UNIDAD III

MTODOS
CROMATOGRFICOS

Q.B.P. JOS ALFREDO GALEANA

HERNNDEZ

 De
los
vocablos
chroma
color y
graphos
escribir
.

CROMATOGRAFA
Mtodo fsico o de separacin, utilizado
para
poder
caracterizar
mezclas
complejas.
Tiene aplicacin en todas las ramas de la
ciencia y la fsica.
Es un conjunto de tcnicas basadas en el
principio de retencin selectiva.
Tiene el objetivo de separar distintos
componentes de una mezcla, permite
identificar y determinar las cantidades de
dicho componente.

 Las tcnicas cromatogrficas son muy

variadas, pero en todas ellas hay una
fase mvil y una fase estacionaria.
Fase mvil: Consiste en un fluido (gas,
lquido o fludo supercrtico) el cual
arrastra a la muestra.
Fase estacionaria: Se trata de un
slido o un lquido fijado en un slido,
por el cual pasa la fase mvil.

 Los
componentes
de
la
mezcla
interaccionan en distinta forma con la fase
estacionaria.
De
este
modo,
los
componentes
atraviesan la fase estacionaria a distintas
velocidades y se van separando.
Despus de que los componentes hayan
pasado
por
la
fase
estacionaria,
separndose, pasan por un detector que
genera una seal que puede depender de
la concentracin y del tipo de compuesto.

La cromatografa cumple 2 funciones

bsicas:
Separa los componentes de la
mezcla, para obtenerlos ms puros y
que puedan usarse posteriormente
(etapa final de sntesis).
Mide
las
proporciones
de
los
componentes de la mezcla (etapa de
finalidad analtica).

Las
distintas
tcnicas
cromatogrficas pueden dividirse
segn su fase estacionaria en:
Cromatografa
plana:
La
fase
estacionaria se sita sobre una placa
o sobre un papel, sus tcnicas son:
Cromatografa
en
papel
y
cromatografa en capa fina.
Cromatografa en columna: La fase
estacionaria se sita dentro de una

Segn el fluido empleado como fase

mvil, podemos encontrar:
Cromatografa de lquidos.
Cromatografa de gases.
Cromatografa
supercrticos.

de

fluidos

 Cromatograma:
Es el resultado
grfico
de
la
cromatografa. En
el
caso
de
separacin
ptima,
los
diferentes picos o
manchas
del
cromatograma se
corresponden
a
los componentes
de
la
mezcla
separada.

CROMATOGRAFA DE
GASES

 Es una tcnica cromatogrfica en la que

la muestra se volatiliza y se inyecta en
la cabeza de una columna.
La elucin se produce por el flujo de
una fase mvil de gas inerte.
A diferencia de los otros tipos de
cromatografa, la fase mvil no
interacta con las molculas del
analito, su nica funcin es la de
transportarlo a travs de la columna.

 Existen dos tipos de cromatografa

de gases: La cromatografa de gasslido y la cromatografa de gaslquido.
La ltima es la que se utiliza ms
ampliamente.

 En la cromatografa de gas slido, la

fase estacionaria es slida y la
retencin de los analitos en ella se
produce mediante el proceso de
adsorcin.
Este proceso de adsorcin es el que ha
provocado que su uso sea limitado, ya
que la retencin del analito sobre la
superficie es semipermanente.
Slo se aplica para separar especies
gaseosas de bajo peso molecular.

 La cromatografa de gas-lquido
utiliza como fase
estacionaria
molculas
lquidas
inmovilizadas
sobre la superficie de un slido
inerte.

Cromatgrafo de gases

 Gas portador:
Cumple
dos
propsitos,
transporta los
componentes
de la muestra y
crea una matriz
adecuada para
el detector

Caractersticas de un gas portador:

Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto
con la muestra como con la fase estacionaria).
Debe ser
gaseosa.

capaz

de

minimizar

Fcilmente disponible y puro.

