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ADN
Conclusiones
El ADN es una doble
hlice, con las bases
dirigidas hacia el centro,
perpendiculares al eje de
la molcula y las unidades
azcar-fosfato a lo largo
de los lados de la hlice
Estructura primaria
DNA: unin de 2 bandas antiparalelas:
doble helix
Estructura secundaria
EXPRESIN GNICA
Etapas
Inicio
Reconocimiento de Ori C por DNaA
Formacin de orquilla (DNaB o helicasa)
Formacin del primosoma y del replisoma
Elongacin
Trmino
Estructura de oriC de E. coli
Ordenamiento en
Sitios de fijacin de la protena DnaA
tndem de tres
cuatro secuencias de 9 pares de bases
secuencias de 13 pb
Replisoma
Cebador: 10-12
Fragmanto de Okasaki: 1000 nt
Terminacin de la replicacin
ter
Tus
Terminacin de la replicacin
Terminacin de la replicacin
Terminacin de la replicacin
TopoIV
En dependencia de la polaridad que presente la secuencia Ter y por
tanto la ubicacin de la protena Tus se detendr una u otra
horquilla de replicacin
Control de la replicacin
Rnasa P de
E. coli
Estructura Secundaria del
ARN
La estructura secundaria del ARN est compuesta
principalmente por regiones de ARN de doble cadena
originadas por plegamiento de la molcula lineal
sobre si misma.
Transcripcin
ETAPAS
ENSAMBLAJ
E DE
RNApol E
INICIACIN
PROMOTORES
ELONGACI
N
TERMINACIN
INDEPENDIENTE DE
RHO
TERMINACIN
DEPENDIENTE DE
RHO
Tipos de ARN
Mensajero
Transferencia
Ribosmico
Uracilo
De interferencia
ARNm
Monocatenario
Vida media corta
Sintetizado por ARNpol
Proteccin
Procariotas
5PPP
ARNt
73 90 nucletidos
25 000 daltons
45% ARN total
Forma
Trbol de 3 hojas (complementariedad intracatenaria)
Nucletidos poco usuales:
Pseudourdico
Inoslico
Timina
Estructura ARNt
Mutaciones
Transferencia gentica
Recombinacin
Clasificacin
Por origen
Espontaneas
Inducidas
Por amplitud de efecto
Gnicas
Cromosmicas
Genmicas
Por su consecuencia
Tipos de Mutaciones
Mutaciones Gnicas (Puntuales)
Sustitucin de nucletidos Transiciones
Transversione
s
Adicin o supresin puntuales frameshift
Afecta pocos nucletidos pero no en mltiplo de 3
Mutaciones cromosmicas
Grandes delecciones (o borraduras)
Inversiones
Translocaciones
Duplicaciones en tndem
Mutaciones insercionales por elementos
transponibles
Una mutacin por sustitucin de una base es un
cambio de un nico par de bases por otro par
diferente
Mutaciones difieren en sus efectos sobre la
estructura y funcin de las protenas
SUPRESION
Indirecta
i) Se abre una nueva va para la sntesis del producto afectado
por la 1 mutacin.
ii) El producto mutado de la 2 mutacin puede sustituir al
producto de la primera.
iii) Se provoca un cambio en el medio intracelular, que hace
Directa
Intragnica
Intergnica
Mutaciones inducidas
Agentes fsicos
Radiacin UV
Radiacin ionizante
Agentes qumicos
Anlogos de bases
5-BrU, 2-AP
Agentes desaminantes o hidroxilantes
Acido nitroso, hidroxilamina
Agentes alquilantes
Gas mostaza, EES, EMS, NTG
Agentes intercalantes
Naranja de acridina, bromuro de etidio, proflavina
A. bloqueadores de emparejamiento de bases
benzo-a-pireno, aflatoxina B1
Agentes Mutagenicos
Agente Accin Efecto
Anlogos de Base
5 Bromouracio Se incorpora como T: a veces A- T G C
aparea con G
2 Aminopterina Se incorpora como A: a veces A- T G C
aparea con C
Reaccin con DNA
cido nitroso Deamina A, C A- T G C
Hidroxilamina Reacciona con C G - C A- T
Agentes alquilantes
Etilen etanosulfonato Inserta metilo en G G - C A- T
Mostazas nitrogenadas, Entrecruzamientos de hebras Mut. Punt. y delecc.
