ESTRUCTURA DEL NUCLEO

Dr. Mario Monteghirfo

 Ncleo Celular
Fue la primera estructura intracelular que se
descubri.
El dibujo ms antiguo que se conserva de este
orgnulo se remonta a uno de los primeros
microscopistas, Anton van Leeuwenhoek (1632
1723). Este investigador observ un hueco o
"lumen", el ncleo, en eritrocitos de salmn.
En 1804 tambin fue descrito por Franz Bauer.
El anlisis de la subestructura nuclear fue difcil
debido a las limitaciones de tecnologa del
microscopio.
Ncleo Celular
Es la carcterstica principal que
diferencia las clulas eucariticas
de las procariticas
FUNCIONES DEL NCLEO
CELULAR
Almacenar los genes en los cromosomas.
Centro de control celular
Organizar los genes para la divisin celular.
Transportar factores y productos.
Producir mensajes codificados para la
sntesis de las protenas.
Producir los ribosomas
Organizar el desenrrollamiento del DNA
Estructura del ncleo
celular
El ncleo de la clula eucaritica tiene una morfologa
comn.
El contenido del ncleo se aprecia como una masa viscosa
amorfa rodeada por una envoltura nuclear compleja.
Los ncleos varan en tamao de aproximadamente un
micrmetro (1 m) a ms de 10 m de dimetro.
La mayora de las clulas tienen un solo ncleo, pero
algunas clulas contener mltiples ncleos (miocitos) y
unos pocos tipos de clulas carecen de ncleos (eritrocitos
maduros).
El porcentaje del genoma que es heterocromatina vara
entre las clulas y aumenta a medida que las clulas se
hacen ms diferenciada.
NUCLEO INTERFSICO
1. Los cromosomas, visibles como fibras
muy largas de nucleoprotena llamada
cromatina.
Estructuralmente los cromosomas no son
uniformes en toda su extensin.
Heterocromatina, zonas condensadas
genticamente inactivas.
Eucromatina, zonas no condensadas y
genticamente activas.
 2. La matriz nuclear, que es una
red fibrilar que contiene protenas
3. Uno o ms nucleolos, que
participan en la sntesis del RNA
ribosmico y en el ensamblaje de
los ribosomas.
NUCLEO INTERFSICO
El nucleoplasma, sustancia lquida
en la cual se disuelven los solutos
del ncleo.
Los cromosomas ocupan distintos territorios

Aunque el ncleo carece de

membranas internas, esta
muy organizado y tiene
muchos subcompartimentos.
Cada cromosoma ocupa una
regin distinta o territorio, lo
que impide que los
cromosomas se enreden
entre s.
El ncleo tiene tanto
dominios de cromosoma
(donde se ubica la
cromatina) como regiones
intercromosmicas (libres de
cromatina)
Arquitectura del Ncleo
Celular
Debido al nfasis que se puso al
estudio de los mecanismos
moleculares y bioqumicos de la
expresin de los genes, el anlisis
de estructura nuclear se volvi una
preocupacin secundaria.
Arquitectura del Ncleo
Celular
En los aos ochenta el uso de microscopia
de fluorescencia para estudiar las
protenas especficas en el ncleo de
clulas qumicamente fijadas renovaron el
inters por descubrir los detalles de la
arquitectura nuclear.
Estos estudios establecieron la existencia
de varias estructuras intranucleares
morfolgicamente discernibles.
Arquitectura del Ncleo
Celular
Se han hecho grandes esfuerzos
para relacionar stos hitos
estructurales dentro del ncleo con
las funciones nucleares, sobre todo
la expresin del gen.
El uso de molculas fluorescentes
ha acelerado el estudio de la
arquitectura nuclear.
Arquitectura del Ncleo
Celular
Permiten la visualizacin y el anlisis
cuantitativo de la cromatina, mRNA y
protenas en las clulas vivas.

