Pontificia Universidad Catlica de Chile

Facultad de Ciencias Biolgicas

Departamento de Biologa Celular y Molecular
Biologa de la Clula BIO141C-7 y 8

Gua Ayudanta N3
Mtodos de estudio de la clula

10/18/16

Profesor:

Dra. Alicia Minniti

Instructora:

Teresita Caraccioli

1.- Realiza un cuadro comparativo entre microscopio

ptico, electrnico de transmisin y electrnico de
barrido, utilizando al menos 3 criterios.

Tipos de microscopa
Criterio

MO

MET

MEB

Lmite de
resolucin
Poder de
observacin
Fuente de
poder
Mtodo de
visualizacin
Estado de
muestra
Imagen

0,2 m

0,002 m

0,004 m

Superficie de la
muestra
Haz de luz

Interior de la
muestra
Haz de fotones

Superficie de la
muestra
Haz de fotones

Directa

Fluorescente

Digital

Viva o fijada

Muerta

Muerta

2.- Por medio del microscopio podemos ver algunos de los

organlos celulares, otros podremos distinguirlos mediante
el uso de marcadores. Por qu es esto? Cul es la
diferencia entre ver y distinguir?

En el microscopio solo se pueden ver aquellos organelos celulares

que superan en tamao al lmite de resolucin, aquellos que son de
tamao inferior se deben distinguir usando marcadores
colorimtricos, fluorescentes u otros.
La diferencia entre ver y distinguir guarda relacin con
visualizacin directa e indirecta, respectivamente, del objeto.

la

3.- Identifica a qu tipo de microscopa corresponden las

siguientes fotografas. Fundamenta tu respuesta

Microscopio ptico

Corte y Fractura

Microscopio Electrnico Barrido

Inmunofluorescencia
confocal

Microscopio Electrnico Transmisin

4.- Cul es la diferencia entre un cultivo primario y las

lneas celulares? Por qu se prefiere usar uno u otro modelo
de estudio? Cul es la diferencia entre un cultivo
proliferante y uno confluente?

Cultivo primario v/s Lneas celulares

Criterio
Morfologa

Cultivo primario
Conservada de
las clulas de
origen

Lneas Celulares
Distinta de las
clulas de origen

Capacidad de
Limitada
Desenfrenada
crecimiento
La eleccin de uno u otro modelo de estudio tiene que ver con las
caractersticas del mismo, mientras el cultivo primario presenta una
mejor actividad y funcionalidad, similar a su ambiente natural, la
lnea celular es ms estable en el tiempo.

Proliferante v/s Confluente

Un cultivo proliferante ser aquel en fase de crecimiento, que an no ha

cubierto la totalidad de la placa de cultivo, mientras que un cultivo
confluente ser aquel que ha detenido su crecimiento a causa del
fenmeno de inhibicin por contacto, al ocupar la totalidad de la placa de
cultivo en que se estn creciendo las clulas.

5.- En qu consisten las tcnicas de sonicacin y shock

osmtico? Cul es su utilidad?

Sonicacin

La sonicacin es una tcnica que consiste en aplicar energa del

sonido para agitar partculas en una muestra. Puede usarse para
producir nano partculas, apurar disoluciones, desactivar o romper
material biolgico, como por ejemplo: membranas celulares,
liberando el contenido celular. Tambin se usa para fragmentar
molculas de DNA.

Shock osmtico

El shock osmtico es un cambio brusco en la concentracin de

soluto alrededor de la clula, lo cual causa un rpido cambio en el
movimiento de agua a travs de la membrana celular. El stress
puede ser hperosmtico (el agua sale de la clula) o hipo osmtico
(el gua entra a la clula).

6.- Por qu se recomienda utilizar inmunocitoqumica

indirecta en lugar de directa?

Directo v/s Indirecto

Criterio
Metodologa

Sensibilidad

Representac
in

Directo
Uso de
anticuerpo
primario
marcado con el
fluorforo.
Baja
sensibilidad, no
hay
amplificacin.

Indirecto
Uso de anticuerpo
secundario, que
reconoce al primario,
marcado con fluorforo.
Mayor sensibilidad
producto de la
amplificacin.