Econmico.
Adecuado al detector a utilizar.

la

difusin

 Sistema
de
inyeccin
de
muestra: Es un apartado crtico, ya
que se deben inyectar una cantidad
adecuada y debe introducirse de
forma rpida.
Se
utiliza una microjeringa para
introducir el analito en una cmara
de vaporizacin instantnea.
La cmara de vaporizacin est a 50
oC por encima del punto de ebullicin
del componente menos voltil.

Inyector de muestra para

CG

Columnas y sistemas de control de

temperaturas:
Hay
2 tipos de columnas, las
empaquetadas o de relleno y las tubulares
abiertas o capilares.
Son ms comunes las ltimas debido a su
mayor rapidez o eficacia, estn fabricadas
de acero inoxidable, vidrio, o slice fundida.
Las columnas suelen enrrollarse en una
forma helicoidal.
La
temperatura
es
una
variable
importante, de ella va a depender el grado
de separacin de los diferentes analitos.

Detectores: Es la
parte
del
cromatgrafo que
se
encarga
de
determinar
cundo a salido el
analito por el final
de la columna.

Aplicaciones de GC:
Su gran capacidad para separar
mezclas
orgnicas
complejas,
compuestos
organometlicos
y
sistemas bioqumicos.
Es un mtodo para determinar
cuantitativamente y cualitativamente
los componentes de la muestra.

Cromatografa de lquidos
de alta resolucin

 Comenz a desarrollarse en los aos de

1960.
Es la tcnica cromatogrfica ms empleada.
En este tipo de cromatografa se utiliza una
fase mvil y una fase estacionaria muy
finamente dividida.
El lquido se somete a una presin de
cientos de libras de pulgadas para lograr
una velocidad de flujo satisfactoria.

Tipos de HPLC
Cromatografa de fase normal:
Primer tipo de HPLC utilizado en el campo de
la qumica.
Se caracteriza por separar los compuestos en
base a su polaridad.
Esta tcnica utiliza una fase estacionaria
polar y una fase mvil apolar y se utiliza
cuando el compuesto de inters es bastante
polar.

 Cromatografa de fase reversa:

Consiste en una fase estacionaria
apolar y una fase mvil de polaridad
moderada.
El tiempo de retencin es mayor para
las molculas de naturaleza apolar,
mientras que las polar, eluyen ms
rpidamente.

 Es muy utilizada que se lo denomina

HPLC sin ninguna especificacin.
Se basa en el principio de las
interacciones
hidrofbicas
que
resultan de las fuerzas de repulsin
entre un disolvente relativamente
polar, un compuesto relativamente
apolar y una fase estacionaria apolar.

Cromatografa de exclusin
molecular:
Tambin
conocida
como
cromatografa por filtracin en gel
separa las partculas de la muestra
en funcin de su tamao.
Generalmente se trata de una
cromatografa de baja resolucin, de
forma que se suele utilizar en los
pasos
finales
del
proceso
de

 Cromatografa
inico:

de

intercambio

La retencin se basa en la atraccin

electrosttica entre los iones en
solucin y las cargas inmovilizadas a
la fase estacionaria.
Los iones de la misma carga son
excludos mientras que los de carga
opuesta son retenidos por la

Cromatografa basada en la bioafinidad:

Este tipo de cromatografa se basa en la

capacidad de las sustancias biolgicamente
activas de formar complejos estables,
especficos y reversibles.

La formacin de estos complejos implica la

participacin de fuerzas moleculares como
las de Van Der Waals, Interacciones
electrostticas, interaccin dipolo-dipolo,
interacciones hidrofbicas y puentes de
hidrgeno.

 INVESTIGAR:
Principios de anlisis instrumental
Cromatografa de gases: gas-slido y
gas-lquido. Captulo 27
Cromatografa de lquidos de alta
eficacia:
1.-Cromatografa de reparto.
2.- Cromatografa de adsorcin.
3.- Cromatografa inica.
4.- Cromatografa en geles. Captulo 28