Los estudios han revelado dos

aspectos fundamentales de
arquitectura nuclear, esenciales para
la comprensin de la funcin nuclear:
Arquitectura del Ncleo
Celular
1. El ncleo contiene diferentes
subcompartimientos.
2. El ncleo es un organela muy
dinmica.
Compartimientos
nucleares
El ncleo celular contiene distintas
substructuras.
Las estructuras se caracterizan por
la ausencia de membranas que los
delimiten.
Se consideran compartimientos
por las siguientes razones:
Compartimientos
nucleares
1. Tienen subconjuntos de protenas
especficas.
2. Pueden identificarse morfolgicamente
mediante microscopa de luz y
microscopa electrnica.
La mayora de ellos han sido visualizados
recientemente en clulas vivas usando
microscopa de fluorescencia.
Compartimientos
nucleares
Algunos compartimientos pueden
aislarse bioqumicamente en forma
enriquecida.
Los compartimientos del ncleo mejor
estudiados son:
Nucleolo
Compartimientos de los factores de
empalme (splicing-factor compartments)
SFCs.
Compartimientos
nucleares
El cuerpo de Cajal (CB).
El cuerpo de la oncoprotena de la
leucemia promeiloctica (PML).
Cuerpos nucleares puntuales
pequeos.
Compartimientos de factores de
empalme los y sitios de transcripcin
La transcripcin tiene lugar en los miles
de puntos discretos distribuidos a lo
largo del ncleo.
La ARN pol II esta presente en estos
puntos.
Por consiguiente, los sitios de
transcripcin pueden ser sitios de
splicing del pre-mRNA.
SFCs y sitios de
transcripcin
La mayora de los factores para el
splicing del pre-mRNA se localizan y
almacenan en dominios distintos a los
sitios de transcripcin
Luego se mueven hacia los sitios de
transcripcin donde funcionan
Estos sitios son los SFCs o
Compartimientos de los factores de
empalme.
SFCs y sitios de
transcripcin
La funcin de los SFCs
parece ser el
almacenamiento y
ensamblaje de los
componentes del
spliceosoma.
Esto apoya el concepto de
que todas las maquinarias
procesadoras de RNA
estn fsicamente ligadas
a la maquinaria de
transcripcin.
SFCs y sitios de
transcripcin
Los factores de
empalme estn
concentrados.
Los sitios mas difusos
donde pueden
detectares son sitios de
procesamiento de pre-
mRNA.
La actimonicina D causa
el bloqueo de la
transcripcin.
NUCLEOLO
Es la subestructura que mas
destaca en el ncleo.
Las clulas de mamferos contienen
entre 5 a 10 millones de ribosomas
que deben sintetizarse cada vez
que la clula se divide.
El nucleolo es una fbrica de
produccin de ribosomas
Nucleolo
Son regiones del nucleoplasma que
se tien fuertemente con un conjunto
de colorantes y metales pesados.
Son los lugares de sntesis de
molculas de rRNA y de las protenas
ribosomales.
Estn compuestos de genes para
rRNA, molculas de RNA y muchas
protenas.
NUCLEOLO
El nuclolo es la subestructura
nuclear ms sobresaliente.
Se ensambla alrededor de las
regiones de los cromosomas que
contienen los genes para los rRNAs
(genes de rDNA) 5.8S, 18S y 28S
repetidos en tandem.
Son transcritos por la RNA pol I
Genes Ribosomales
Procesamiento del pre-
rRNA
Genes Ribosomales
El genoma humano tiene aproximadamente
unas 200 copias del gen que codifica para los
ARNr 5,8S, 18S y 28S
Aproximadamente 2,000 copias del gen que
codifica para el ARNr 5S.
Los genes del ARNr 5,8S, 18S y 28S se disponen
en tndem en cinco cromosomas humanos
diferentes (cromosomas 13,14,15, 21 y 22);
Los genes para el ARNr 5S se localizan en una
nica secuencia en tndem en el cromosoma 1.
NUCLEOLO
Las regiones que tienen las series en
tndem de los genes rDNA constituyen
las regiones del organizador nucleolar o
RON.
NUCLEOLO
Los RON son la base de la organizacin
estructural del nuclolo.
Son responsables de todo el procesamiento
y ensamblaje de los componentes
requeridos para la biosntesis del ribosoma.
Morfolgicamente esta dividido en tres
componentes distintos que refejan el
proceso vectorial de la biognesis del
ribosoma.
NUCLEOLO
1. Los centros fibrilares
2. Los componentes fibrilares
densos (DFCs) que rodean a los
centros fibrilares.
3. Los componentes granulares
que se disponen radialmente a
partir de los DFCs.
NUCLEOLO
Los genes rDNA estn ubicados en
los centros fibrilares.
Los DFCs son los subdominios
nucleolares donde se acumulan
transitoriamente los transcritos
primarios.
El procesamiento de los pre-rRNA se
termina en los componentes
granulares.
ENVOLTURA NUCLEAR
Es la estructura de frontera entre
el ncleo y el citoplasma.
Tiene una organizacin compleja
La separacin del material
gentico celular del citoplasma es
la caracterstica mas importante
que distingue a los eucariontes de
los procariontes.
ENVOLTURA NUCLEAR
Tiene 2 membranas
Cada una de ellas tiene la
estructura tpica de una membrana.
Las membranas encierra una bolsa
saco aplanada y se conectan en los
sitios donde estn los poros
nucleares.
ENVOLTURA NUCLEAR
La membrana mas externa es
continua con el retculo
endoplsmico el cual tiene
ribosomas unidos (RER).
El espacio entre las membranas
externa e interna tambin es
continuo con el espacio del retculo
de endoplsmico rugoso
ENVOLTURA NUCLEAR
El espacio intermembrana se
puede llenar de las protenas
recientemente sintetizadas as
como sucede con el retculo
endoplsmico rugoso.
La envoltura nuclear est rodeada
por una red de filamentos para su
estabilidad.
LAMINA NUCLEAR

