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Ministre d l'Enseignement Suprieur et de
Recherche
Scientifique
HAMMA LAKHDHER ' Universit
Facult des sciences de la nature et de vie
Matire : Ingnierie
molculaire
1re
master
biochimie
protinesappliqu
e
Expos
Production
de
sur
Nivea
:u
recombinent comme
humain dans pichia pastoris
Prsent
:par
REHOUMA
DalalSOLTANE Teber-ZBDI Marwa -
Plan du
travails
Introduction
Dfinition de Systme d'expression de pichia pastoris
les avantages et inconvnient de pichia pastoris
Lapplication et les phnotype de pichia pastoris
Paramtres oprationnelles
Prparation de l inoculum Et support de croissance
Les phases de La fermentation
Objectif
-1
Introduction
systme d'expression correspond l'organisme que est utilises
Quelleest
dfinition
de P.P le
? et
leur d'expression
pour exprimer
la la
protine
,on tudie
systme
?caractristique
htrologues
de levure
gnral et le
d'expression de
?Quelle
est lesenphnotypes
desystme
P.P
Quelle
est les phases
de systmes
fermentation
? Et les
P. pastoris
en particulier
. Cette
volutifs
et rentables
? paramtres de cette opration
.de fabrication du protines thrapeutiques de humain
Dfinition-2
unicellulaire mthylotrophique
Pichia Pastoris
Facilit la purification
de protines d'intrt.
Le systme est un
.productif et rentable
Comportant des
squences de
signal qui facilit
.vecteur intgrative la scrtion de
modifications post protines
htrologues
. traductionnelles
Vecteur dexpression
MAIS
Il y a des inconvnients pour cette systme
Lapplication
production de produit
pour l'industrie
biopharmaceutique
et
encoure les enzymes
industriels pour un
.effet thrapeutique
les phnotypes
+Mut
MutS
-Mut
La souche
MC100-3
Les souches
SMD1168 et
SMD1165
Temprature T
mthanol
glycrol
Soit
kcal / g de 2,6
substrat
consomm / heure
Alimentation en oxygne
Les taux de
consommation d'oxygne
pour le glycrol
Les taux de
consommation d'oxygne
pour le mthanol
mM O2 / g de 13
substrat
.consomm / heure
mM O2 / g de 35
substrat
.consomm / heure
PH
L'hydroxyde d'ammonium
est utilis pour contrler le
pH et sert galement de
.source d'azote
glycrol
0.1 5.0
mthanol
25
de glycrol 1%
et biotine
OU
de de glycrol
minimal tamponn
(BMGY) qui
contient
peptone et
l'extrait de
levure
BS est strilis
par la chaleur
dans le
. fermenteur
Oligo-lment
strilis par
filtration avant
de l'utiliser
Phase
1
Phase
2
Phase
3
Mut
Taux- dalimentation
(3.5ml / h/L)
Maximiser les
niveaux dexpression
de protines
dO2 en
prsence
dexcs de
mthanol
Mut
S
La
consommat
ion dO2
est trs
.lent
L de
formaldhyde
(la mort
cellulaire )
La mme que
Mut
DO ne peut
pas utilis
Mut
MERCI