100 101 102 103 104

CD45 APC ->

JESUS CERVERO LLACER MO.001
 MORFOLOGA
CLNICA
CITOQUMICA

DIAGNSTICO

CITOMETRA CITOGENTICA + FISH

DE FLUJO BIOLOGA MOLECULAR
 CLASIFICACIONES Y SU EVOLUCION

INMUNOFENOTIPO
MORFOLOGIA BIOLOGIA
CELULAR MOLECULAR
1986 2001
+ FAB MIC REAL OMS
1976 1999
CITOQUIMICA
OMS
2008
GENETICA
Definicin ICD
Epidemiologa Etiologa
Compromiso Clnica
Morfologa Variantes morfolgicas
Cito/histoqumica
Inmunofenotipo
Gentica y Biologa molecular
Factores pronsticos y predictivos
Terapia
0 256 512 768 1024
FSC-Height ->
J ORDI BONILLO ALOY PL D.S..115
COMPARTIMENTOS CELULARES

CITOPLASMA : MPO,
MEMBRANA CD79a, Ig, CD22, CD3
CELULAR :
>CDs

NCLEO : TdT
CARACTERIZACIN INMUNOFENOTPICA
DE LAS CLULAS

QU
CARACTERIZA A LAS CLULAS
NORMALES ?
Expresin del linaje celular y estado de maduracin.

EN QU DIFIEREN LAS ANORMALES ?

Reflejan desarreglos de expresin proteica con
fenotipos aberrantes con o sin anomalas genticas
asociadas
 Intensidad fluorescente anormal por Ac
Ausencia o sobreexpresin de Ac
Expresin asincrnica madurativa
Maduracin/compartimento biolgico
Curva de maduracin anormal
Expresin antignica de varios linajes
 Mdula sea
Sangre perifrica
Lquidos corporales (cavidades,lavados)
Tejidos slidos (piel, ganglios linfticos,
otros)
 Recepcin: datos clnicos y dx. presuntivo
Lisado glbulos rojos no nucleados (muestras
hematolgicas)
Lavado y filtrado (muestras no hematolgicas)
Aplicacin de Ac : paneles (fases)
Adquisicin y almacenamiento de data
Anlisis e interpretacin
Impresin e informe
 MDULA SEA NORMAL

Eosinfilos

Neutrfilos

Monocitos

CD34+ HPC
Rojos nucleados
100 101 102 103 104
CD45 PERCPCY5,5 ->
10277.008
Linfocitos
DISTRIBUCIN DE POBLACIONES EN MDULA
SEA NORMAL

SUBPOBLACIONES MO % NORMAL MO
% CD34+ 1.1 0.6 (0.3-2.6)
% CD34+ y/o CD117+ 2.2 1.4 (0.6-6)
% Eritroide 4.7 2.1 (2-9)
% Neutrfilos 67 6.1 (57-80)
% Monocitos 4.3 1.4 (2-6.5)
% Eosinfilos 2.5 1.3 (0.8-5)
% Basfilos 0.4 0.7 (<0.1-2.4)
% Mastocitos 0.02 0.01 (<0.03)
% Plasmticas 0.2 0.2 (0.01-0.5)
% Linfocitos B maduros 2.9 1.5 (1.6-6.3)
% Linfocitos B precursores 0.9 1.5 (0.1-3.9)
% Linfocitos T 9.2 4.5 (2.6-18)
% Linfocitos NK 2.8 1.4 (0.7-5)
 HEMATOPOYESIS
T-lymphocytes
B-lymphocytes
NK-cells
Plasmacytoid DC
Lymphoid precursor

Erythroid cells
Megakaryocytic cells
Stem cell Neutrophils
Monocytes
Monocytic DC
Eosinophils
Myeloid precursor Basophils
Mast cells
Myeloid DC
INMUNOFENOTIPO DE PRECURSORAS
B NORMALES - MDULA SEA
CD38 SmIgM
CyIg
CD10 M
CD34