La superficie interna
de la envoltura
nuclear se encuentra
revestida por una red
fibrilar densa,
denominada lmina
nuclear, excepto en
los poros nucleares.
Caractersticas estructurales y
funcionales de la lmina nuclear
Consiste de filamentos intermedios
de 30-100 nm de espesor.
Estos filamentos intermedios son
polmeros de lmina, con un rango
de peso molecular de 60-75 kD.
Las lminas tipo A estn hacia
adentro, prximas al nucleoplasma
Caractersticas estructurales y
funcionales de la lmina nuclear
Principalmente se expresan en
clulas diferenciadas.
Las laminas C son idnticas a las
laminas A excepto por una
extensin de 90 aminoacidos .
Lamina Nuclear
Las lminas tipo B estn cerca de
la membrana nuclear interna.
Pueden unirse a las protenas
integrales de la membrana interna.
Las lminas participan en la
organizacin funcional del ncleo.
Lmina Nuclear
Las evidencias indican que tienen un rol en
el ensamblaje y desensamblaje del ncleo
celular antes y despus de la mitosis.
La fosforilacin de las lminas dispara el
desensamblaje de la lamina nuclear y esto
causa que el ncleo celular se rompa en
vesculas.
La desfosforilacin revierte el proceso y
permite que el ncleo se forme de nuevo.
Adems de las laminas, la
lamina nuclear tiene un
conjunto de protenas integrales
de membrana llamadas
protenas asociadas a la lamina
(LAP).
Algunas median las
interacciones
entre la lmina y la membrana
nuclear interna.
La lmina est anclada a la
membrana nuclear interna por
dos tipos de interacciones.
. Un tipo es entre las protenas
lamina y las protenas integrales
de membrana de la membrana
nuclear interna.
. El segundo tipo de interaccin
se produce por la unin de la
cadena del polipptido lamina a
un lpido farnesilo en la
Lamina Nuclear
Mutaciones en los genes que codifican para las protenas
de la lamina nuclear causan diferentes enfermedades
hereditarias especficas de tejido denominadas
laminopatas.
Mutaciones en el gen LMNA que codifica para las laminas
A y C causa la distrofia muscular de Emery-Dreifuss.
La prevalencia estimada es de 1 en 300.000
Los individuos afectados los codos, el cuello y los talones
se vuelven rgidos. Luego aparecen problemas cardiacos
y puede ser necesario un marcapaso.
Se produce una debilidad y degeneracin gradual de los
msculos del hombro, brazo superior y de la pantorrilla.
Progeria
Es unaenfermedadgentica de la infancia
muy rara.
Presentaenvejecimientobrusco y prematuro
en nios entre su primer y segundo ao de
vida.
Esta rara afeccin la padece uno de cada 7
millones de recin nacidos vivos.
Es una laminopatas, que son enfermedades
genticas debidas a mutaciones en el gen
LMNA, que codifica para laslaminasA y C.
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
El trfico molecular entre el ncleo
y el citoplasma en las clulas en
interfase sucede va el complejo de
poro nuclear (CPN).
CPN, ensamblajes
supramoleculares que estn
embebidos en la doble membrana
de la envoltura nuclear
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
Los NPC proporcionan canales perifricos
de aproximadamente 9 nm en dimetro.
Permiten la difusin de iones y molculas
pequeas
Median el transporte selectivo de
protenas nucleares, RNAs y de partculas
ribonucleoproteicas (RNP) mediante
mecanismos dependientes de energa.
Poro Nuclear
Las molculas sin carga de menos de 100 Da
pueden pasar a travs de las membranas de la
envoltura nuclear.
Las molculas y macromolculas de ms de 100
Da cruzan la envoltura nuclear mediante
movimiento a travs de los NPC.
Las partculas de hasta 9 nm de dimetro
(protenas globulares de hasta 40 kDa) pueden
pasar a travs de NPCs por difusin pasiva,
como pueden tambin metabolitos, nucletidos
y otras molculas pequeas.
Poro Nuclear

