UNIVERSIDAD POLITCNICA DE

ZACATECAS
PCR EN TIEMPO REAL
INGENIERA GENTICA

FUNDAMENTO
La PCR cuantitativa se realiza en un termociclador con capacidad de hacer
incidir sobre cada muestra un haz de luz de una longitud de onda
determinada y de detectar la fluorescencia emitida por el fluorocromo
excitado, es un aparato con capacidad para calentar y enfriar rpidamente
las muestras, aprovechando las cualidades fisicoqumicas de los cidos
nucleicos y las enzimticas de el ADN polimerasa.

 El proceso de PCR por lo general consiste en una serie de cambios de

temperatura que se repiten en 25 - 40 veces, llamados ciclos, donde cada uno
posee un mnimo de tres etapas:
1.

En torno a los 95C, permite la separacin de los cidos nucleicos de doble

cadena.

2.

A una temperatura en torno a los 50-60C, permite el alineamiento de los

cebadores al ADN molde.

3.

A 68 - 72C, facilita la polimerizacin por parte de la ADN polimerasa.

 Debido al pequeo tamao de los fragmentos

amplificados usualmente en este tipo de PCR puede
omitirse el ltimo paso, pues la enzima es capaz de
amplificar durante la rampa entre la temperatura de
alineamiento y la de desnaturalizacin.

DETERMINACIN DE SALMONELLA SPP.

POR PCR EN TIEMPO REAL Y MTODO
CONVENCIONAL EN CANALES DE
BOVINOS Y EN ALIMENTOS DE LA VA
PBLICA DE MONTERA, CRDOBA

OBJETIVO
Determinar la presencia de Salmonella spp. en canales
de bovinos de una empresa procesadora de carnes con
sistema HACCP (Hazard Analysis and Critical Control
Points) y en alimentos expendidos en la va pblica,
mediante la tcnica PCR-TR y el mtodo convencional.

INTRODUCCIN
Las infecciones por Salmonella spp. pueden causar
pequeos brotes en la po- blacin; entre 60% y 80% de
los casos son espordicos.
La biotecnologa ha permitido el desarrollo de diversos
mtodos alternativos, los cuales proporcionan ventajas
en cuanto a eficiencia, sensibilidad y disminucin del
tiempo de deteccin.

 Basados en la determinacin de cidos nucleicos,

tienen la potencialidad de ser muy especfcos. Tal es el
caso de la tcnica de reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR) y la tcnica PCR-TR (real time PCR),
ambas tecnologas moleculares basadas en la
amplifcacin in vitro del ADN; esta ltima tiene la
ventaja de que lleva a cabo simultneamente los
procesos de amplifcacin y deteccin en el mismo vial
y que determina la cantidad de ADN sintetizado .

METODOLOGA

 RESULTADOS

 Segn el anlisis estadstico 2, las tcnicas utilizadas

para determinar Salmonella spp. en los alimentos
mostraron diferencia significativa (p<0,001).

 Del total de muestras analizadas, sin importar el origen

y el tipo de alimento, se obtuvo una frecuencia de
Salmonella spp. de 16,1% (50/311), ya que 7 fueron
positivas por los dos mtodos; con respecto a los casos
positivos, la PCR-TR mostro una especificidad de 68%,
mientras que para el mtodo convencional, fue de
46%.

 El origen de las muestras con respecto al numero de

casos positivos, independientemente de la tcnica
utilizada, mostro diferencias significativas (p<0,001):
la planta de beneficio animal, certificada con sistema
HACCP, una Salmonella detectada, y las ventas
callejeras, 49 microorganismos detectados.

DISCUSION

 Al comparar los resultados obtenidos en el trabajo por

el mtodo convencional con otros estudios realizados
en Colombia y en otros pases de Amrica Latina y del
Caribe que utilizaron la misma metodologa, se
encontr que son iguales a los reportados por Durango,
quienes aislaron Salmonella spp. en 7,4% de las
muestras de alimentos del Caribe colombiano. Sin
embargo, son mas bajos que los de Carrascal quienes
aislaron Salmonella spp. en 2,08% en la misma regin.

 Con respecto al uso de la PCR-TR para la deteccin rpida de

Salmonella spp., directamente de alimentos, al comparar los
resultados obtenidos por la tcnica de PCR-TR con otros estudios
realizados en el mundo, se encontr que son inferiores a los
reportados por Malorny,
Daum y Chen, quienes aislaron
Salmonella spp. en 25,5%, 11% y 30,9%, respectivamente, en
muestras de alimentos de Estados Unidos y Canad. Sin
embargo, son muy similares a los resultados obtenidos por
Kimura quienes aislaron Salmonella spp. en 10% de muestras
de carne cruda en Japon.

CONCLUSIN

 La PCR T-R es una valiosa alternativa para determinar

Salmonella spp., en alimentos por su especificidad y
rapidez. Tambin es importante la alta presencia de
Salmonella en los alimentos callejeros, siendo un
problema para la salud publica de los consumidores

GRACIAS

BIBLIOGRAFA
Kubista M, Andrade JM, Bengtsson M, Forootan A, Jonak J, Lind K, Sindelka R,
Sjoback R, Sjogreen B, Strombom L, Stahlberg A, Zoric N (2006). The realtime polymerase chain reaction. Mol Aspects Med. 27(2-3):95-125.