TdT

CD45

CD22 CD19
CD20

I II III IV
ORIGEN Y MADURACION : LINFOCITOS B

HLA-DR
TdT 34 Stem Cell

HLA-DR 19

79a TdT Pro B

34
MEDULA
HLA-DR 19
OSEA :
PRECURSOR
79a TdT
10 B Comn

B Madura 34 20

HLA-DR 19 HLA-DR 19

79a SmIg 79a TdT CyIgM Pre B

20 10 20

SANGRE
GANGLIO L.
Linf B Nave circulante BAZO, OTROS:
PERIFERICO
ORIGEN Y MADURACION : LINFOCITOS T

34
Stem BONE
Cell MARROW
34

3 TdT ProT
7
2
TdT
3
LINEAGE 7 LINEAGE
2

CORTEZA
Doble Negative

3 TdT
7 Early 3
5%

2
Thymoc
Common
yteThymocyte T
5
Early 7 2
Cortica
Thymocyte TdT 2 5
H
3

l 7 1 TdT
Doble Positive

3 4 5
2 2
Y
Thimoc 5 7 8
80%

yte
4
3
7 3 M
7 8 U
2 5 2
(10%)
S
5
(5%)
Mature
Mature 3 3
Thymocyte 4 7
Thymoc 7
2 5 2
8
5 2 5 3
yte
3 3 P.B.
7 8 LYMPHNODE
HELPER 7 4 7 3 7 2
CITO/SUPPRESSOR
SPLEEN
CITOTOXIC
 MADURACIN GRANULOCTICA

MIELOBLASTO PROMIELOCITO MIELOCITO METAMIELOCITO SEGMENTADO

CD13

103

CD117

102 CD33
CD11b
CD15
CD34 CD16
101

CD65
HLA-DR CD10
(Adaptado de Orfao et al. Haematologica, 2003 )
 MADURACIN MONOCTICA

MONOBLASTO PROMONOCITO MONOCITO

103
HLA-DR
CD33
102
CD13
CD15
CD36 CD11b
101
CD117
CD34 CD11c CD14
(Adaptado de Orfao et al. Haematologica, 2003 )
 MADURACIN ERITROIDE

PROERITROBLASTO ERITROBLASTO HEMATE

103
CD71
Glicoforina A
CD34
102
CD117
HLA-DR

101 CD45

(Adaptado de Orfao et al. Haematologica, 2003 )

 MADURACIN MEGACARIOCTICA

INMADURO MADURO

103
CD36
CD41
CD42
102
CD61
CD34
CD117 HLA-DR
101

(Adaptado de Orfao et al. Haematologica, 2003 )

P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
COMBINACIONES X 4 FL
FITC PE PerCP/Cy5.5 APC
cCont. cCont. CD45 CD34
nTdt cMPO CD45 CD34
cCD3 CD7 CD45 CD34
CD19 cCD79a CD45 CD34
CD20 CD10 CD19 CD34
sCont. sCont. CD45 CD34
HLADR CD117 CD45 CD34
HLADR CD123 CD45 CD34
CD11b CD13 CD45 CD34
CD15 CD16 CD45 CD10
CD36 CD64 CD45 CD14
CD33 CD61 CD45 CD34
CD71 GphA CD45 CD34
CD2 CD56 CD45 CD34
 PANEL INICIAL

FITC PE PerCP APC

Control Control Control
CD4 CD8 CD3
CD16 CD19 CD3 CD45
CD20 CD10 CD19 CD34
CD34 CD33 HLA-DR CD45
CD2 CD5 CD7
CD36 CD13 CD45 CD34
CD15 CD117 CD34 CD45