Las macromolculas
ms grandes son
transportadas
activamente a travs
de los NPC y debe
contener informacin
especfica para ser
transportadas.
Los poros nucleares son
canales simtricos
Los NPC son estructuras simtricas que se
encuentran en los sitios donde la membrana
nuclear interna y externa se fusionan.
Cada NPC en las clulas humanas tiene una
masa de aproximadamente 120 106
40 veces la de un ribosoma
Est construido a partir de mltiples copias de
alrededor de 30 protenas.
Los NPCs contienen fibrillas que se extienden
hacia el citoplasma y una estructura de
canasta que se extiende hacia el ncleo.
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
La estructura del poro nuclear se ha
estudiado mediante microscopia
electrnica.
Se ha definido un modelo general
de su armazn.
El CPN de los vertebrados tiene una
simetra ctuple (perpendicular al
plano de la envoltura nuclear)
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
Una arquitectura tripartita, con una
masa total aproximada de 120 Mda.
El armazn central tiene un
ensamblaje similar a un anillo
constituido de 8 radios multidominio.
Cada radio consiste de 2 mitades casi
idnticas
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
La mitad de un radio representa
1/16 de su masa,
aproximadamente el tamao de un
ribosoma.
El armazn central se intercala
entre un anillo citoplasmtico de
32 MDa y un anillo nuclear de 21
MDa.
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
Del anillo citoplasmtico salen 8
fibrillas.
El anillo nuclear sujeta una canasta ,
la cual esta constituida de 8
filamentos delgados de 50 nm de
longitud.
La estructura central similar a un
anillo contiene el poro central que
acta como un canal con compuertas.
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
El poro nuclear frecuentemente es
taponeado con una partcula
distinta, llamada tapn central o
transportador.
El tapn central tiene una
apariencia muy variable cuya
estructura y significado funcional
falta determinar.
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
Empleando microscopia de fuerza
atmica (AFM) se estudio la envoltura
nuclear de oocitos de Xenopus laevis
colocados en solucin buffer.
Se observ apertura y cierre
repetitivo de la canasta nuclear en
respuesta a la adicin y remocin de
cantidades micromolares de calcio.
COMPLEJO DE PORO
NUCLEAR
El anillo distal de la canasta acta como
un diafragma similar a un iris sensible al
calcio.
La protena Nup 153, es una
nucleoporina que forma parte el anillo
distal y que interviene en la importacin
de protenas y la exportacin de mRNA.
La topografa citoplasmtica del CPN
parece ser insensible al calcio
Los complejos de poro nuclear
estn construidos a partir de
nucleoporinas
Las protenas de los CPN se llaman nucleoporinas.
Muchas nucleoporinas tienen repeticiones de secuencias cortas tales
como
Gli-Leu-Fe-Giy,
X-Fen-X-Fen-Gli, y
X-X-Fen-Gli,
Se cree que interactan con factores de transporte durante el
transporte.
Algunas nucleoporinas son protenas transmembrana que fijan los NPCs
en la envoltura nuclear.
Se han identificado todas los nucleoporinas de CPN de levadura y la
mayora de las nucleoporinas del NPCs de mamferos.
Los NPCs se desmontan y vuelven a montar durante la mitosis.
Algunas nucleoporinas son dinmicas: se asocian a los CPN y se
disocian con los mismos con rapidez.
Transporte de
macromolculas a travs del
CPN
El transporte de las macromolculas

incluyendo al mRNA , tRNAs y

subunidades ribosomales fuera del
ncleo y el transporte de las protenas
traducidas en el citoplasma al ncleo
ocurre a travs de los poros nucleares.
Las protenas de hasta 40 kD pueden
difundir a travs del canal lleno de agua
del CPN (0.9 nm de dimetro).
Transporte de
macromolculas a travs
del
Las CPN
protenas grandes y los complejos
ribonucleoproteicos no pueden difundir
libremente.
Son selectivamente transportados hacia
el interior o hacia fuera del ncleo con
la ayuda de protenas transportadoras
solubles que se unen a macromolculas
y tambin interactan con las
nucleoporinas.
Transporte de protenas al
ncleo
Son transportadas a travs del CPN.
Las protenas a ser transportadas tienen
una seal de localizacin nuclear (NLS)
que dirigen su transporte selectivo al
ncleo.
NLS, es una secuencia rica en aminocidos
bsicos cerca del extremo carboxi terminal
en la protena: Pro-Lis-Lis-Lis-Arg-Lis-Val.
El sistema de transporte requieren de
cuatro protenas:
Las secuencias de localizacin nuclear direccionan
protenas hacia el ncleo

