UNIDAD 6.

BIORREACTORES Y
CRECIMIENTO MICROBIANO.

Dr. Jorge Enrique Pliego

Sandoval
Los bio-procesos industriales
requieren de tres puntos
fundamentales:

Crecimiento microbiano eficiente

en grandes volmenes.

Acumulacin de metabolitos
secundarios en el cultivo.

Si el proceso implica bio-

conversin o produccin de
enzimas, que esto ocurra en las
condiciones de operacin del
proceso.
 Un biorreactor es un volumen
de control o sistema que
mantiene un ambiente propicio
para el crecimiento biolgico.

Estos biorreactores son

comnmente cilndricos, variando
en tamao desde algunos
mililitros hasta metros cbicos y
son usualmente fabricados en
acero inoxidable.
Los criterios iniciales de diseo de un
biorreactor son:

Tener caracterizadomorfolgica y
bioqumicamente el cultivo a usar.
Caractersticas hidrodinmicas del reactor: es
necesario minimizar los fenmenos de
transporte en el reactor, para evitar
gradientes de nutrientes, temperatura.

La cintica de crecimiento

bacteriana debe esta

Asegurar la estabilidad gentica del
ampliamenteimpidiendo
microorganismo, estudiada.
que se
estimulen mutaciones.

Esterilizacin lo ms barata posible, hasta el

punto que, a pesar de su importancia, y
segn el proceso, se llega a obviar.

Control de las condiciones ambientales (T,

pH,P,etc...).
Los criterios iniciales de diseo de un
biorreactor son:
Construccin y modo de operacin.

Facilidad para el escalamiento..

Inclusin de sistemas de
oxigenacin adecuados a las
exigencias del microorganismo.

Sistemas de muestreo para

determinar las condiciones internas del
biorreactor.

Adopcin de refrigeradores, para

mantener constantes las condiciones de
temperatura (la actividad microbiana genera
una gran cantidad de calor, que puede
afectar negativamente a la produccin).

Materiales no txicos (ni para el

microorganismo ni para el
Tipos de Biorreactores:
De lecho fijo o empaquetado. Los
microorganismos se encuentran en
una matriz empaquetada. Por lo
general, la alimentacin se
produce de forma vertical en
sentido ascendente.

En columna de burbujas. El sustrato

es el medio lquido en el que
estn inmersas las clulas,
aportndose ste por la parte
inferior del reactor. Se insufla gas
comprimido por la parte inferior
que, junto con una serie de bucles
externos, permite homogeneizar el
interior del reactor, suprimiendo
posibles gradientes.
Los bioprocesos se desarrollan e implementan de
diferentes maneras, en sus escalas de
laboratorio, piloto, y manufactura
El escalado puede definirse como
procedimiento para disear y
construirde GRAN ESCALA base de los resultados
sistema el
de experimentos con equipamiento de PEQUEA un
ESCALA.

El desempeo de los bioprocesos es afectado

por varios parmetros:
El diseo geomtrico
Las variables de operacin
Propiedades del fluido
Procesos de transporte
Cintica de los organismos

El diseo de un prototipo optimizado para lograr

la mayor produccin debe ser trasladado a gran
escala, considerando toda esta complejidad de
parmetros
 FUNDAMENTOS DE
CRECIMIENTO MICROBIANO.
El comportamiento de un microorganismo en
crecimiento es el resultado de la interaccin que se
produce entre el microorganismo y el medio ambiente
en el reactor, y que en rigor es el resultado de los
llamados efectores intra y extra celulares.

Los efectores internos estn representados por la

dotacin gentica intrnseca del organismo
considerado y por sus mecanismos de regulacin
metablica.

Estos ltimos pueden ser modiif cados por

alteraciones del medio ambiente o ms precisamente
por los efectores externos mientras que la existencia
de un gen depende de la especie del
microorganismo considerado.
 FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.
Fase I: Fase de latencia, no hay
mucho crecimiento celular, solo
sntesis de enzimas y ajuste de
la maquinaria celular para
adaptarse al medio.

Fase II: Fase exponencial de

crecimiento, que es
proporcional a la concentracin,
las rutas metablicas estn
ajustadas y el uso de sustrato
es ms eficiente.

Fase III: Fase estacionaria, el

crecimiento celular cesa por
limitaciones de sustrato o por
acumulacin de metabolitos en
el medio. A pesar de esto,
muchos productos son
producidos en esta fase, com
la penicilina.