CD61 CD34 CD45

 EXPRESIN ANTGENICA

-Lnea granuloctica: CD11b, CD13, CD15, CD16, CD33, CD65,

CD117, MPOc.
MPOc
-Lnea monoctica: CD11b, CD11c, CD14, CD36, LISOZIMAc.
LISOZIMA
-Lnea eritroide: glicoforina A, CD71.
-Lnea megacarioctica: CD41, CD42, CD61.
-Lnea B: CD10, CD19, CD22, CD79ac.
CD79ac
-Lnea T: CD2, CD3c,
CD3c CD4, CD7.
-Lnea NK: CD16, CD56.
-Antgenos no especficos de lnea: 7.1, CD34, CD45, HLA-DR.
WHO 2008 - TUMORES
HEMATOPOYTICOS Y LINFOIDES
MIELOIDES :
- Neoplasias mieloproliferativas
- Neoplasias mieloides y linfoides con
eosinofilia y anormalidades de PDGFR
- Neoplasias Mieloproliferativas y
Mielodisplsico
- SMD
- Leucemias mieloides agudas y
neoplasias precursoras relacionadas
- Leucemias Agudas de Linaje Ambiguo
WHO 2008 - TUMORES
HEMATOPOYTICOS Y LINFOIDES

LINFOIDES:

- Neoplasias linfoides precursoras

- Neoplasias maduras B
- Neoplasias maduras T y NK
- Linfoma Hodgkin
- Desrdenes linfoproliferativos
asociados a inmunodeficiencias
- Neoplasias histiocticas y dendrticas
 PAS Fosfatase-cida
 LLA Ph + t(9:22)
(q34;q11.2)
LLA-B
CD19
cCD79a
cCD22

CD10, CD22, CD24, TdT

CD20,CD34,CD45 variable
CD13,CD33 Ag asociados

LLA-T
cCD3, CD7 ,TdT,
CD1a,CD2,CD3,CD4,CD5.CD8
CD10
CLASIFICACIN DE MADURACIN DE
PRECURSORES LINFOIDES
Precursores B-ALL: CD79a+ CD19+ CD34+ o -
- B I pro-B (CD10-/IgM-/CD20-)
- B II comn (CD10+/IgM-/CD20+)
- B III pre-B (CD10+/CyIgM+/CD20+)
- B IV madura (CD10-/SmIgM+/CD20+)

Precursor T-ALL:
-TI (CD7+/CyCD3+)
- T II (CD2+ y/o CD5+ y/o CD8+)
- T III (CD1a+/CyCD3+)
- T IV (CD1a-,SmCD3+)
 LMA: CLASIFICACIN FAB

FAB Leucemia Serie

M0 Mieloblstica mnimamente diferenciada Granuloctica

M1 Mieloblstica sin maduracin Granuloctica

M2 Mieloblstica con maduracin Granuloctica

M3 Promieloctica Granuloctica
Granuloctica y
M4 Mielomonoctica
monoctica
M5 Monoblstica/monoctica Monoctica
Eritroblstica y
M6 Eritroide
granuloctica
M7 Megacarioblstica Megacarioctica
 LMA: CLASIFICACIN EGIL

Lnea mielomonoctica:
-MPO+, CD13+, CD33+, CD65+ y/o CD117+ (al menos dos
marcadores positivos).
Lnea eritroide (M6):
Inmaduro: inclasificable por marcadores.
Maduro: Glicoforina A +.
Lnea megacarioctica (M7):
CD41+ y/o CD61+ (de superficie o citoplasmticos); habitualmente
CD34+, CD33+ y/o CD13+.
Mieloide (M0):
Inmunofenotipo idntico a las de linaje mielomonoctico con citoqumica
negativa para MPO y con antgenos especficos de lnea linfoide (CD3,
CD79a, CD22) negativos.
LMA TdT+.
LMA con marcadores linfoides (Ly+LMA).
 LMA: CLASIFICACIN EGIL

Score Linfoide B Linfoide T Mieloide

2 CD79ac CD3 CD3c MPO
IgMc Anti-TCR
CD22c
1 CD19 CD2 CD117
CD20 CD5 CD13
CD10 CD8 CD33
0,5 TdT CD10 CD65
CD24 TdT CD14
CD7 CD15
CD1a CD64
Una puntuacin de 2,5 se considera suficiente para asignar linaje.
CD79a puede ser tambin expresado en una subpoblacin de
leucemia / linfoma linfoblstico T.
 LMA: CLASIFICACIN MIC-M

