Son cocos gramnegativos , en pares, con aplanamiento

de los lados adyacentes de las clulas
Habitan las superficies de las menbranas mucosas de
animales y el hombre
Producen cotocromooxidasa y catalasa
Muchas especies requieren humedad elevada y 3-5% de
CO2 para su aislamiento inicial
Las especies patgenas son N. gonorrhoeae y N.
meningitidis, son exigentes y necesitan ciertos
componentes nutricionales para el crecimiento
El agar chocolate es el medio selectivo empleado para su
recuperacin

Identificacin de especies de Neisseria

Produccin de cido
Microorganismo

oxidasa

Catalasa

Creciemirnto en
medios
selectivos

Gluco
sa

Maltos
a

Fruc
tosa

Sacaro
sa

lacto
sa

N. gonorrhoeae

N. meningitidis

N. lactamica

N. sicca

N. subflava

N. mucosa

N. flavescens

N. cinerea

M. catarrhalis

Identificacin de Neisseria

Identificacin de Neisseria

Neisseria gonorrhoeae en secrecin uretral

Identificacin de Neisseria

Neisseria meningitidis en Lquido cefalorraquideo