Fase IV: Fase de muerte

celular, debido a acumulacin
de txicos en el medio o falta se
sustrato.
 FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

LEYES DE VELOCIDAD
En general , el desarrollo bacteriano se puede sintetizar
mediante al siguiente ecuacin:

Clulas + Sustrato ms clulas + Productos.

La expresin matemtica ms usada es la de crecimiento de

Monod:
r g = C C
(
r g =velocidad de crecimiento microbiano ,
gr
lts

C =Concentracin celular , ( )
gr
C
lt

) , (1s
=Velocidad especfica de crecimiento

C ) = crecimiento.
max
Mxima velocidad especfica de
1
max s Contante de Monod (gr/lt)
= K SS S KS
+C =
CS Concentracin de sustrato
(gr/lt)
 FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

LEYES DE VELOCIDAD
En algunos sistemas los productos inhiben el crecimiento celular,
por ejemplo, la fabricacin de vino; donde el desarrollo celular es
inhibido por el etanol. La ecuacin cintica, teniendo en cuenta este
fenmeno, es emprica y puede tomar la forma:
g obs

(
n

)
max C S C C Cp
r =k k obs = 1
KS C *p
( +C S

)
n = constante emprica.

Cp* = concentracin a la cual cesa el

crecimiento bacteriano.
Ecuacin de Tessier
Ecuacin
g max de Moser

r = (
1exp k
CS
]
CC
r g=
max C C
1+kC
[
C

)
 FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO

MICROBIANO.

Los factores que

intervienen son:
- Concentracin de
sustrato.
- Temperatura.
- pH
- Potencial redox.
- Concentracin de
oxgeno.
- Presin hidrosttica.
 FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

CLASIFICACIN DE BIORREACTORES

1Por su forma y tipo de

agitacin.
2De acuerdo a las fases:
homogeneos o heterogeneos.
3Por el tipo de operacin
(continuos, semicontinuos,
discontinuos)
4Biorreactores especiales: de
estado
slido y foto- biorreactores.
 ESTEQUIOMETRIA DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO.

La estequiometra del crecimiento bacteria es bastante compleja y vara de

acuerdo con la combinacin de microorganismo/sustrato y las condiciones
de cultivo.
Clulas + Sustrato ms clulas +
Productos.

Para relacionar a nivel macro, el sustrato consumido, las nuevas clulas

formadas y el producto generado, se usan los llamados, coeficientes de
rendimiento, (Yield coefficients)
Y C / S = Masa de celulas formadas = CC Y p/ =
Masa de producto formado = C p
Masa de sustrato consumido S C Masa de nuevas celulas C
C C
La formacin de producto se lleva a cabo en diferentes fases del
crecimiento celular. Cuando la formacin de producto se lleva a cabo de la
fase exponencial:
r =Y r =Y C max C C C S
p p/C g p/ C p/
C =Y C KS S
+C
 ESTEQUIMETRIA DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO.

Parmetro de mantenimiento celular (m)

m=
Masa de sustrato consumido solo para mantenimiento
Masa de celulasTiempo

Balance de masa para la utilizacin de

sustrato.

[ ] [ ] ] ]
Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad
neta de + neta de
neta de consumo = neta de muerte +
de sustrato de celulas de sustrato para formar prodcuto
consumo de sustrato para mantenimiento
consumo

[
[
BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y
SUSTRATO.

BALANCE DE MASA
CELULAR

BALANCE DE SUSTRATO
 BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y
SUSTRATO.
(Para un reactor BATCH)
Para un sistema sin flujos de entrada y salida.

CELULAS.

SUSTRATO

Consumo de sustrato en la
fase se crecimiento.

Consumo de sustrato en la
fase estacionaria.

Formacin de producto durante la fase

de crecimiento.
 BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y
SUSTRATO.

EJEMPLO 1.

Los siguientes datos fueron recopilados en un cultivo batch del microorganismo

Sacchromyces cerevisiae, con glucosa como sustrato.
Glucosa + Clulas -------> Ms clulas + Etanol
Tiempo Clulas Glucosa Etanol

Determinar, en base a estos datos:

yKS
Y S/C , Y C/ S , Y S/ P , Y P/S , Y P/C

,max
 BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y
SUSTRATO.
EJEMPLO 1.

a) Calcular el coeficiente de rendimiento de sustrato, para csa hora de

crecimiento:
* Entre la hora cero (0) y una (1) hora.

