UNIVERSIDAD NACIONAL

M AYO R D E S A N M A R C O S

Facultad de Ing. Industrial

QUIMICA ORGANICA
DETERMINACIN
DE PROTEINAS
(Mtodo Kjeldahl)
 Proteinas
Balanza analtica, sensibilidad 0.1 mg.

Equipo Kjeldahl

Manto calefactor

pHmetro

Material usual de laboratorio.

 Material y Equipo
Balanza analtica, sensibilidad 0.1 mg.

Equipo Kjeldahl

Manto calefactor

pHmetro

Material usual de laboratorio.

 Reactivos
Acido sulfrico concentrado, p.a.

Sulfato de potasio o sulfato de sdio, p.a.

Sulfato cprico, p.a.

Solucin de hidrxido de sodio al 15 % . Disolver 150 g de NaOH

y completar a 1 litro.

Solucin de cido sulfrico 0.1 N. Tomar 2.7 mL de H2SO4 conc.

y completar a 1 litro luego estandarizar con Na2CO3 anhidro p.a.

Solucin de hidrxido de sodio al 30 %. Disolver 300 g de NaOH

y completar a 1 litro.

Solucin indicadora de rojo de metilo al 1 % en etanol. Disolver 1

g de rojo de metilo en 100 mL de etanol (95 %).
Solucin de hidrxido de sodio 0.1 N. Tomar 4 g de NaOH y enrasar a
1 litro con agua recientemente hervida y enfriada. Valorar con cido
succnico.

Acido brico al 3 % . Disolver 30 g de cido brico y completar a 1

litro.

Indicador de Tashiro: rojo de metilo al 0.1 % y azul de metileno al 0.1

% en relacin de
2:1, en alcohol etlico.

Solucin de cido clorhdrico 0.1 N. Tomar 8.3 mL de HCl conc. y

enrasar a 1 litro.
Valorar con Na2CO3 anhidro.
Procedimiento
Efectuar un ensayo en blanco usando una
sustancia orgnica sin nitrgeno Matraz de
(sacarosa) que digestin Kjeldahl
sea capaz de provocar la reduccin de los
derivados ntricos y nitrosos
eventualmente
presentes en los reactivos

Pesar al 0.1 mg. alrededor de 1 g de

muestra homogeneizada (m) en un
matraz de digestin
Kjeldahl.
3 perlas 0.5 g de
10g. sulfato 20 mL de
de vidrio sulfato
de sdio cido sulfrico
cprico

Agregar 3 perlas de vidrio, 10 g de

sulfato de potasio o sulfato de sdio,
0.5 g de sulfato
cprico y 20 mL de cido sulfrico
conc
 Conectar el matraz a la trampa de
absorcin que contiene 250 mL de
hidrxido de sodio al
15 %.
Los depsitos de sulfito sdico se eliminan con cido
clorhdrico.
Cuando la solucin de hidrxido de sodio al 15 %
adicionada de fenolftalena contenida en la trampa de
absorcin permanece incolora debe ser cambiada
(aprox. 3 anlisis ).

hidrxido
de
sodio al
15 %. incolora

cambiar
 Calentar en manta calefactora y una vez que la
solucin est transparente, dejar en ebullicin 15 a 20
min. ms.
Si la muestra tiende a formar espuma agregar cido
esterico o gotas de silicona antiespumante y
comenzar el calentamiento lentamente.
muestra tiende
a formar espuma

cido esterico

Calentar lentamente

Enfriar y agregar 200 mL de agua

Conectar el matraz al aparato de destilacin,

100 mL de NaOH al 30 %
 Destilar no menos de 150 mL en un matraz que lleve
sumergido el extremo del refrigerante o tubo
colector en:
a) 50 mL de una solucin de cido sulfrico 0.1 N, 4 a 5 gotas
de rojo de metilo y 50 mL de agua destilada. Asegurar un
exceso de H2SO4 para que se pueda realizar la
retrotitulacin. Titular el exceso de cido con NaOH 0.1 N
hasta color amarillo

50 mL de 50 mL de
4 a 5 gotas
cido agua destilada
de rojo de metilo
sulfrico 0.1 N

Exceso
de H2SO4 NaOH
b) 50 mL de cido brico al 3 %. Titular con cido clorhdrico
0.1 N hasta pH 4.6 mediante un medidor de pH calibrado
con soluciones tampn pH 4 y pH 7, o en presencia del
indicador de Tashiro hasta pH 4.6

Titular

50 mL de cido cido clorhdrico

brico al 3 % 0.1 N
 Cada cierto tiempo es necesario verificar la hermeticidad del
equipo de destilacin usando 10 mL de una solucin de
sulfato de amonio 0.1 N (6.6077 g/L), 100 mL de agua
destilada y 1 a 2 gotas de hidrxido de sodio al 30 % para
liberar el amonaco.

100 mL de 1 a 2 gotas de
10 mL de sulfato
agua destilada hidrxido de
de amonio 0.1 N
sodio al 30 %

Libera amoniaco
As como tambin verificar la recuperacin
destruyendo la materia orgnica de 0.25 g de
L(-)-Tirosina
 CALCULO Y EXPRESIN DE RESULTADOS

14 x N x V x
100
% N = -----------------------
m x 1000

14 x N x V x 100 x
factor
% Protena
=---------------------------------
Donde: m x 1000

V : 50 mL H2SO4 0.1 N - gasto NaOH 0.1 N o gasto de HCl 0.1 N

m : masa de la muestra, en gramos

factor:
6.25: para carne, pescado, huevo, leguminosas y
protenas en general
5.7 : para cereales y derivados de soya
6.38: leche
5.55: gelatina
5.95: arroz
Repetitividad del mtodo: La diferencia
entre los resultados de dos
determinaciones efectuadas una despus
de otra, por el mismo analista, no debe
exceder 0.06 % de
Nitrgeno o 0.38 % de protena.
En la planilla de resultados se indicar
mtodo utilizado, identificacin de la
muestra, peso de muestra, gastos de
titulacin, factor utilizado y resultados
obtenidos de la muestras en duplicado
con 2 decimales.