Anomala cromosmica Subtipo FAB Genes participantes

t(8;21)(q22;q22) M2/M4 eto / aml-1
t(15;17)(q22;q21) M3 pml / rar
inv(16)(p13;q22) / t(16;16) M4-Eo myh-11 / cbf
t(9;11)(p21-22;q23) M5 af-9 / hrx
t(11;19)(q23;p13.1) mll / ell
t(11;19)(q23;p13.3 mll / enl
t(?;11)(?;q23) M4/M5 hrx
t(6;9)(q23;q34) M2/M4 dek / can
t(8;16)(p11;p13) M5 moz / cbf
inv(3)(q21;q26) / t(3;3) M4 evi-1 / evi-1
t(1;3)(p36;q21)
t(3;21)(q26;q22) evi-1? / aml-1
t(9;22)(q34;q11) M1 abl /bcr
t(1;22)(p13;q13 M7
 LMA: CLASIFICACIN OMS

LMA no clasificable en otra categora:

- Leucemia mieloide aguda indiferenciada (M0)
- Leucemia mieloide aguda mnima maduracin (M1)
- Leucemia mieloide aguda con maduracin (M2)
- Leucemia aguda mielomonoctica (M4)
- Leucemia aguda monoctica (M5a y M5b)
- Leucemia aguda eritroide (M6)
- Leucemia aguda megacarioctica (M7)
- Leucemia aguda con basofilia (M2 con basofilia)
- Panmielosis aguda con mielofibrosis
- Leucemias agudas bifenotpicas
 LMA CON DIFERENCIACION MINIMA LMA MO
INMUNOFENOTIPO:
Bajo SSC/FSC
Incidencia 2% - 7% Marcadores mieloides positivos
MPO- por citoqumica <3% MPO-/+ CD13+
CD33-/+ CD117+
Marcadores linfoides negativos

SSC/FSC

0 256 512 768 1024

FSC -Height ->
ISIDRO C ASTELLO C LIMENT MO.115
 LMA M0

CD45/SSC CD34/SSC CD117/SSC

100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104
CD45 APC -> C D34 FITC -> CD117 PE ->
ISIDRO CASTELLO CLIMENT MO.115 ISIDRO CASTELLO CLIMENT MO.115 ISIDRO CASTELLO CLIMENT MO.116

CD13/SSC CD33/SSC

100 101 102 103 104 100 101 102 103 104
CD13 PE -> C D33 FITC ->
ISIDRO CASTELLO CLIMENT MO.117 ISIDRO C ASTELLO C LIMENT MO.130
 LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA SIN MADURACION
LMA M1

Incidencia 15% - 20%

Blastos 90% C.N.E.
MPO+ 3% por citoqumica

INMUNOFENOTIPO:
No fenotipo caracterstico
Bajo SSC/FSC
MPO+ CD13+
CD34+ CD33+
CD15-/+ CD117+
 LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA CON MADURACION
LMA M2

Incidencia 10%
Blastos 30% - 89% C.N.E.
MPO+
>10% cel maduras linaje neutrofilico
<20% cel linaje monocitico

INMUNOFENOTIPO:
CD34-/+ MPO++
HLA-DR-/+ CD33+
CD117-/+ CD13+
CD15+/++ CD11b+

Dx.Dif: LMA sin Mad.