.. NTG
Acridinas, bromuro Colorantes intercalantes Cambio del marco de
de .. .. etidio lectura
Radiaciones
UV Formacin de dmeros Reparacin c/s delecc
Ionizantes Reparacin c/s delecc
Formacin de radicales libre
Mutagnesis
Tasa de mutacin
expontnea
Mide frecuencia de mutacin
Requiere grandes poblaciones
Hace uso de tcnicas especiales
Formula
Nmero de
mutantes
N de Wild Types
Expresin
Mutantes/clula/generacin
Usos
Gentica de poblaciones
Estudios de evolucin
Mecanismos prerreplicativos
Mecanismos posreplicativos
Mecanismos prerreplicativos:
Reparacin
por Dmero
de
fotoreactivaci timina
n
Fotolias
a
Luz
visible
Escicin por
UvrA2BC
Reparacin
por Remosin del
escisin y segmento daado por
UvrD (helicasa)
resntesis
DNApol I
Ligasa
Mecanismos posreplicativos:
Reparacin por recombinacin directa
RecA
Exonucleasas V (recBCF) y exonucleasa I
(sbcB)
Reparacin
de
apareamien
to errneo
Reparacin
SOS
Consecuencias
Aumentan los niveles de RecA
(reparacin por recombinacin)
Aumentan los niveles de la
escinucleasa (reparacin por escisin-
resntesis)
Se expresan los genes umuDC
(aumento de la mutagnesis). Hay
una sntesis de emergencia de
ADN que acarrea la frecuente
introduccin de bases incorrectas
Mecanismos que introducen
variabilidad en el genoma
Recombinacin
Transferencia de Informacin
Transferencia de material
gentico
Transformacin
ADN
CROMOSMICO
Transduccin
ADN
Conjugacin EXTRACROMOSMICO
Transformacin
Factores que afectan
Tamao del ADN donador (5x105 d)
Nucleasas ambientales
Competencia del receptor
Factor de competencia
Tipos
Natural
Inducida (CaCl2)
Etapas
Toma de ADN
Recombinacin homloga (recA, B y C)
Transduccin
Vector: fago
Tipos
Generalizada
Cualquier gen del donador
Fagos lticos
Especializada
Determinados genes
Fagos lisognicos o temperados
Transduccin
Generalizada
Transducci
n
Especializad
a
Conjugacin
Requisitos
Contacto fsico entre las clulas
Tipos celulares
Donador Factor F
Receptor Falta de
Factor F
Procesamiento de ARN
Sustitucin de factores :
25- 70
37C
45- 32 o H
50C
Nutrien 38
tes
Medio 28 o F
lquido
Regulacin por interaccin
con protenas
Tipos
Negativa por represores
Positiva por activadores
Control Negativo con inductor
REGULACIN DEL OPERN lac DE E. coli
(lac
I)
Transcripcin
galactosidasa bloqueada
galactosido
repres permeasa
or galactosido
transacetilasa
Ocurre la
transcripcin
lactos Represor
a
Inductor
Represor Lac: unin al ADN
-5 +1 +2
1
Control negativo con correpresor
EL CASO DEL OPERN trp DE E. coli
Control positivo
Opern lac
Opern ara
Reguln
Opern gal CAP
Opern mal
Represin catablica o efecto
glucosa
Regulaci
n positiva
Elementos del control
positivo del opern lac
CRP o CRP-AMPc
Gen crp CAP
apoinduct inductor
or
AMPc
Adenilato ciclasa
Gen cya
ATP
Opern lac:
EIIaGlc~
P (+)
Operon arabinosa
Operon Arabinosa: zonas de
regulacin
Regulaci
n del
opern
arabinosa
Sitios de Unin a AMPc-CRP
Clase I
61 pb
Promotor
Clase II 41 pb
Promotor
TGTGA - N6 -
TCACA
Opern lux
Atenuacin de la
transcripcin:
Opern trp
N
C
Sistemas de
regulacin de dos
componentes
C
Ejemplos:
CbrAB de Ps. Putida (aas como nica fuente de C)
cbrA sensor
cbrB regulador de respuesta
Sistema Ntr
Responde ante los niveles de amonio
Permite el uso de fuentes alternativas de N 2
Sistema de respuesta ante osmolaridad
Aumento de presin osmtica detectado por
EnvZ, que fosforila a
OmpR que controla las proporciones relativas de
dos porinas, OmpC y OmpF
Haciendo que predomine la porina de poro ms
pequeo (OmpC).
2. A nivel traduccional
En respuesta a
daos en el ADN
RecA adquiere
actividad proteasa,
degrada a LexA
(represor de todo
el sistema) y lo
inactiva
Choque trmico
En respuesta a un
aumento de temperatura
(condiciones de estrs)
se incrementa la
produccin de un factor
sigma alternativo de la
ARNpol ( 32) que
compite con 70 por el
ncleo enzimtico
Se detienen la
transcripcin de ciertos
genes y se transcriben
nuevos genes
Control estricto
Cuando el aporte de
aminocidos es
insuficiente la bacteria
responde reduciendo al
mnimo la actividad
metablica.
La seal es la presencia de
un ARNt vaco en el sitio
A de un ribosoma.
La protena RelA (factor
estricto) unida al
ribosoma cataliza la
sntesis de guanosina
tetrafosfato (ppGpp), que
acta como efector.