7.- Respecto a cmo se

monoclonales y policlonales.

obtienen

los

anticuerpos

Monoclonal v/s Policlonal

Criterio
Origen
Poblacin
Sensibilidad
Especificidad
Obtencin

Monoclonal
Lnea celular nica
Homognea
Baja
Alta

Policlonal
Mltiples lneas celulares
Heterognea
Alta
Baja

8.- Compara las Cromatografas de Exclusin molecular,

Intercambio Inico y Afinidad como tcnicas de
purificacin de protenas. Por qu se recomienda utilizar
ms de una para purificar una protena?

Intercambio
Inico

Exclusin
molecular

Cromatografa
de afinidad

Criterio

C. Exclusin
molecular

C. Intercambio
Inico

Separacin

Tamao

Carga

C. Afinidad

Unin
especifica a
ligando
Fase
Esferas porosas
resina de
inmunoafinid
estacionari
(polmero)
intercambio
ad, por
a
inico (Sulfnicos ligando, por
(-), Carboxilo (-),
lectina, y
Amino cargado
metal
(+), Amino
inmovilizado
cuaternario (+).

9.- Ordene las protenas a continuacin de acuerdo a

como se ubicaran en un gel luego de realizar una
electroforesis: Hemoglobina, Hemoglobina glicosilada,
Albmina, Tubulina, Elastina.

Hemoglobina (64 KDa), Albmina (66,5 KDa), Tubulina

(55 KDa), Elastina (70 KDa).

Molculas ms
grandes

Molculas ms
pequeas

Electroforesis
STD

70 KDa

60 KDa

50 KDa
20 KDa

Muestras
Hemoglobina (64
KDa)
Albmina (66,5
KDa)
Tubulina (55 KDa)
Elastina (70 KDa).

10.- Suponiendo que usted desea estudiar la enzima

catalasa
ubicada
en
los
peroxisomas.
Qu
procedimiento debera llevar a cabo para purificarla a
partir de un cultivo celular a modo de poder realizar
ensayos enzimticos?

Pasos

Homogenizar (ruptura celular)

Fraccionamiento
(obtencin
de
orgnulo)

Centrifugacin diferencial / Gradiente de Densidad.

Purificacin por cromatografas (afinidad, exclusin
molecular, entre otras)

11. Investiga respecto a la biblioteca genmicas.

En qu consisten y cmo se construyen?

Una
biblioteca
genmica
es
una
coleccin
de
fragmentos de DNA en
la que se espera estn
incluidas
el
mayor
nmero de secuencias
posibles de un genoma
o
las
secuencias
contenidas
en
un
cromosoma.

stas almacenan una

coleccin
de
genes
clasificados
y
preparados
para
su
utilizacin
en

12.- Para la produccin de insulina para fines mdicos, se

han modificado cepas de Escherichia Coli en laboratorio
para que produzcan grandes cantidades de insulina en su
interior en medios de cultivo, para posteriormente romper
las bacterias y purificar la insulina utilizando columnas
cromatogrficas. Cmo crees que es posible hacer que
estas bacterias produzcan insulina?

Consiste en extraer de
clulas humanas el gen que
porta la informacin para
fabricar insulina humana.
Las bacterias que tienen el
gen humano de la insulina se
multiplican a un ritmo veloz
y, a medida que lo hacen,
producen
grandes
cantidades
de
insulina
humana,
entre
otras
sustancias.
Entonces,
la
insulina humana se extrae
de las bacterias y se purifica

13.- En qu consiste la tcnica de PCR y cul es su

gran utilidad en la experimentacin cientfica?

Su utilidad es que tras

la
amplificacin
resulta mucho ms
fcil identificar con
una
muy
alta
probabilidad,viruso
bacteriascausantes
de
unaenfermedad,
identificar
personas
(cadveres) o hacer
investigacin cientfica
sobre
el
ADN

14.- Investiga respecto a los test de paternidad. Qu

tcnicas se utilizan? Qu tipos de secuencias son
amplificadas? Por qu son tan confiables? Adems del
DNA del supuesto padre y el del hijo, se requiere el
DNA de la madre para realizar un estudio
verdaderamente confiable por qu?

Short Tandem Repeats (STRs)

Homocigoto = ambos alelos tienen el mismo nmero

de repeticiones
Heterocigoto = los alelos son diferentes y pueden ser
distinguidos uno del otro

Los STR tienen una alta variabilidad entre individuos,

sin embargo, se heredan de una generacin a otra sin
cambios.

Padre

Hijo

Madre