AREB,
LAMielomonoc.
LEUCEMIA AGUDA PROMIELOCITICA CON t(15,17)
(q22;q12) LMA M3
Incidencia 5% - 15% CID
Tipos: Hipergranular y Microgranular FSC/SSC

0 256 512 768 1024

FSC-Height ->
PEDRO PARRA SANJUAN MO.002

INMUNOFENOTIPO:
Alto SSC/FSC
MPO++h CD13+
CD33+hom CD117+
CD34- HLA-DR-
CD2-/+ (M3v) AUTOFLC.
LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA MIELOMONOCITICA
LMA M4
Incidencia 15% - 20%
Bl>20% incluye Promonocitos
Neutrofilos >20% Monocitos>20%

INMUNOFENOTIPO:

Blastos:
Bajo SSC/FSC CD13+
CD33+ CD34+
CD117+ CD11c+d

Monocitos:
CD34- CD117-
CD11b+ CD11c++
HLA-DR+ CD14++
CD64+
 LMA M4

FSC/SSC CD45/SSC CD34/SSC

0 256 512 768 1024 100 101 102 103 104

100 101 102 103 104
FSC-Height -> CD34 FITC ->
C D45 APC ->
VANESA VICEDO GRACIA SP.309 VANESA VICEDO GRAC IA SP.309
VANESA VIC EDO GRACIA SP.309

CD13/SSC CD33/SSC MPOc/SSC CD11c/SSC

100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104
CD13 PE -> CD33 PE -> MPOc FITC -> CD11c PE ->
VANESA VIC EDO GRACIA SP.306 VANESA VICEDO GRACIA SP.304 VANESA VICEDO GRAC IA SP.322 VANESA VICEDO GRACIA SP.315
LEUCEMIA AGUDA MONOBLASTICA Y MONOCITICA
LMA M5

Incidencia 15%

M5a M5b
 LMA M5
>80% linaje monocitico

INMUNOFENOTIPO: SSC/FSC CD56/SSC

CD4 + CD11b
CD64 CD36 +
CD14 +
CD14/CD45
LISOZIMAc +

CD13,CD33,CD15,
HLADR
MPO+/- CD13/CD33 CD11c/CD15 CD2/CD117

DxDif: LMA s/mad,

LMAdif.min, LMMC,LPA
 LEUCEMIA ERITROIDE AGUDA LMA M6

Incidencia 4% - 5%
L.E.Pura >80%
L.Mieloide/Eritroide >50%prec.er. SSC/CD45 CD71/CD45
>20%mielobl.

CD34/CD45 GA/CD34

INMUNOFENOTIPO:
Glicoforina A+ MPONeg
CD71+
CD34+
CD36+
 LEUCEMIA MEGACARIOCITICA AGUDA LMA M7

INMUNOFENOTIPO:
FSC/SSC CD61/SSC
Muy infrecuente
CD41+
Morfologia indifer.
CD42a+
>20% blastos
c/50%megacariocitico CD42b+
CD61+
CD45- +
MPO-
0 256 512 768 1024
FSC-Height ->
KEVIN ZUIGA YANZAPANTA BIS.023

MPOc/SSC CD41/SSC CD61/SSC

100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104
MP Oc PE -> CD41 FITC -> CD61 FITC ->
Incidencia: < 3% de las LA

1. Coexpresin de
antgenos de dos ms
lneas.
2. Pob.separadas de
blastos de mas de 1
linaje.
LA bifenotpica (mieloide y linfoide T)
CORRELACIN CON ALTERACIONES CITOGENTICAS ESPECFICAS

Adaptado de Orfao et al. Cytometry Part A 58: 62-71 2004

 LMA: INMUNOFENOTIPO Y PRONSTICO

CD34 Blastos inmaduros

Mal pronstico
CD56 Localizacin extramedular (LPA)
Mal pronstico en subgrupo de t(8;21) y t(15;17)
CD7 Mal pronstico
LMA inmaduras (M0, M1 en relacin con citogentica de mal
pronstico)
CD2 En LMA muy mal pronstico, excepto si hay inv(16): baja tasa de RC
CITOMETRA DE LNEA CELULAR
FLUJO ESTADIO
MADURATIVO

FACTORES PERFIL INMUNOFENOTPICO

EMR
PRONSTICO

MORFOLOGA
CITOQUMICA

CITOGENTICA + FISH DIAGNSTICO

BIOLOGA MOLECULAR INTEGRADO
CLNICA