Southern,

Northern e
Western
Blot Teorias e Aplicaes

Gerhard Wunderlich e Carsten Wrenger BMP-5777

Western Blot: Protenas
 Bloqueio: reduz as interaes no especficas entre membrana e o anticorpo

1 anticorpo: (monoclonal ou policlonal) especfico para a protena de interesse

2 anticorpo: (anti IgG espcie-espcifico) conjugado com uma enzima que

permite a identificao visual

Deteco: colorimtrica
quimioluminescente
fluorescente
radioativa
Western Blot:

-Proporciona um mtodo paracomparaesde protenas

anvel de expresso

-Diagnsticos mdicos (ex. Teste confirmatrio para HIV,

alm de outras doenas infecciosas, auto-imunes,
alergias, e outros)
Southern Blot: DNA
 Denaturao: digesto da dupla fita do DNA com enzimas de restrio
e o tratamento do gel com soluo alcalina (NaOH)

Transferncia do ssDNA para uma membrana: A membrana

aquecida (no caso da nitrocelulose) ou exposta a radiao ultravioleta (no
caso do nylon) para ligar permanentemente o DNA membrana.
Sonda Hibridizadora: uma molcula de DNA ou RNA cuja seqncia
conhecida (idntica ou complementar a seqncia de interesse). A sonda de
DNA marcada normalmente incorporando-se tomos radioativos ou
ligando-se corantes quimioluminescentes

Revelao: por uma auto-radiografia em um filme de raio-x, ou pelo

aparecimento de uma cor caso a marcao cromognica tenha sido usada.
Southern Blot:

-Anlises de sequncias genomicas, para verificar se

uma determinada seqncia de DNA est ou no
presente em uma amostra de DNA analisada

-Alteraes em um nico nucleotdeo; deteco de

inseres, delees e rearranjos; ordenamento de
fragmentos do DNA; fragmentos de cromossomo.
Northern Blot: mRNA
 Denaturao: adio de formaldedo, que funciona como um
desnaturante.

Transferncia do RNA para uma membrana: aquecimento (no caso da

nitrocelulose) ou exposio a radiao UV (no caso do nylon)

Altamente sensvel a RNAses

Sonda Hibridizadora: uma molcula de DNA ou RNA cuja seqncia

conhecida e complementar a seqncia de interesse, marcada
normalmente com tomos radioativos ou corantes quimioluminescentes

Revelao: exposio a filme de raio-x, ou pela deteco de

fluorescncia.
Northern Blot:

teis em estudo de expresso gnica (verificar se um determinado gene de

um genoma ou no transcrito em RNA)
Estudo de diferentes tecidos
Estudo do padro temporal de expresso de genes durante o crescimento do
indivduo
 Professor Sir Edwin M.
Southern

Southern, E. M.(1975). "Detection of specific sequences among

DNA fragments separated by gel electrophoresis".Journal of
molecular biology98(3): 503517

H. Towbin, T. Staehelin, J. Gordon. 1979. Electrophoretic transfer of proteins from

polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some
applications. PNAS