La identificacin de este NLS se

basa en dos tipos de
experimentos.
En primer lugar, una mutacin de
la lisina 128 a treonina en el
antgeno T da lugar a una protena
que ya no puede al ncleo debido
a que el NLS se desactiv.
Las mutaciones de aminocidos
fuera de la NLS no tienen ningn
efecto sobre la importacin
nuclear.
Estos resultados muestran que NLS
es necesaria para localizacin
nuclear.
La GTPasa Ran controla la direccin del
transporte nuclear
La Ran es una GTPasa pequea que es comn a todos
los eucariontes.
Se encuentra tanto en el ncleo como el citoplasma
La protena Ran-GAP promueve la hidrlisis del GTP por
Ran
La protena Ran-GEF promueve el intercambio de GDP
por GTP sobre Ran
Ran-GAP es citoplasmtica
Ran-GEF se ubica en el ncleo
Transporte de protenas al
ncleo
Ran, es una protena G monomrica que
existe en dos conformaciones, una
cuando est unida a GTP y la alternativa
cuando el GTP es hidrolizado a GDP.
El factor de transporte nuclear 2 (NTF2).
Importina alfa
Importina beta
Transporte de protenas al
ncleo
Las dos importinas
forman un receptor de
importacin
heterodimrico.
La importina alfa se une
al NLS y la importina
beta interacta con una
clase en ncleoporinas
llamadas nucleoporinas-
FG y de esta manera
difunde el cargo.
Transporte de protenas al
ncleo
En el nucleoplasma, la interaccin de Ran-GTP con la
importina causa un cambio conformacional que disminuye
su afinidad por la NLS, liberando el cargo.
Para poder realizar otro ciclo de importacin, el complejo
importina-Ran-GTP es transportado de nuevo al citoplasma.
Una protena GTPasa aceleradora (GAP) asociada con los
filamentos del citoplasma del NPC estimula a Ran a
hidrolizar el GTP ligado.
Esto genera un cambio conformacional que causa la
disociacin de la importina, la cual puede iniciar otra ronda
de importacin.
Factor transportados 2 (NTF2) se une a Ran-GDP y regresa
al nucleoplasma, donde un factor intercambiador de
nucletidos (GEF) causa la liberacin del GDP y la unin del
GTP.
Mecanismo para la importacin al ncleo de
protenas cargo
Transporte de protenas al
ncleo
El transporte es unidireccional.
Debido a la existencia de un
gradiente de concentracin del
complejo importina-cargo a travs
del poro nuclear.
Tambin a la distribucin asimtrica
de Ran-GEF y de Ran-GAP
Transporte hacia fuera del
ncleo
Se utiliza un mecanismo
muy similar para exportar
las protenas, tRNAs y
subnidades ribosomales del
ncleo al citoplasma.
Las protena a ser
exportadas tienen una seal
de exportacin nuclear (NES)
que estimula su exportacin
del ncleo al citoplasma a
travs del CPN.
NES ricos en leucina.
Transporte hacia fuera del
ncleo
En el nucleoplasma, la protena exportina 1 se une
cooperativamente a la NES de la protena cargo a ser
transportada y a Ran-GTP.
El complejo cargo resultante se difunde a travs del NPC va
interacciones con las FG nucleoporinas.
El Ran-GAP asociado con los filamentos citoplasmticos estimula
la conversin de Ran-GTP to Ran-GDP. El cambio conformacional
inducido en Ran determina la disociacin del complejo.
La protena cargo que tiene NES es liberada al citosol y la
exportina 1 el Ran-GDP es regresado al ncleo a travs del NPC.
Ran-GDP es transportado al nucleoplasma debido a su
interaccin con NTF2.
En el nucleoplasma Ran-GEF estimula la conversin de Ran-GDP
a Ran-GTP.
Mecanismo de exportacin
nuclear
Importinas
Las importinas son altamente
homlogas en secuencia y
estructura.
La familia completa se denomina
familia importina beta o
carioferinas.
Hay 14 carioferinas en levaduras y
20 en mamferos.