* Entre la hora uno (2) y la hora dos (3).

b) Coeficiente de rendimiento de sustrato:

 BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y
SUSTRATO.

c) El coeficiente de rendimiento producto a masa celular:

K que son los parmetros del modelo

Ahora calcularemos max
s
y de Monod.
rg max C C C S

= K S +C
S
Para hallar los valores, se usa linealizacin de la ecuacin de Monod,
con la forma de Hanes-Woolf.
 BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y
SUSTRATO.

1 Ks
rg =
+C max C c C s
Kss
C
1= +
r s Cc
max C s C c max C s
g rg
Cc Ks Cs
1= +
rg
max C s C c max

(
C c CKc s 1 1 1
= max + Cs
rg C s max

)
Y= mX + b

dC c max =0,33 h1 K S=0,33 lt1

rg
= dt
 El Quimiostato: el reactor continuo
ideal de tanque agitado

El uso de reactores continuos de tanque agitado, con el fin de extender la

duracin de un cultivo microbial, se implement en la dcada de 1950
por Novick y Szilard (1950) y Monod (1950)

El hecho que un reactor continuo de tanque agitado se poda utilizar para

mantener el crecimiento microbial en su valor de estado estacionario, el cual
puede variarse desde cualquier velocidad de crecimiento hasta la mxima
m max , fue un avance muy importante, ya que acab con la tradicional
manera de pensar en el sentido que el tiempo para el crecimiento
estacionario de los microorganismos era nicamente posible a la mxima
velocidad, correspondiente al tiempo mnimo de replicacin que aparece en
los cultivos por lotes.
 El Quimiostato: el reactor continuo
ideal de tanque agitado

Por consiguiente, el empleo de biorreactores continuos de mezcla completa

para el estudio de la fisiologa microbial, condujo a importantes avances en
la comprensin del ciclo celular, la regulacin metablica y la formacin de
productos.

La agitacin se puede lograr por medio de impulsores o por el movimiento

de la fase lquida debido al ascenso de burbujas de gas. En los sistemas
aerobios, el suministro de oxgeno a los microorganismos se lleva a cabo,
generalmente, por burbujeo de aire.

En el caso ideal la fase lquida est completamente mezclada, es decir, la

composicin del lquido es uniforme en todos los puntos de la mezcla de
reaccin. De forma similar, la temperatura se mantiene constante y uniforme
por medio de la circulacin de agua de enfriamiento, bien sea por
serpentines que se encuentran dentro del reactor, o por el interior de una
chaqueta que rodea el recipiente de reaccin. Por lo general, el pH del
medio de cultivo se controla con la adicin de cido o de base.
 El Quimiostato: el reactor continuo
ideal de tanque agitado

Balances de materia para el reactor, por cada uno de los componentes

importantes:
Acumulacin = Entrada Salida + Generacin.

Clulas: d (C c
V )dt = F e Cc0 sal C c + (Cc
F V)

dC
dt
c
() (
=
F e

V
C c0
F
V
sal
Cc+
Cc

) F
Si definimos Fe = Fsal y una nueva variable llamada Velocidad de
dilucin:
D= max C C C S
Cc
V = K S +C
c0 DC c+ C
dC c
dt = S
Para una operacinDC c
en estado estacionario y entrada de medio de cultivo
estril:
dCc DCc0 =0 DCc= D=
dt =0 c
 El Quimiostato: el reactor continuo
ideal de tanque agitado

Sustrato: d (CsV )
1
dt = Fe Cs0 Fsal C s Y c / (Cc
V) s

(
dC s F 1
= (C s 0 C s ) c
dt
Y c /s C
V
dC s
) 1
dt =D (C s0 C s ) c
Y c/ s
C
Para el estado
estacionario:
dC s 1
dt =0 0=D (C s0C s) C
cY/
s

D (Cs0 C s )=Y 1c/

c
c

C s
 El Quimiostato: el reactor continuo
ideal de tanque agitado

Combinando dos ecuaciones que hemos obtenido:

D= Cc max C C C S
K S +C S
=

D Cc= max C C C S
K S +C S

DK s
CS
= max
D
El crecimiento especfico puede ser controlado por la velocidad
de dilusin.